刘源
- 作品数：120 被引量：626H指数：13
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学理学更多>>
- 从人外毛根鞘细胞分离获取黑素母细胞被引量：2
- 2007年
- 目的:毛囊黑素细胞是皮肤黑素细胞的储库,含有黑素母细胞甚至黑素干细胞,具有更强的增殖潜力。观察人毛囊外毛根鞘细胞中黑素细胞的分布特征,尝试分离获取黑素母细胞。方法:实验于2003-04/2006-04在解放军第四军医大学组织工程实验中心和武警医学院附属医院皮肤科完成。消化游离流产胎儿头皮(产妇同意由医院处理流产胎儿)毛囊,用黑素细胞培养基接种,原代培养人外毛根鞘细胞,并观察外毛根鞘细胞和黑素细胞的分布。待原代外毛根鞘细胞融合时,加入胰酶消化,大约一半细胞漂浮时,加入含体积分数为0.10小牛血清的DMEM终止,轻柔吹打,弃去飘浮细胞。用DMEM清洗原瓶后加入黑素细胞培养基,继续培养,寻找黑素(母)细胞克隆。并采用胰酶消化法纯化培养黑素细胞。结果:在贴壁生长的毛根周围发现了外毛根鞘细胞团,以毛囊隆突部位为中心呈纺锤形排列。其中含有黑素细胞:临近毛囊漏斗部和毛球部的黑素细胞体积较大,有两个或者多个长一些的树突;隆突部位周围的黑素细胞体积偏小,树枝少而短。经纯化培养获得黑素(母)细胞集落,集落中心细胞呈短梭形,折光性很强,排列密集,增殖活跃;边缘细胞变大,树突延长;集落之间散在分布的黑素细胞体积更大,树突延长,数量增多至3个以上。结论:实验观察到人毛囊外毛根鞘细胞中有黑素细胞分布,并选择性培养获得黑素细胞克隆,分析克隆中心可能含有黑素母细胞。
- 卢涛金岩刘源雷娟刘晓亮
- 关键词：黑素细胞
- 诱导成牙本质样细胞在体内外的矿化研究被引量：6
- 2003年
- 目的 :人早期胚胎颌突外胚间充质细胞在体外能被诱导分化为成牙本质样细胞 ,表达牙本质特异的涎磷蛋白。本研究探讨该诱导分化细胞在体内外矿化的可能。方法 :转化生长因子 - β1(TGF - β1)和牙本质非胶原蛋白 (DNCP)作用于三维培养的外胚间充质细胞 ,诱导 10d ,然后将诱导的成牙本质样细胞接种于裸鼠皮下 ,X线照相 ,组织切片 ,HE染色 ,观察细胞在体内的矿化情况。同时消化细胞 ,培养于矿化液中 ,观察细胞在体外的矿化能力。结果 :8周后 ,裸鼠皮下接种的胶原细胞密度明显高于对照组。 5周 ,胶原内的细胞为单极长突起 ;8周时 ,细胞周围可见牙本质样基质结构沉积。矿化液中的细胞 3d出现复层生长 ,2 1d ,VonKossa染色阳性。结论 :诱导的成牙本质样细胞在体内可以形成类似牙本质样基质 ,在体外能形成矿化结节 ,为有功能的终末分化的成牙本质细胞。
- 邓蔓菁金岩史俊南聂鑫刘源赵宇赵守亮Smith AJ
- 关键词：成牙本质样细胞矿化
- EGF对真皮成纤维细胞中cyclinD1和CDK-4表达的影响被引量：17
- 2002年
- 目的 探讨表皮生长因子 (EGF)对作为皮肤组织工程种子细胞之一的真皮成纤维细胞中 cyclin D1和 CDK- 4表达的影响 ,以从细胞周期探讨 EGF促进真皮成纤维细胞生长的机制 .方法 用含 10 0 m L· L- 1 胎牛血清的 DMEM,加入5 0 mg· L- 1的 EGF培养 SD大鼠的真皮成纤维细胞 ,通过MTT检测、流式细胞仪分析观察细胞的生长状态 ,免疫组化检测 cyclin D1和 CDK- 4的表达 ,结合流式细胞仪分析观察细胞的周期变化 .结果 MTT检测、流式细胞仪结果都显示 5 0mg· L- 1 的 EGF能显著促进真皮成纤维细胞的生长增殖 ,免疫组化结果显示 ,二者一致 .结论 5 0 mg· L- 1 的 EGF对真皮成纤维细胞的生长有极大的促进作用 ,促进了细胞周期蛋白 cyclin D1和 CDK- 4的表达 ,使细胞 G1期变短 .
