王炯
- 作品数：8 被引量：4H指数：1
- 供职机构：武汉生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 冻干龋齿DNA疫苗稳定性观察被引量：1
- 2013年
- 目的 观察中试阶段制备的冻干龋齿DNA疫苗的稳定性。方法 将中试阶段制备的3批冻干龋齿DNA疫苗于-70℃放置16个月,每隔2个月对其外观、溶解时间、水分、溶解后pH值及质粒超螺旋比例进行观察及检测。结果 在16个月的观察中,冻干龋齿DNA疫苗外观呈乳白色疏松体,溶解时间小于1min,水分约3%,pH值在7.30～7.46之间;保存16月的3批冻干龋齿DNA疫苗的质粒超螺旋比例达85.02%～97.15%,各项指标均合格,稳定性好。结论 冻干龋齿DNA疫苗符合＂预防用DNA疫苗临床前研究技术指导原则＂中的各项指标,疫苗质量较为稳定。
- 王炯吴浩飞闭兰张爱华
- 关键词：龋齿DNA疫苗稳定性超螺旋
- 龋齿DNA疫苗(PGJAP)中污染大肠杆菌噬菌体的检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 龋齿DNA疫苗工程菌采用的大肠杆菌DH-5α在生产过程中极易污染大肠杆菌噬菌体,所以应对原始菌种、主菌种和工作菌种及大量生产时的发酵液作大肠杆菌噬菌体检测。用大肠杆菌噬菌体VCSM13为标准噬菌体株,对大肠杆菌C3000和DH-5α分别作噬菌斑检测和pfu值计算,验证并确定以VCSM13作为标准噬菌体株,C3000作为检测菌株,对龋齿DNA疫苗原始菌种、主菌种(第一代)、工作菌种(2007001)和其发酵液(200703)分别作噬菌体检测,并建立了检测大肠杆菌噬菌体的直接噬菌斑法。结果显示VCSM13在DH-5α的噬菌斑计数为76,pfu/ml为7.6×1013,C3000的噬菌斑计数为81,pfu/ml为8.1×1013,龋齿DNA疫苗的原始菌种、主菌种、工作菌种和发酵液,噬菌斑计数全部为0。Pfu也为0。阳性对照为74,pfu/ml是7.4×1013,阴性对照为0。通过对阳性对照样本作增殖法试验及挑斑接种验证后,证明此法操作简单,灵敏度高。
- 赵亚杰闭兰罗丹王炯齐建新马荣华张爱华
- 关键词：DNA疫苗大肠杆菌噬菌体
- 重组变形链球菌表面蛋白抗原(PAC)的表达和纯化
- 目的：进行PAC蛋白的表达和纯化，获得高纯度的抗原用于进行抗体检测。
方法：将转化了克隆有PAC蛋白基因的PET载体(PET-PAC)的大肠杆菌进行诱导表达，表达产物经Ni离子金属螫合层析纯化，并进行SDS—P...
- 闭兰罗丹王炯赵亚杰吴小丽齐建新张爱华
- 关键词：表面蛋白抗原变形链球菌龋齿DNA疫苗效力试验
- 文献传递
- 预防龋齿DNA疫苗(PGJAP)大肠杆菌噬菌体检测方法的建立
- 研究背景预防龋齿DNA疫苗(PGJAP)的临床前研究是武汉生物制品研究所和武汉大学口腔医院,中国科学院病毒研究所,华中科技大学共同承担的研究课题,现已正式列入国家科技支撑计划中的《人用重大传染病疫苗的产业化关键技术研究》...
- 赵亚杰闭兰罗丹王炯齐建新马荣华张爱华杨晓明
- 文献传递
- 冻干龋齿DNA疫苗稳定性观察
- 研究背景DNA疫苗作为第三代疫苗,与传统疫苗相比能够有效诱导细胞和体液免疫反应、技术通用性强、研发周期短、生产和运输成本低等优点,在病毒性、细菌性、寄生虫疾病、肿瘤和变态免疫反应的预防和治疗等领域显示了良好的应用前景。本...
- 王炯闭兰赵亚杰罗丹齐建新张爱华杨晓明
- 文献传递
- DNA疫苗质粒Ag85A/DH5α工程菌大规模发酵工艺的优化
- 目的：优化重组质粒DNA DH5α工程菌发酵工艺条件。
方法：控制相关发酵参数，观察溶解氧浓度、生长速率和培养时间对工程菌生长和质粒浓度的影响。
结果：发酵培养对数生长期溶解氧浓度控制在30％～50％...
