张愉快
- 作品数：66 被引量：288H指数：10
- 供职机构：南华大学医学院病原生物学研究所更多>>
- 发文基金：湖南省教育厅科研基金湖南省卫生厅重点课题国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学农业科学更多>>
- 淋病奈瑟菌nspA与ltB融合基因的表达及其免疫活性被引量：1
- 2010年
- 目的表达LTB-NspA重组融合蛋白,鼻饲免疫雌性Balb/c小鼠,分析重组融合蛋白的免疫活性,为研制抗淋球菌蛋白疫苗提供实验依据。方法转化并鉴定pET30a/ltB-nspA原核重组质粒后,在E.coliBL21中表达重组融合蛋白。鼻饲途径免疫雌性Balb/c小鼠,检测NspA特异性体液免疫和细胞免疫水平。结果 LTB-NspA融合蛋白组生殖道黏膜产生的NspA特异性sIgA水平和血清IgG水平随免疫时间呈上升趋势,第6周sIgAA450nm达0.689,明显高于NspA组和LTB、蛋白溶解液(solution buffer)对照组(P<0.01);第6周血清中产生的特异性IgGA450nm值达0.734,明显高于LTB和Solution Buffer对照组(P<0.01);LTB-NspA组脾淋巴细胞刺激指数(SI)为1.63,明显高于LTB和Solution Buffer对照组(P<0.01);LTB-NspA组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原NspA刺激后,培养上清中IFN-γ和IL-4含量明显升高,分别达142.23pg/ml和86.14pg/ml,明显高于LTB和Solution Buffer对照组(P<0.01)。但LTB-NspA与NspA两组间血清IgG水平、SI、IFN-γ和IL-4水平差异不显著(P>0.05)。结论 LTB-NspA重组蛋白诱导小鼠产生了较高水平的特异性体液免疫和细胞免疫;首次证实黏膜佐剂LTB可辅佐NspA诱导小鼠产生高水平的生殖道黏膜免疫。
- 胡耀华胡四海戴志兵王健黄智勇张愉快余敏君陆春雪
- 关键词：淋病奈瑟菌重组蛋白免疫活性
- 应用环介导等温扩增技术检测弓形虫被引量：25
- 2008年
- 目的用环介导等温扩增(LAMP)技术检测弓形虫。方法用酚-氯仿法提取弓形虫速殖子基因组DNA,设计两对扩增弓形虫B1基因的LAMP引物。以间日疟原虫、恶性疟原虫、卡氏肺孢子虫、日本血吸虫及小鼠白细胞作对照,进行LAMP反应,产物经SYBRGreenI显色及电泳后观察结果,绿色判为阳性,棕色判为阴性。将弓形虫速殖子经倍比稀释为(2～3)×106个/ml至(2～3)×10-1个/ml等8个浓度,进行LAMP反应,验证该方法的敏感性。结果LAMP反应结果显示,弓形虫速殖子检测管经显色后呈绿色,对照组均呈棕色。弓形虫的LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,对照组均无扩增产物。LAMP技术可检测到的弓形虫速殖子最低浓度为2～3个/ml。结论LAMP技术在弓形虫检测中显示出较好的特异性与敏感性。
- 杨秋林张如胜伍和平张愉快王可耕
- 关键词：弓形虫环介导等温扩增技术
- 温度、光周期对致倦库蚊成虫前期存活、发育的综合影响模型
- 1994年
- 本文应用二次回归旋转设计定量描述了温度、光周期对致倦库蚊成虫前期各发育阶段发育速率、存活率的综合影响.列出了九种温度、光周期组合条件下的致倦库蚊成虫前期发育历期和存活率的实验数据,建立了回归模型,经卡方检验所有模型的模拟值与实测值均高度吻合(P≥0.998).模型可用以预测致倦库蚊成虫前期自然种群发育和存活情况,也可用作一种研究工具,在计算机上进行不同温度、光周期组合条件下的模拟试验.通过对模型进行解析,求出了温度的单因素影响模型.致倦库蚊成虫前期存活的最适水温是25.64℃.比较和统计检验双因素模型中的各项系数,可知温度是主要影响因素(P<0.01),而光期周几乎没有影响(P>0.2).