- 王军琳刘源金岩吕红兵赵宇王新文董蕊
- 关键词：细胞周期蛋白类细胞周期蛋白质依赖激酶类表皮生长因子-尿抑胃素真皮成纤维细胞
- 人角朊干细胞体外筛选及鉴定的实验研究被引量：10
- 2003年
- 目的 探讨体外筛选及鉴定人角朊干细胞 (KSC)的方法。 方法 利用 KSC对细胞外基质的快速黏附性 ,选择不同时间黏附的细胞分为 5、2 0和 6 0分钟 3组 ,并以不进行筛选的细胞作对照组。体外培养扩增后 ,以 KSC的相对特异性标识分子 β1 整合素、角蛋白 19(Ck19)的单克隆抗体 ,免疫组织化学方法对各组细胞进行鉴定 ,利用图像分析系统测平均灰度值。并用流式细胞仪、透射电镜对各组细胞进行检测。 结果 各组细胞在 10～ 14天均有克隆形成 ,组间比较 5分钟组细胞生长较慢 ,但形成克隆较大 ,细胞体积较小。免疫组织化学β1 整合素、Ck19在各组都有表达 ,各组平均灰度值统计学分析显示 ,β1 整合素在 5分钟组的表达与另 3组间有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ,Ck19的表达在 5分钟组与 2 0分钟组间无差异 (P>0 .0 5 ) ,6 0分钟组与对照组间差异不显著 ,而前两组与后两组之间比较有统计学意义 (P<0 .0 5 )。流式细胞仪检测提示 5分钟组细胞大部分处于 G1 期 ,与其它 3组有区别。透射电镜显示 5分钟组细胞体小 ,核浆比大 ,细胞器不成熟。 结论 利用细胞外基质筛选的 5分钟组细胞处于幼稚状态 ,并有强克隆形成能力 ,符合预期的KSC特点 ,可利用 KSC对细胞外基质的快速黏附性对其纯化筛选 ,同时利用 β1 整合素。
- 董蕊金岩刘源
- 关键词：体外筛选角蛋白19Β1整合素
- 构建人牙囊细胞三维立体培养模型及其用于牙周组织工程的可行性被引量：2
- 2005年
- 目的:构建人牙囊细胞的体外三维立体培养模型,探讨两种支架材料用于牙周组织工程的可行性。方法:实验于2003-01/2004-10在第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心完成。采用酶消化法原代培养人牙囊细胞,传代扩增后,取第4代细胞分别接种于煅烧骨和Ⅰ型胶原膜三维支架上,体外继续培养1周,进行细胞记数和扫描电镜观察细胞生长状况。结果:细胞在两种材料上均能良好贴附并增殖,扫描电镜可见人牙囊细胞在这两种支架材料上均黏附良好,增殖旺盛,伸展充分,并有基质分泌。结论:煅烧骨和冻干胶原膜均有望成为牙周组织工程支架材料。
- 常秀梅刘宏伟金岩刘源张克荣李华峰
- 关键词：细胞培养牙囊细胞壁
- 组织工程皮肤中黑色素细胞的培养纯化被引量：1
- 2002年
- 目的探讨如何以简便快速的方法获得大量高纯度的黑色素细胞。方法以包皮组织作为细胞来源,用消化法获得表皮细胞悬液,用该实验室设计的方法对细胞进行纯化,Dopa染色、S100免疫组化和透射电镜鉴定细胞来源。结果用该实验室的纯化方法培养的黑色素细胞贴壁快,细胞产量高,未见角朊细胞和成纤维细胞污染。结论结果表明该实验方法可以快速获得大量高纯度的黑色素细胞。
- 李媛王新文金岩刘源
- 关键词：皮肤黑色素细胞纯化
- 构建无外源性支架材料组织工程真皮的研究
- 2005年