- 齐建新王炯闭兰赵亚杰项美娟张爱华
- 关键词：工程菌发酵工艺溶解氧浓度DNA疫苗
- 文献传递
- 中试生产的结核DNA疫苗免疫效能研究被引量：1
- 2012年
- 目的以300L发酵罐中试规模生产的冻干Mtb Ag85A质粒DNA疫苗为基础免疫小鼠,对该疫苗的免疫效能进行研究。方法将4～6周龄的BALB/c小鼠20只通过数字表法随机分为2组,一组免疫MtbAg85A质粒DNA疫苗(结核DNA疫苗免疫组),另一组免疫PBS作为阴性对照(PBS对照组);于免疫前采血,肌内注射免疫3次。在第3次免疫后3周摘眼球处死小鼠,收集血清,进行血清特异性抗体检测和细胞因子(IFN-γ、IL-4)检测;同时对每只小鼠取脾细胞进行特异性γ干扰素(IFN-γ)分泌检测和脾细胞CD4+、CD8+百分率检测。结果 (1)免疫前后免疫组与对照组抗体水平吸光度A值均小于0.2。(2)结核DNA疫苗免疫组血清细胞因子IL-4水平[(146.2±34.3)pg/ml]低于PBS对照组[(177.7±28.1)pg/ml],差异有统计学意义(t=2.244,P=0.038),而IFN-γ水平[(129.6±159.0)pg/ml]虽然高于PBS对照组[(76.5±21.5)pg/ml],但差异无统计学意义(t=-1.047,P=0.309)。(3)酶联免疫斑点检测结果表明结核DNA疫苗免疫组脾细胞特异性IFN-γ分泌水平(分泌IFN-γ细胞个数)(103.60±112.14)高于PBS对照组(5.78±5.83),差异有统计学意义(t=36.538,P=0.018)。(4)结核DNA疫苗免疫组CD4+细胞百分率均值(21.57%)高于PBS对照组(12.17%),差异有统计学意义(t=3.043,P=0.038);CD8+细胞百分率均值(13.70%)与PBS对照组(10.57%)相比,差异无统计学意义(t=0.847,P=0.445)。结论Mtb Ag85A质粒DNA疫苗主要刺激机体Th1型细胞免疫,而对诱导机体产生Th2型细胞免疫应答没有显著的促进作用。
- 吴小丽闭兰赵亚杰罗丹齐建新王炯李忠明
- 关键词：疫苗DNA抗原免疫活性
- 竞争ELISA法检测抗新型冠状病毒RBD单抗阻断活性方法的建立及验证
- 2020年
- 目的:建立竞争ELISA法测定抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2) RBD单克隆抗体对RBD与ACE2蛋白结合的阻断活性,并对方法进行验证,同时与蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)测得的活病毒中和活性进行比较及相关性分析。方法:以RBD-Fc为包被抗原,加入ACE2-His和抗SARS-CoV-2 RBD单抗,两者竞争性结合RBD,使用辣根过氧化酶标记的抗6×His抗体作为二抗,建立检测抗SARS-CoV-2 RBD单抗阻断RBD与其受体ACE2结合的竞争ELISA法,并对该方法进行专属性、相对准确度、精密度、线性和范围的验证。采用该方法对7株SARS-CoV-2单抗阻断活性进行检测,并将结果与PRNT法检测结果进行比较及相关性分析。结果:建立的竞争ELISA法能有效检测抗SARS-CoV-2 RBD单抗阻断RBD与ACE2蛋白结合的作用,其阻断能力存在量效关系,且符合四参数方程;理论效价为64%,80%,100%,125%,156%的样品测定10次,相对偏倚均在±20%范围内;以效价理论值的对数(横坐标)对其相应的效价测定值的对数(纵坐标)作直线回归,回归方程为y=1.156x-0.021 3,斜率在0.8~1.25之间,相对准确度良好。每个效价水平相对效价测定值的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)分别为2.6%,5.2%,3.6%,3.4%和10.2%,均<20%,精密度良好;直线回归方程相关系数为0.985,线性符合要求。本方法相对准确度、中间精密度和线性均符合要求的效价水平范围为64%~156%。7株SARSCoV-2 RBD单抗的检测结果与PRNT法检测结果具有较好的相关性。结论:成功建立了抗SARS-CoV-2 RBD单抗竞争ELISA的检测方法,该方法具有良好的专属性、相对准确度、精密度和线性,并与PRNT法检测结果具有较好的相关性,可用于间接评价相关SARS-CoV-2单抗对活病毒的中和活性。
- 潘勇兵张囡詹珊珊桂芳王炯宋刚吴小丽杨晓明
- 关键词：新型冠状病毒单克隆抗体竞争ELISA
