邓巍
- 作品数：9 被引量：31H指数：4
- 供职机构：中国科学院生物物理研究所更多>>
- 发文基金：中国科学院知识创新工程国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 神经营养因子GDNF编码顺序的克隆及表达产物的纯化
- 1998年
- 根据基因库中的顺序，设计了胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）基因的ＰＣＲ引物，以此从人基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了ＧＤＮＦ的编码序列，经ＤＮＡ测序确认后，该片段克隆到表达质粒ｐＥＴ－３ａ中，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）．培养的重组菌经ＩＰＴＧ诱导，在Ｔ７启动子调控下表达出ｈＧＤＮＦ蛋白．经电泳分析表明ＧＤＮＦ主要存在于细菌包涵体中．从培养菌中制备包涵体，经充分洗涤，溶解于含８ｍｏｌ／Ｌ尿素的变性缓冲液中．经ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析分离，梯度洗脱，以１５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检查含ＧＤＮＦ的部分．将含单体ＧＤＮＦ部分进行复性，再次用ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子柱分离同源二体ＧＤＮＦ．最后经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ制备电泳纯化，纯度大于９５％．经Ｎ端测序表明序列正确．经测定，每升培养菌可得约１０ｍｇ纯化的ＧＤＮＦ．
- 陈燕张瑛李金照邓巍邓巍邱蓉
- 关键词：神经营养因子
- 外源基因在蛙神经元中的表达被引量：1
- 1997年
- 含 β 半乳糖苷酶基因的真核表达载体DNA ,直接注射到视神经切断或正常的黑斑蛙的视网膜中 .注射 2周后 ,观察到蛙视网膜神经细胞仍然有转染基因表达 ,这种基因转染对神经元的类型没有选择性 .被转染神经元主要局限于注射点周围 .蛙视神经切断后 。
- 夏另朝李金照陈燕邱蓉张瑛邓巍
- 关键词：基因转染基因表达外源基因神经元
- 针对SARS冠状病毒重要蛋白的siRNA设计(英文)被引量：4
- 2003年
- NA干涉 (RNAinterference ,RNAi)是一种特异性地导致转录后基因沉默的现象 ,在哺乳动物细胞中小分子干扰RNA双链体 (smallinterferingRNAduplexes ,siRNAduplexes)可以有效地诱导RNAi现象 ,为一些疾病的治疗开辟了新的途径 .针对SARS冠状病毒 (SARScoronavirus ,SARS CoV)中编码 5个主要蛋白质的基因 ,用生物信息学的方法设计了3 48条候选siRNA靶标 .在理论上 ,相应的siRNA双链体能特异地抑制SARS CoV靶基因的表达 ,同时不会影响人体细胞基因的正常表达 。
- 张勇徐静怡邓巍张楠蔡伦赵义卜东波陈润生
- 关键词：SARS冠状病毒蛋白SIRNA生物信息学RNA干涉
- 胶质细胞源神经营养因子基因克隆及产物纯化被引量：1
- 1996年
- 用ＰＣＲ方法从人基因组ＤＮＡ中扩增出胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）的编码序列，使它在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达并纯化了重组ＧＤＮＦ．
- 陈燕张瑛李金照邓巍夏另朝邱蓉
- 关键词：胶质细胞神经营养因子基因克隆提纯
- 脑源神经营养因子基因转染神经断端促进切断坐骨神经再生被引量：14
- 1997年
- 为了研究体内表达的脑源神经营养因子（Ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄＮｅｕｒｏｔｒｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＢＤＮＦ）对脊髓运动神经元存活及切断神经再生的作用，我们将人ＢＤＮＦｃＤＮＡ克隆到真核表达载体ｐＣＢ６中，使ＢＤＮＦ基因在ＣＭＶ启动子控制下表达。在雏鸡出生后３小时内及第二天直接将ｐＣＢ－ＢＤＮＦｃＤＮＡ·ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ混合物注射到坐骨神经预切断位点附近肌肉内。第二天切断坐骨神经，神经切断１０天后进行实验检测，观察到，ＢＤＮＦｃＤＮＡ转染阻止了切断神经一侧的腰脊髓内（Ｌ４－Ｌ６）运动神经元的大量死亡。并显著的促进了切断坐骨神经的再生。这些结果表明直接注射含ＢＤＮＦｃＤＮＡ的质粒对损伤的神经进行基因治疗，具有良好的前景；ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导重组质粒进行基因转染是导入外源基因到体内的一个可行方法。
