吴小金
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
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- CD133^+人脐血造血祖细胞的干性维持培养及鉴定
- 2012年
- 目的从人脐带血中分选出CD133+造血祖细胞,并进行长时间干性维持培养。方法通过免疫磁珠法分选出人脐带血中的CD133+造血祖细胞,经流式细胞仪检测免疫磁珠分选后的CD133+造血祖细胞。采用五种方法扩增培养该细胞,8周后,再通过细胞形态学、流式细胞术、免疫细胞化学和免疫荧光对细胞进行干性鉴定,探索最佳干性维持培养方法。结果通过免疫磁珠法可以从人脐带血中分选出80%以上的CD133+造血祖细胞。采用优化的无血清培养基培养8周之后,CD133+造血祖细胞可得到有效扩增。而其他的培养基会使CD133+造血祖细胞由半悬浮细胞分化为梭形贴壁细胞,并且细胞状态欠佳。结论利用免疫磁珠法分选出的CD133+造血祖细胞,采用优化的无血清培养基能够有效扩增该细胞,并可长期有效的维持其干性。
- 吴小金陈芳陆滟霞杨慧彭璠莉袁理刘国炳李学农
- 关键词：人脐血造血祖细胞干性
- 靶向肿瘤干细胞标记CD133特异性结合肽的筛选和初步鉴定被引量：5
- 2011年
- 目的筛选可与人肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合的短肽并进行初步鉴定。方法首先合成人肿瘤干细胞表面标记物CD133细胞外片段的生物素化蛋白,以此为靶,利用噬菌体肽库技术,高通量液相淘选CD133的特异性短肽。应用夹心ELISA选择出结合较强的克隆。提取DNA测序,通过竞争性阻断实验验证其特异性,根据噬菌体基因序列推导出多肽序列。通过免疫荧光技术初步验证合成多肽和人大肠癌细胞的结合情况。结果 4轮液相筛选后,与CD133特异性结合的噬菌体得到有效富集,第4轮与第1轮相比,富集了388倍。经ELISA鉴定的20个噬菌体单克隆中,有13个与CD133有较高亲和力,具有阳性意义。经比对得到11条完全一致的氨基酸序列TISWPPR,2条完全一致的氨基酸序列STTKLAL,竞争性阻断ELISA实验表明第一条特异性较强。结论成功利用噬菌体肽库技术,淘选出1条可和人CD133特异性结合的高亲和力短肽,为后续CD133的研究奠定了基础,表明从噬菌体肽库中液相淘选生物素化小分子的高亲和力多肽的方法切实可行。
- 田平阁周春平张超杨慧吴小金陆滟霞刘国炳李学农
- 关键词：CD133噬菌体展示肽库
- 造血祖细胞促人大肠癌生长、侵袭和转移的实验研究
- 研究背景和目的
结直肠癌（colorectalcarcinoma,CRC）是我国最常见的恶性肿瘤之一，发病率呈逐年上升和年轻化趋势。侵袭和转移是导致结直肠癌患者死亡的主要原因。肿瘤转移是一个多步骤、多阶段的复杂过程...
- 吴小金
- 关键词：脐血细胞生长细胞侵袭
- 文献传递
- Has-mir-335慢病毒表达载体的构建及其靶基因鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的构建过表达miR-335的稳定细胞株SW620并筛选和初步鉴定miR-335的靶基因。方法扩增包含hsa-miR-335前体序列在内的基因片段,并将其亚克隆至PLVTHM慢病毒载体;扩增包含RASA1 3'UTR种子区域的基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体,并对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-RASA1-Mut;检测萤火虫荧光素值(F)和海肾荧光素值(R),以R/F表示相对荧光素酶活性。流式细胞仪筛选建立稳定表达miR-335的细胞株,利用荧光定量PCR检测miR-335及其靶基因RASA1的表达,Western Blot检测RASA1蛋白水平的表达。结果质粒双酶切以及测序鉴定PLVTHM-miR335、psiCHECK-2-RASA1、psiCHECK-2-RASA1-Mut重组质粒构建成功。荧光定量PCR显示结直肠癌细胞中miR-335与RASA1表达趋势成负相关。双荧光素酶报告基因分析证实hsa-miR-335能够作用于RASA1的3'UTR。稳定过表达miR-335的细胞中,miR-335的表达明显高于对照组和未处理组,蛋白质水平有所下降。结论成功构建了PLVTHM-miR-335慢病毒重组质粒,构建过表达miR-335的细胞株SW620,初步证实RASA1是miR-335的靶基因。
- 杨慧张超陆滟霞吴小金袁理周畅周春平刘国炳李学农
- 关键词：慢病毒结直肠癌细胞
