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釉基质蛋白和骨形成蛋白影响牙周膜细胞生物学功能的研究: 釉基质蛋白是釉质发育过程中未矿化釉质中含有的蛋白成分，研究发现它还可以由赫特威氏上皮根鞘内层细胞合成，并参与牙骨质的形成。近几年将其引入牙周病治疗领域，丰富了牙周病的治疗手段。与牙周病治疗的其它手段相比，应用釉基质蛋白更...; 刘兰宁; 关键词：骨形成蛋白牙周膜细胞骨桥牙骨质; 文献传递

釉基质蛋白影响人牙囊细胞生物学特性的实验研究被引量：1: 2005年; 目的:观察釉基质蛋白(EMPs)对牙囊细胞(HDFC)增殖及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法:利用酶消化联合组织块培养法获得HDFC。以一定浓度的EMPs作用于牙囊细胞,通过四唑盐比色法和酶动力学方法检测对细胞增殖及ALP活性的变化。结果:EMPs对HDFC具有促增殖作用,其中100mg/L的EMPs的促增殖作用最显著,其促增殖作用可持续至第7天;100mg/L的EMPs可上调ALP活性。结论:EMPs可促进HDFC增殖,影响其ALP活性,可能在牙囊细胞的诱导分化中起重要作用。; 王浈刘宏伟金岩刘兰宁; 关键词：牙囊细胞釉基质蛋白增殖碱性磷酸酶

人牙囊细胞的分离培养和生物学特性被引量：18: 2004年; 目的 :应用酶消化法体外培养人牙囊细胞并研究其生物学特性。方法 :分离合法引产人胚胎乳牙胚的牙囊组织 ,消化法获得人牙囊细胞 ,HE染色观察细胞形态、免疫组织化学染色技术检测波形丝蛋白、Ⅰ型胶原表达 ,RT -PCR检测细胞的骨钙素、骨涎蛋白、碱性磷酸酶的表达。结果 :原代培养的人牙囊细胞呈成纤维细胞形态 ,有部分上皮成分混杂 ,经纯化后可排除 ;在牙囊细胞中Ⅰ型胶原和波形丝蛋白的表达呈阳性 ,定位于细胞的胞质中 ;RT -PCR结果显示骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶表达。结论 :体外培养的人牙囊细胞具有成纤维细胞的特性 ,具有合成Ⅰ型胶原的能力 ;不同程度表达Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎蛋白、碱性磷酸酶等矿化相关蛋白。; 王浈刘宏伟金岩刘兰宁刘源轩昆; 关键词：人牙囊细胞细胞培养免疫细胞化学反转录聚合酶链反应

釉基质蛋白对牙周膜成纤维细胞合成蛋白的影响被引量：2: 2005年; 目的:检测釉基质蛋白作用下牙周膜成纤维细胞合成蛋白的变化,分析釉基质蛋白促进牙周组织再生的作用。方法:实验于2004-04/08在第四军医大学口腔医院组织工程实验室完成。选取11～14岁儿童因正畸需要拔除的无牙周病及龋病的健康新鲜前磨牙,锐利刀片刮除牙根颈部1/3牙龈及牙周膜,采用全牙胶原酶消化法培养获得牙周膜成纤维细胞,经免疫细胞化学检测证实为外胚间充质细胞。取第3代细胞用于实验,分为2组:对照组为含10mL/L新生牛血清的低糖DMEM培养液,实验组为100mg/L釉基质蛋白,用含10ml/L新生牛血清的低糖DMEM培养液配制。将第3代人牙周膜成纤维细胞制备成密度为1×104/mL的细胞悬液,接种入预先放置有细胞爬片的6孔板中,24h后按实验分组更换诱导液。逐日倒置显微镜下观察细胞形态。第3,7天利用免疫组化方法和图像分析技术检测两种细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白、牙骨质附着蛋白的表达。结果:①细胞形态学观察:加入诱导因子初期细胞形态无明显变化,随时间延长,实验组细胞突起逐渐变短,与对照组相比有明显差异。②免疫细胞化学检测结果:对照组骨涎蛋白、骨桥蛋白呈弱阳性到阳性表达,实验组与对照组相比,骨涎蛋白、骨桥蛋白均呈现不同程度胞浆着色加深,与作用时间成正比。对照组细胞骨粘连蛋白基本为阴性表达,而实验组细胞第3天时即检测到了骨粘连蛋白的表达,且随时间的延长染色加深。未经釉基质蛋白处理的牙骨质附着蛋白抗体为阴性表达,经过釉基质蛋白作用第3,7天均检测到牙骨质附着蛋白抗体的弱阳性表达,胞浆着色呈淡棕黄色。设立的空白对照和阴性对照均未见着色。③釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞合成骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的影响:与对照组比较,实验组第3,7天骨涎蛋白和骨桥蛋白均明显上调(184; 刘兰宁刘宏伟金岩王浈; 关键词：成纤维细胞牙周组织细胞学牙釉质蛋白质类

