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徐康维: 作品数：42 被引量：46H指数：4; 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>; 发文基金：国际科技合作与交流专项项目北京市自然科学基金国家科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学经济管理更多>>

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抗H7N9流感病毒中和抗体快速检测方法的建立及应用: 2019年; 目的:对建立的抗H7N9流感病毒中和抗体快速检测方法进行方法学验证及初步应用。方法:分别采用不同代次细胞对高、中、低不同滴度的阳性血清进行多次平行检测,考察细胞代次对检验结果的影响;采用NIBSC提供的参考品对方法学的特异性进行验证;同时应用抗H7N9的阳性血清检测进一步评估方法的准确性和精密性;采用ELISA-MNT法和血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验分别接种H7N9灭活流感疫苗免疫的小鼠血清样本20份,分析两种方法检测结果的相关性。结果:采用ELISA-MNT中和法,使用不同代次MDCK细胞(25、30和35代)检测相同的血清样本的中和抗体滴度结果相同;该方法只对羊抗H7N9的血清具有较高保护力,对其他血清基本没有交叉反应;该方法准确性良好;该方法组间、组内精密性的平均变异系数分别为4%和11%。该方法测定H7N9型流感疫苗免疫后的小鼠血清抗体效价,其结果与HI抗体的相关系数为0. 61,表明两种方法的检测结果之间呈良好的正相关性。结论:建立的微量病毒中和法能够满足H7N9流感病毒中和抗体效价检测的要求,可用于H7N9新型大流行流感疫苗的免疫评价。; 赵慧李娟邵铭刘书珍徐康维李长贵; 关键词：中和抗体血凝抑制试验

基于NA活性检测细胞基质流感疫苗病毒滴度新方法的建立: 2020年; 目的:建立基于神经氨酸酶(neuraminidase,NA)活性检测细胞基质流感疫苗病毒滴度的新方法,并进行初步应用。方法:对NA活性检测使用底物的浓度和终止液类型、病毒感染靶细胞数目以及细胞裂解剂等反应条件进行优化,采用建立的方法检测细胞基质培养的流感疫苗毒种的病毒滴度,并与传统的病毒滴定法检测结果进行比较。结果:NA活性检测法的最适底物浓度为25μmol/L,最适终止液为0.2 mol/L Na 2CO 3。细胞数目为4×10^4个/孔,病毒感染48 h后,用0.5%TritonX-100裂解,检测细胞内复制病毒的NA活性,产生的相对荧光值最大。检测4批细胞基质培养的流感疫苗毒种病毒滴度,该方法与传统病毒滴定法检测结果差异无统计学意义(P>0.05),具有较好的一致性。结论:本研究建立了基于NA活性检测细胞基质流感疫苗病毒滴度的新方法,可用于生产过程中细胞基质流感病毒毒种的检定。; 赵慧王剑锋英志芳徐康维李娟李长贵; 关键词：神经氨酸酶

联合酶联免疫的微量病毒中和法检测大流行流感疫苗血清中和抗体的可行性研究: 2015年; 目的：建立联合酶联免疫的微量病毒中和法（ELISA-MVN法）,用于大流行流感疫苗流感病毒中和抗体效价的检测,并进行方法学验证。方法：采用4种羊抗流感病毒血清参考品,与人感染禽流感H5N1病毒疫苗株（A/Vietnam/1194/2004-NIBRG-14）病毒液,分别于37℃孵育18 h后,固定细胞,ELISA检测细胞内流感病毒核蛋白表达,确定其中和抗体效价,考察该方法的特异性;通过对高中低不同抗体滴度的血清样本的多次平行检测来评价该方法的重复性;通过ELISAMVN法和血凝抑制试验（HI试验）分别检测大流行流感疫苗接种者血清样本,比较2种方法的灵敏性和相关性。结果：ELISA-MVN结果显示羊抗H5N1的血清中和抗体检测滴度为5 120,其他3种血清的中和抗体滴度小于10,该方法特异性良好;采用ELISA-MVN法对3种不同滴度的血清进行重复检测,组内重复性试验的6次平行试验结果的RSD为3.5%。组间重复性5次结果,RSD为4.8%～8.6%。2种方法测定疫苗接种者血清样本抗体效价的结果具有显著相关性（P〈0.001）,相关系数r=0.932。ELISA-MVN法检测结果的几何平均滴度高于HI试验检测结果,该方法较HI试验在检测大流行流感疫苗血清样本灵敏度高。结论：ELISA-MVN可满足大流行流感疫苗血清学检测的要求,并可用于评价大流行流感疫苗的免疫效果。; 赵慧李娟刘书珍邵铭江征徐康维李长贵; 关键词：中和抗体效价检测酶联免疫血凝抑制试验