- 蒋杰贤张愉快高隆声
- 关键词：致倦库蚊温度光周期
- 503例泌尿生殖道患者阴道毛滴虫与尿素支原体感染状况分析被引量：5
- 1994年
- 本文报道用直接涂片法和培养法,从503例STD、CP和男性不育者标本中检查TV,结果显示:STD男250例,56例为阳性(22.40%);女94例,27例为阳性(28.72%).CP105例,16例为阳性(15.24%);男性不育者54例,12例为阳性(22.22%).TV与Uu混合感染率STD为11%,CP为4.70%,男性不育者为7.40%.本研究提示,在STD、CP和男性不育患者中.除检查性病病原体外,还应进行阴道毛滴虫检查.对混合感染者,除治疗细菌、支原体、衣原体外,应对阴道毛滴虫进行治疗.
- 李建军张愉快吴移谋
- 关键词：阴道毛滴虫尿素支原体泌尿道感染
- 维生素E抑制家兔肝脏日本血吸虫虫卵肉芽肿的实验研究被引量：2
- 1999年
- 本研究观察了维生素E对家兔体内日本血吸虫成虫和肝脏虫卵肉芽肿的作用。结果显示：维生素E对成虫无杀伤作用，而可抑制虫卵肉穿肿反应，虫卵肉穿肿直径较对照组小25.88％。说明：维生素E对日本血吸虫感染的家兔具有一定的保护作用，其机理可能与维生素E的抗脂质过氧化作用有关。
- 廖力张愉快刘彦王可耕
- 关键词：维生素E日本血吸虫虫卵肉芽肿
- 日本血吸虫7个基因全长cDNA的获取和分析
- 2004年
- 目的 从日本血吸虫成虫cDNA文库中分离、鉴定和分析全长cDNA序列 ,为日本血吸虫病的防治提供候选疫苗和药物靶点。方法 从构建日本血吸虫成虫cDNA文库中挑取重组阳性克隆进行 5’测序获取表达序列标签 (ExpressedSe quenceTag ,EST) ,在此基础上进行引物延伸法 (primerextension)测序 ,直至获取全长cDNA序列 ,将获取的基因登录Gen Bank ,并进行生物信息学分析。结果 获得 7个日本血吸虫全长cDNA序列 (GenBank登录号分别为AY336 4 93～AY336 4 99) ,其中 6个为日本血吸虫新基因 :类转录因子BTF3(similartotranscriptionfactorBTF3)、延长因子 1-α(elongationfactor 1-alpha ,EF1-α)、富含谷氨酰胺四联重复肽 (smallglutamine-richtetratricopeptide ,TRP)、鸟氨酸氨基转移酶 (ornithineaminotransferase,OA)、内皮差异相关因子 1(endothelialdifferentiation -relatedfactor 1,EDF - 1)和类基因转录增强因子 (similartotestisenhancedgenetranscriptprotein ,TEGT) ;另 1个是精氨酸酶 (arginase)基因 ,比原发现的基因序列长 4 5 6bp。生物信息学分析发现类基因转录增强因子为跨膜蛋白 ,具有 6个跨膜区 ;各基因与人、鼠、蟾和曼氏血吸虫等物种的基因有 37%～ 85 %的同源性 ;
- 曾桥肖建华万志刚张愉快廖力刘传爱杨秋林
- 关键词：日本血吸虫CDNA文库基因生物信息学
- 日本血吸虫成虫cDNA表达文库的构建及鉴定被引量：8
- 2002年