体外培养的人牙囊细胞矿化相关标志物的表达被引量：1: 2005年; 目的体外培养人牙囊细胞,探讨牙囊细胞是否具成骨、成牙骨质细胞表型特征,是否可作为牙骨质再生的种子细胞。方法酶消化联合组织块法获得人牙囊细胞,免疫酶细胞化学染色技术检测其Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的表达,RT-PCR技术检测细胞的骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶的表达。矿化诱导并连续培养牙囊细胞,行Vonkossa染色检测体外矿化形成情况。结果免疫组化结果:牙囊细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、骨桥蛋白、骨粘连蛋白呈不同程度的阳性表达;RT-PCR结果显示骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶表达。经矿化诱导后的牙囊细胞在20d时可形成矿化结节,vonKossa染色阳性。结论牙囊细胞具有成骨细胞、成牙骨质细胞的部分特性,体外培养的人牙囊细胞具有分泌合成矿化组织的能力,可试将其作为牙周组织再生的种子细胞。; 王浈刘宏伟金岩刘源刘兰宁; 关键词：牙囊细胞体外培养免疫细胞化学反转录聚合酶链反应

釉基质蛋白和骨形成蛋白对牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响被引量：1: 2005年; 目的:通过检测釉基质蛋白(Enamel matrix proteins,EMPs)、骨形成蛋白-2(BMP-2)作用下对促进牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响,探讨EMPs、BMP-2促进牙周组织再生的作用机制及其之间的相互影响.方法:酶消化法获得人牙周膜成纤维细胞(Haman periodontal ligament cells,HPDLC)用不同浓度的因子进行诱导,在3d、7d两个时间点,利用MTT法检测和分析诱导后细胞增殖活性的变化.结果:BMP-2、EMPs单独应用均可促进人PDLCs增殖,BMP-2作用强于EMPs.而联合组与100～200μg/L BMP-2、200 mg/L EMPs无明显差异,与100 mg/L EMPs差异显著.结论:BMP-2、EMPs单独或联合应用均可促进人PDLCs增殖,BMP-2作用强于EMPs.联合组中起主要作用的是BMP-2,EMPs未能增加BMP-2的作用.; 刘兰宁张世华王浈; 关键词：牙周膜成纤维细胞釉基质蛋白骨形成蛋白-2 增殖活性

