杨金环
- 作品数：9 被引量：22H指数：4
- 供职机构：安徽大学生命科学学院安徽省生态工程与生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生理学更多>>
- 甘薯NBS-LRR类抗病基因同源序列的克隆、分析及数目研究被引量：7
- 2008年
- 根据植物抗病基因保守序列设计特异引物,对甘薯高抗茎线虫病品种AB94078-1、感病品种徐18及其8个后代品系进行PCR扩增。获得15个具有完整氨基酸读码框的片段,均具有NBS类抗病蛋白4个保守基序,其中5个片段含LRR结构。利用从亲本AB94078-1扩增的R510-AB作为探针进行Southern杂交,结果表明,其在基因组中存在多个拷贝,并估计其在基因组中的拷贝数目,克隆新的甘薯RGA序列,为进一步获得甘薯抗病基因打下基础。
- 屈满义查向东王钰杨金环蒋琳阮龙
- 关键词：甘薯抗病基因同源序列NBS-LRRSOUTHERN杂交
- 应用寡核苷酸探针检测甘薯基因组中NBS与LRR序列数目
- 2009年
- 以含编码NBS及LRR结构域序列的PCR扩增产物作标准对照,根据P-LOOP模体及LRR结构域氨基酸序列设计寡核苷酸探针,应用Southern杂交定量检测甘薯基因组中NBS与LRR序列的拷贝数目。结果表明,甘薯基因组中存在多个拷贝的NBS与LRR编码序列,经计算初步获得了其在基因组中的拷贝数目,为揭示甘薯抗病分子机制及植物抗病分子育种打下基础。
- 屈满义查向东王钰杨金环蒋琳
- 关键词：甘薯NBS-LRR寡核苷酸探针SOUTHERN杂交
- 颗粒裂解肽G13结构域的重组表达及蛋白质结构预测被引量：2
- 2009年
- 基因工程构建表达是获得抗菌肽的一种成本较低的方法,本实验人工合成G13结构域编码DNA序列,PCR扩增后,用T-A克隆法与pBAD/TOPO ThioFusion表达载体连接,通过PCR鉴定筛选出正确重组质粒,在大肠杆菌Top10中对目的蛋白进行表达,大肠杆菌工程菌经阿拉伯糖诱导后取样,用SDS-PAGE检测表达情况,采用生物信息学方法对表达蛋白的结构特征进行模拟分析。结果显示:目的蛋白在原核系统中实现了高效表达,表达量高达67%以上,主要以包涵体形式表达。蛋白结构预测结果显示,目的蛋白原有的α螺旋活性结构无改变,从而为抗菌肽高效生产提供了有效可靠的研究途径。
- 方红查向东杨金环刘小强屈满意
- 关键词：颗粒裂解肽蛋白质结构
- 融合头的改变对抑制重组抗菌肽毒性的影响(英文)被引量：1
- 2010年
- 为进一步完善G13结构域的原核表达系统,人工合成编码G13的基因片段,PCR扩增后克隆于原核表达载体pET28a中,构建的重组质粒pET28a-G13转化于E.coli BL21(DE3)中。另外对pET28a-G13进行突变,改变其G13片段N端上游处的融合头的电荷数,转化于E.coli BL21(DE3)中。构建pThiohisA突变体并与pET28a-G13共转化于E.coli BL21(DE3)中。用诱导剂诱导所构建的各个工程菌,然后比较A600值变化及蛋白表达量,分析不同的融合头对G13毒性抑制效果,发现融合头对G13毒性抑制效果与其净负电荷数及酸性氨基酸的相对位置有关。
- 王作利查向东周鹏刘小强杨金环方红
- 关键词：阳离子抗菌肽共表达
- 阿尔采末病的发病机制、早期诊断及治疗的新策略被引量：4
- 2007年
- 阿尔采末病(Alzheimers disease,AD)是一种常见的慢性进行性精神功能衰退性疾病。近年来在AD的早期诊断和治疗方面有了很大发展。该文就AD的发病机制、早期诊断及治疗方面在近几年的进展作一综述。
- 杨金环黄河胜查向东陈青峰
- 关键词：阿尔采末病发病机制
- 颗粒裂解肽G13结构域的克隆及在大肠杆菌中的表达
- 颗粒裂解肽(Granulysin)是细胞毒性淋巴细胞CTL和天然杀伤细胞NK内的颗粒中含有的一种多肽,天然颗粒裂解肽和重组颗粒裂解肽都具有广谱抗菌活性。对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌、寄生虫等均具有杀伤活性,尤其是对...
- 杨金环
- 关键词：颗粒裂解肽广谱抗菌活性大肠杆菌化学合成
- 文献传递
- 颗粒裂解肽G13结构域在大肠杆菌中的高效融合表达被引量：7
- 2009年
- 为高效表达颗粒裂解肽G13结构域并避免G13对宿主菌的毒性,将人工合成的编码G13的基因片段,PCR扩增后克隆于原核表达载体pThioHisA中,构建了重组表达载体pThioHisA-G13,将其转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达融合蛋白Trx-G13,表达产物以包涵体的形式存在,其表达量约占细菌总蛋白的58%。包涵体蛋白经8 mol/L尿素溶解后,再经CNBr切割,阳离子交换层析,得到纯化的重组G13结构域。琼脂糖扩散法检测表明重组G13结构域多肽具有抗菌活性。
- 刘小强查向东肖亚中杨金环李能树
- 关键词：颗粒裂解肽阳离子抗菌肽
- 蛇毒抗菌多肽基因克隆、表达及结构功能鉴定
- 张部昌李能树杨金环刘晓强方红查向东肖亚中
- 该项目通地基因工程的技术原理方法，生产阳离子类抗菌肽，并对其结构和功能进和分析。其创新点是：表达产量高于相关研究报导；利用特定载体的自身融合头负电荷，无需额外添加融合头，并且在试验结果分析的基础上，首次对融合头的电荷分布...
- 关键词：
- 关键词：基因工程
- 颗粒裂解肽G13结构域的表达及其对大肠杆菌活力的影响被引量：9
- 2008年
- 目的构建携带颗粒裂解肽G13结构域的原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达目的蛋白,并检测其对大肠杆菌活力的影响。方法人工合成G13结构域编码DNA序列,PCR扩增后,用T-A克隆法与pBAD/TOPOThioFusion表达载体连接。通过PCR鉴定及测序筛选阳性重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经阿拉伯糖诱导表达,SDS-PAGE检测表达情况,同时监测诱导表达前后工程菌A600值的变化及菌液中的突变体。结果工程菌经诱导,表达出相对分子质量约15000的特异蛋白,表达量占菌体总蛋白的3%左右。随着外源蛋白的表达,菌液A600值下降,随后又缓慢上升。提取的质粒测序结果表明,其启动子的-35区和-10区均发生了突变,随着诱导时间的增加,突变细胞的比例不断增加。结论已成功构建了G13结构域原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达出G13融合蛋白。该异源蛋白的表达导致工程菌的活力降低。
- 杨金环查向东方红刘小强屈满义
- 关键词：颗粒裂解肽原核表达大肠杆菌