- 目的 通过构建日本血吸虫成虫 c DNA表达文库 ,免疫筛选全长目的基因 ,研究其结构和功能。 方法 采用 TRIZOL试剂提取日本血吸虫成虫总 RNA,Oligotex m RNA Midi Kit分离 m RNA,并用 Stratagene的建库试剂盒构建日本血吸虫 c DNA表达文库。 结果 构建的日本血吸虫成虫 c DNA表达文库容量为 2× 10 6 pfu/ ml,扩增后文库的滴度为 1.4× 10 7pfu/ ml。文库的重组率达到 96%以上 ,插入片段平均长度为 1.4kb。
- 杨胜肖建华张愉快曾桥杨秋林刘传爱王可耕应康唐蓉
- 关键词：日本血吸虫CDNA文库
- 日本血吸虫睾丸增强转录蛋白样蛋白基因的获得和分析
- 2004年
- 目的 从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)成虫cDNA文库中获得并分析日本血吸虫新的蛋白基因 ,为日本血吸虫病的防治提供侯选疫苗和药物靶点。 方法 构建日本血吸虫成虫cDNA文库 ,随机挑取重组阳性克隆进行测序 ,对部分序列进行步移法测序获取全长cDNA ,登录GenBank ,利用BLAST程序对同源性高的基因进行核苷酸和氨基酸水平的同源性比较 ;并利用 pcgene软件对其蛋白质结构进行初步分析。 结果 获得了 1个日本血吸虫新基因睾丸增强转录蛋白样蛋白 (testis -enhancedtranscriptprotein -likeprotein ,AY3 3 64 99) ,长 10 5 3bp ,编码 2 19个氨基酸 ,与睾丸增强转录蛋白样蛋白具有 5 5 %的同源性 ,编码蛋白的理论分子量为 7.2 198KDa ,等电点为 9.12 ;抗原表位可能位于cDNA序列 3 73～ 3 96处。 结论 步移法测序和生物信息学技术相结合有利于发现日本血吸虫新基因。
- 张愉快肖建华刘彦曾桥汪志刚曾谷清
- 关键词：日本血吸虫CDNA文库生物信息学基因
- 日本血吸虫pcDNA3.1(-)/Sj20.8真核表达及其对小鼠保护性免疫作用被引量：1
- 2006年
- 为检测日本血吸虫新基因Sj20.8作为核酸疫苗能否诱导小鼠产生保护性免疫作用,用PCR法扩增Sj20.8基因序列,构建重组质粒pcDNA3.1(-)/Sj20.8,肌肉注射免疫小鼠后检测发现,Sj20.8能在小鼠肌肉中短时间存在并有微弱表达,但未能诱导小鼠产生一定水平的保护性免疫。
- 曾桥肖建华万志刚廖力张愉快刘传爱杨秋林
- 关键词：日本血吸虫CDNA文库
- 2株重组弓形虫P30抗原单克隆抗体的制备和鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的制备重组P30抗原单克隆抗体,研究其生物活性。方法重组质粒pET28b-P30经BL21(DE3)表达,纯化、复性后免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备单克隆抗体。ELISA筛选阳性克隆,经亚克隆建株。体内诱生腹水法制备抗体,测定其亚类、效价,Western blot分析其特异性,双单抗夹心-ELISA测定其敏感度。双单抗夹心-ELISA法检测弓形虫感染鼠血清中的CAg。结果筛选出2株抗重组P30的单克隆抗体9D7、2H9,抗体重链分别为IgG2a、IgG1,轻链均为κ链,Western blot显示2株单抗均能识别弓形虫速殖体天然P30抗原。双单抗夹心-ELISA检测抗原量为0.5μg/ml;同法检测鼠血清中的CAg,感染第4、6、8 d的阳性率分别为20%、60%、60%。结论制备的P30抗原单克隆抗体具有较高的敏感性和特异性,为其应用研究打下了基础。
- 王际平杨秋林蔡亮张如胜张愉快邱玉华
- 关键词：杂交瘤技术单克隆抗体循环抗原