釉基质蛋白和骨形成蛋白对牙周膜成纤维细胞矿化能力的影响: 2005年; 目的:通过检测釉基质蛋白(Enam el m atrix prote ins,EMPs)、骨形成蛋白-2(Bone morphogenetic prote in 2,BMP-2)作用下,牙周膜成纤维细胞矿化能力,探讨EMPs、BMP-2促进牙周组织再生的作用机制。方法:酶消化法获得人牙周膜成纤维细胞(Hum an periodontal ligam ent cells,HPDLC)用不同因子进行诱导,在3d、7d两个时间点,利用ALP法检测诱导后细胞成骨活性的变化,同时进行体外矿化诱导实验。结果:BMP-2促进了PDLCs的矿化能力;EMPs作用不明显;同时,在BMP-2和EMPs作用下,PDLCs形成矿化结节,但EMPs结节细小,进展慢。结论:BMP-2是一种骨诱导因子;EMPs是一种成骨促进因子。; 徐诚刘兰宁张世华王浈; 关键词：牙周膜成纤维细胞釉基质蛋白骨形成蛋白-2 骨诱导因子

釉基质蛋白对牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响被引量：3: 2005年; 目的:通过检测釉基质蛋白(Enamel matrix proteins,EMPs)作用下对促进牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响,探讨EMPs促进牙周组织再生的作用机制.方法:酶消化法获得人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament cells,HP-DLC)用不同浓度的EMPs进行诱导,在3 d、7 d两个时间点,利用MTT法检测和分析诱导后细胞增殖活性的变化.结果:EMPs浓度在(50～200)mg/L时促增殖作用呈剂量依赖性.EMPs的最小显效浓度是50 mg/L,而200 mg/L EMPs的促增殖作用最强.25 mg/L与(50～200)mg/L差异显著(P＜0.05);(100～200)mg/L间无明显差异(P＞0.05).结论:EMPs在一定浓度下可以促进人PDLCs增殖.100 mg/L浓度最佳.; 刘兰宁张世华王浈; 关键词：牙周膜成纤维细胞釉基质蛋白增殖活性

不同诱导条件对人牙囊细胞合成非胶原蛋白的影响被引量：2: 2005年; 目的探讨釉基质蛋白(enamelmatrixproteins,EMPs)、骨形成蛋白-(2bonemorphogeneticpro-tein-2,BMP-2)作用下对牙囊细胞合成非胶原蛋白的影响。方法酶消化联合组织块法获得人牙囊细胞,用100mg/L的EMPs、100μg/L的BMP-2对人牙囊细胞进行诱导,显微镜下逐日观察细胞形态变化,并在3d、7d两个不同时间点利用免疫组化方法和图像分析技术检测和分析细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白表达的变化。结果100mg/L的EMPs、100μg/L的BMP-2对牙囊细胞均具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白的作用,呈时间依赖性。结论EMPs、BMP-2可使牙囊细胞表型向成骨、成牙骨质样细胞分化。; 王浈刘宏伟金岩刘源刘兰宁; 关键词：牙囊细胞釉基质蛋白骨形成蛋白-2 非胶原蛋白

釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞矿化相关蛋白的影响被引量：1: 2011年; 目的通过检测釉基质蛋白(Enamel matrix proteins,EMPs)作用于体外培养牙周膜成纤维细胞,对细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连素、牙骨质附着蛋白(Cementum attachment protein,CAP)表达及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,探讨EMPs促进牙周组织再生的作用机制。方法酶消化法获得人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament fibroblast,hPDLF)用100mg/L的EMPs诱导,镜下逐日观察细胞形态变化,在3天、7天两个时间点利用免疫组化方法和图像分析技术检测和分析诱导条件作用后细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连素表达的影响,检测细胞牙骨质附着蛋白的表达。利用ALP法检测诱导后细胞成骨活性的变化。结果 100mg/L的EMPs对hPDLF具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连素的作用,随时间延长这种促进作用愈明显;EMPs作用hPDLF 3天即表达牙骨质附着蛋白;EMPs可促进hPDLF碱性磷酸酶活性的增强。结论 EMPs在一定浓度下可促使hPDLF向成骨、成牙骨质样细胞分化。; 黄晓山刘兰宁郭利明; 关键词：细胞培养人牙周膜成纤维细胞釉基质蛋白

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刘兰宁

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