甲型H1N1流感疫苗中神经氨酸酶含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用被引量：4: 2016年; 目的建立甲型H1N1流感疫苗中神经氨酸酶（Neuraminidase,NA）含量双抗体夹心ELISA检测方法,并对其进行验证及初步应用。方法以HCA3通用抗体作为包被抗体,N1抗血清作为显示抗体建立双抗体夹心ELISA,确定线性范围,验证该方法的准确度及精密度,并用该方法对3个厂家共9批次甲型H1N1流感疫苗中的NA含量进行测定。结果 NA质量浓度在0~50 ng/m L时线性良好（r2〉0.99）;回收率为97.54%~104.02%;实验内CV〈10%,实验间CV〈15%。不同厂家的甲型H1N1流感疫苗中NA含量差异很大,NA与HA（血凝素）的百分比最高达到29.85%,而最低的只有7.00%;而同一厂家各批次疫苗间的NA与HA的比例较为稳定。结论成功建立了甲型H1N1流感疫苗中NA含量双抗体夹心ELISA检测方法,该法具有良好的线性及灵敏度,准确度和精密度高,能满足甲型H1N1流感疫苗NA含量的检测需求。; 徐康维顾琴邵铭何蕊刘书珍赵慧黎旭光李长贵; 关键词：流感疫苗神经氨酸酶血凝素酶联免疫吸附测定

甲型H1N1流感疫苗神经氨酸酶含量测定参考品的建立被引量：2: 2015年; 目的建立甲型H1N1流感疫苗神经氨酸酶含量测定参考品。方法对甲型H1N1流感疫苗原液进行还原电泳后,采用免疫印迹,糖蛋白染色,方法初步确定甲流H1N1疫苗原液中神经氨酸酶SDS-PAGE条带位置,切取条带后通过edman N端测序法进行确认。采用Lowry法进行总蛋白定量,SDS-PAGE密度扫描的方法确定神经氨酸酶比例,计算出疫苗原液中神经氨酸酶含量。结果确定甲流疫苗原液中神经氨酸酶在SDS-PAGE中相对分子质量约71 000,对多批次疫苗原液进行测定后,选取神经氨酸酶含量较高的批次进行测定,总蛋白质量浓度为1046.00μg/m L,神经氨酸酶质量分数11.78%。二者相乘得出该批次疫苗原液神经氨酸酶含量为123.22μg/m L。结论研究成功建立了甲型H1N1流感疫苗神经氨酸酶含量测定参考品,其他毒株生产的流感疫苗也可以参考该方法建立NA含量测定参考品。; 徐康维陶磊邵铭刘书珍李长贵; 关键词：神经氨酸酶流感疫苗参考品 SDS-PAGE 免疫印迹

流感病毒中和抗体检测方法的建立及验证被引量：4: 2014年; 目的建立检测流感病毒中和抗体效价的微量病毒中和法(microneutralization tests,MNT),并进行验证。方法建立改进的微孔板病毒中和法,并对该方法的关键影响因素(不同代次MDCK细胞和细胞培养板边缘效应)以及方法的准确性和精密性进行验证;采用改进的微孔板病毒中和法和血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验分别检测甲型H1N1流感疫苗免疫的血清样本85人份,分析两种方法检测结果的相关性。结果采用改进的微孔板病毒中和法,用不同代次MDCK细胞(25、30、35代)以及在细胞培养板不同位置(边缘孔、非边缘孔)检测相同的血清样本的中和抗体滴度结果相同;该方法准确性和精密性良好;改进的微孔板病毒中和法和HI法测定甲型H1N1流感疫苗免疫后血清抗体效价结果的相关系数为0.81,表明两种方法的检测结果之间呈良好的正相关性。结论建立的微量病毒中和法可满足流感病毒中和抗体效价检测的要求,可用于评价疫苗的免疫效果。; 赵慧江征李娟刘书珍邵铭徐康维李长贵; 关键词：流感病毒中和抗体血凝抑制试验