- 目的:探讨运用组织工程方法构建不含有任何外源性支架材料的组织工程真皮组织。方法:以青少年包皮环切术后皮肤组织作为细胞来源,用消化法获得真皮成纤维细胞,用本实验室设计的组织工程皮肤培养系统构建组织工程真皮:在培养液中加入10 ng/ml的bFGF和50 ug/ml的Vitamin C,持续培养4周即形成组织工程真皮。免疫组化检测构建的真皮中细胞外基质(Ⅰ型胶原)的形成情况。结果:所构建的组织工程真皮含有多层细胞,细胞状态良好,染色结果显示形成了大量成熟的细胞外基质,Ⅰ型胶原呈强阳性表达。结论:本实验成功构建了不含外源性的组织工程真皮组织,可以用于下一步构建含有表皮的全层皮肤和动物实验。
- 姚远刘源金岩王新文赵宇李媛
- 关键词：皮肤真皮成纤维细胞
- 大鼠肺微血管内皮细胞培养方法的研究被引量：21
- 2004年
- 目的 :探讨以简单有效的方法获取大鼠微血管内皮细胞 ,为构建含有血管的组织工程产品提供种子细胞。方法 :用出生 1d的SD仔鼠的肺组织进行肺微血管内皮细胞的组织块培养。用第四军医大学口腔医院组织工程中心设计的方法对其进行纯化 ,用经优化处理的内皮细胞培养液扩大培养。通过形态学、免疫组织化学、透射电镜鉴定其来源。结果 :用此法进行的原代培养 ,血细胞在换液和传代过程中被去除 ,成纤维细胞污染可经第四军医大学口腔医院组织工程中心设计的方案纯化去除。经鉴定获得的血管内皮细胞纯度较高 ,生长状态良好。结论 :由此获得的血管内皮细胞纯度高 ,生长状态良好 。
- 姜明金岩刘源赵宇刘鹏董蕊
- 关键词：肺微血管细胞培养血管内皮细胞
- 三种组织工程鼓膜支架材料的生物相容性被引量：4
- 2008年
- 背景:自体组织修复鼓膜穿孔存在增加手术创伤、取材有限等缺点,构建组织工程鼓膜是鼓膜穿孔治疗的发展方向。目的:构建3种不同材料的组织工程鼓膜支架材料,并评价其生物相容性。设计、时间及地点:随机对照动物实验,细胞学体内观察,于2004-08/2005-02在解放军第四军医大学组织工程中心完成。材料:将健康小猪的硬脑膜、真皮及人羊膜进行脱细胞处理。方法:将预先培养的豚鼠鼓膜成纤维细胞种植于3种材料表面,观察成纤维细胞的生长状态;18只豚鼠随机分为3组,于右侧背皮下分别埋植制备的脱细胞硬脑膜、真皮及人羊膜。主要观察指标:3种脱细胞生物支架材料的显微结构及组织相容性。结果:3种脱细胞材料均为网状结构,无任何细胞及细胞残核存在;豚鼠鼓膜成纤维细胞能够很好地贴附于3种脱细胞材料生长,无细胞毒性;将3种组织材料分别埋植于豚鼠皮下后,无埋植材料排出现象,1周时植入材料周围有较明显炎症反应,其中以脱细胞真皮周围组织反应较轻,4周时炎症反应消失。结论:通过脱细胞方法可以成功建立具有良好生物相容性的组织工程鼓膜支架材料;3种材料中以脱细胞猪真皮的生物相容性最佳。
- 邓志宏田勇胜金岩王锦玲邱建华刘源赵宇
- 关键词：鼓膜脱细胞基质硬脑膜真皮人羊膜生物相容性
- NO供体亚硝基化合物-18对大鼠成骨细胞的影响被引量：2
- 2004年
- 目的 探讨NO供体亚硝基化合物-18(NOC-18)对大鼠成骨细胞增殖和分化、碱性磷酸酶(ALP)活性和Ⅰ型胶原蛋白表达的影响。方法 采用酶消化法和骨组织块法联合分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,然后将不同浓度的.NOC-18作用于大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖能力,测定细胞ALP活性。免疫细胞化学染色检测Ⅰ型胶原蛋白的表达,观察NOC-18对大鼠成骨细胞增殖和分化能力的影响。结果 NOC-18可显著促进大鼠成骨细胞增殖,提高成骨细胞ALP活性和Ⅰ型胶原蛋白的表达。结论 适量浓度的NOC-18可通过刺激成骨细胞的增殖和分化,促进骨形成,为预防和治疗骨质疏松提供了理论和实验依据。
- 王治伦王丽娟金岩刘源赵宇庞炜周扬吴劲谭希旺
- 关键词：成骨细胞骨质疏松碱性磷酸酶