- 李金照陈燕夏另朝邱蓉张瑛邓巍
- 关键词：神经营养因子基因治疗坐骨神经损伤
- 人脑源性神经营养因子基因表达被引量：4
- 1998年
- 用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）从人基因组ＤＮＡ中扩增了人脑源性神经营养因子（ｈＢＤＮＦ）ｃＤＮＡ和ｈＢＤＮＦ成熟蛋白编码片段，分别克隆到ｐＵＣ１８中．经测序确认两个插入片段序列正确．ｈＢＤＮＦｃＤＮＡ在ＣＭＶ启动子控制下在ＮＩＨ／３Ｔ３细胞中表达，用ＲＴＰＣＲ检测转染细胞确有ＢＤＮＦｍＲＮＡ存在．ＢＤＮＦ成熟蛋白编码序列在Ｔ７启动子控制下在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达，ＳＤＳＰＡＧＥ表明，ＢＤＮＦ得到表达，以包涵体形式存在．
- 陈燕张瑛李金照邓巍夏另朝邱蓉
- 关键词：PCR基因表达
- 胶质细胞源神经营养因子cDNA全序列的克隆及其生物学功能的研究被引量：3
- 1999年
- 为了研究ＧＤＮＦ在神经系统中的生物学功能，通过ＲＴ－ＰＣＲ方法从大鼠睾丸总ＲＮＡ中扩增出ＧＤＮＦｃＤＮＡ全序列，序列分析表明与ＧｅｎＢａｎｋ中的顺序完全相同．将ＧＤＮＦｃＤＮＡ以非融合方式连接在真核表达载体ｐＥＧＦＰ－ＮⅠ的绿色荧光蛋白的上游，在ＣＭＶ启动子控制下表达．通过绿色荧光蛋白报告基因的表达表明ＧＤＮＦｃＤＮＡ能在真核细胞ＨｅＬａ中很好表达．采用裸ＤＮＡ转染方法研究ＧＤＮＦ对损伤的坐骨神经的修复作用，在雏鸡出生后３ｈ切断其右侧坐骨神经，将ｐＥＧＦＰ－ＧＤＮＦ与Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ的混合物注射到坐骨神经切断位点附近肌肉内，５ｄ后追补一次．２０ｄ后进行实验检测，观察到ＧＤＮＦｃＤＮＡ的转染阻止了切断神经侧的腰脊髓内［Ｌ４－Ｌ６］运动神经元的大量死亡，并显著促进了切断坐骨神经的再生．
- 段峰海张瑛夏另朝邱蓉邓巍李金照陈燕
- 关键词：GDNF坐骨神经CDNA
- 用生物信息学方法发现跨染色体剪接的嵌合5'/3'UTRs
- 2004年
- mRNA的5 /3 UTRs是在mRNA翻译过程中起重要调控作用的序列,在5 /3 UTRs上不正常的剪接模式可能导致多种严重疾病.提出了一种基于大规模序列比对分析搜寻5 /3 UTRs跨染色体剪接现象的方法,并用此方法得到8例可信度高的跨染色体的5 /3 UTRs剪接事件,从信息的角度证实了来自不同染色体序列剪接成为5 /3 UTRs的现象是真实存在的.对这8例跨染色体剪接产生的5 /3 UTRs用多序列比对在剪接区域没有发现一致保守的motif.同时,目前的预测算法也不能在剪接区域检测到特异性的RNA二级结构,因此很难确定引导5 /3 UTRs跨染色体剪接的信号.
- 张治华张勇石宝晨邓巍赵屹陈润生
- 关键词：染色体生物信息学剪接RNA二级结构嵌合多序列比对
- GDNF及BDNF对受损运动神经元的长期修复被引量：4
- 1999年
- 为了研究胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ） 及脑源神经营养因子（ＢＤＮＦ） 对切断轴突的新生运动神经元的长期维持存活及促进神经再生的作用， 我们选用出生时单侧切断坐骨神经的雏鸡模型， 用裸ＤＮＡ 转染方法， 在损伤神经附近的肌肉中转染ＧＤＮＦ ｃＤＮＡ 和ＢＤＮＦ ｃＤＮＡ 的真核表达载体，观察在体表达的神经营养因子对损伤的修复作用。结果显示，在体表达的ＧＤＮＦ 在８ 周内能使切断坐骨神经的腰脊髓运动神经元近９０ ％ 维持存活。切断的坐骨神经从断端向远体端再生，最长再生达９ ．５ｍ ｍ 。表达两个因子比单独表达ＧＤＮＦ 对运动神经元的存活无显著性差异。而两个因子协同作用对坐骨神经的再生更为有效，坐骨神经再生最长的可达１５ ．４ｍ ｍ 。
- 夏另朝邱蓉张瑛邓巍李金照陈燕
- 关键词：GDNFBDNF神经营养因子运动神经元损伤