新型冠状病毒高效价中和血清的快速制备及应用被引量：6: 2020年; 目的制备新型冠状病毒高效价中和血清。方法使用重组表达的新型冠状病毒RBD蛋白作为免疫原,免疫SPF级家兔,制备抗血清。通过ELISA和微量中和试验检测抗血清效价。将制备的抗血清分发至我国多家新冠灭活疫苗研发企业,检测抗血清效价。结果经3次免疫后,抗血清的ELISA效价大于160万,中和效价为8192。5家企业返回微量中和效价检测结果的几何平均效价为6950。结论成功制备了新型冠状病毒高效价中和血清,并分发至我国多家新型冠状病毒灭活疫苗生产企业用于毒株鉴别及外源病毒因子检测,解决了制约疫苗快速研发的技术瓶颈。; 徐康维王剑锋权娅茹邵铭赵慧李长贵王军志; 关键词：新型冠状病毒抗血清

定量检测Ⅲ型Sabin株脊髓灰质病毒突变的荧光MAPREC法的建立和应用: 2018年; 目的:使用荧光标记代替同位素标记,建立定量检测Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒472位U到C突变比例的MAPREC(mutant analysis by PCR and restriction enzyme cleavage)法。方法:提取病毒样品RNA,反转录合成c DNA后进行非对称PCR反应以生成单链DNA扩增产物,之后采用荧光标记引物进行扩增,合成双链产物,以突变位点敏感的限制性内切酶作用后电泳分离,并分析样品的突变比例。结果:采用建立的方法对4个国际标准品进行检测,100%DNA突变标准品、IS DNA标准品、LMVR标准品以及HMVR标准品的标示值分别为100%、0.9%、0.7%、1.1%,检测结果分别为95.59%、0.84%、0.68%、1.07%,与其标示值一致性良好,并且不同实验间RSD均小于15%。检测9个批次样品,结果突变率均小于1%,符合WHO要求。结论:初步建立了基于荧光素标记的MAPREC方法,可以代替同位素法进行病毒突变的定量检测。; 徐康维张平英志芳何蕊王剑锋江征李长贵; 关键词：脊髓灰质炎病毒疫苗荧光标记突变率

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗D抗原含量检测方法的建立被引量：4: 2022年; 目的建立检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗中D抗原含量的双抗体夹心ELISA方法。方法采用纯化的D抗原制备鼠单抗和牛多抗,采用微量中和病变和间接ELISA检测抗体的效价与特异性。以牛多抗为包被抗体、小鼠单抗为显示抗体建立夹心ELISA检测D抗原含量的方法,并进行方法学验证。结果制备了高效价的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型牛多抗和鼠单抗,牛多抗微量中和效价分别为409 600、96 000和128 000,鼠单抗微量中和效价分别为256 000,128 000和256 000,并可与相应型别D抗原特异性结合。采用这些抗体成功建立了夹心ELISA方法,3个型别标准曲线线性良好,R^(2)>0.99。对所建立的方法进行验证,其结果显示,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型加标回收率分别为80.4%~117.7%、90.3%~111.6%、91.9%~111.3%,均在80%~120%范围内;实验内与实验间CV均<10%;并且能够有效区分D抗原与C抗原。采用国内5家企业生产的疫苗进行了适用性验证,结果显示方法适用性良好。结论成功建立了检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗中D抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,该方法具有良好的准确性与精密度,特异性强,并且能够检测不同企业生产的疫苗。; 徐康维朱文慧宋彦丽英志芳王剑锋权娅茹李长贵; 关键词：脊髓灰质炎灭活疫苗 D抗原酶联免疫吸附试验抗体

2011年流感疫苗批签发情况总结与质量分析被引量：2: 2012年; 流行性感冒（简称流感）是由流感病毒引起的急性呼吸道感染疾病。据统计,全球每年约有5%～15%的人口感染流感病毒,并导致300万～500万的严重病例和约50万的死亡病例。接种流感疫苗是预防流感发生与传播的有效手段。我国自2006年起对流感疫苗实行批签发。; 邵铭刘书珍邱平刘长暖袁力勇徐康维李长贵; 关键词：流感疫苗批签发血凝素

徐康维

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