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于东毅
作品数:
2
被引量:6
H指数:1
供职机构:
南京医科大学第一临床医学院
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
袁志兰
江苏省人民医院
陈琴
江苏省人民医院
钱朝旭
江苏省人民医院
罗莎莎
江苏省人民医院
傅煜轩
南京医科大学
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机构
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江苏省人民医...
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南京医科大学
作者
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于东毅
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袁志兰
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罗莎莎
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钱朝旭
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姚志峰
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陈琴
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中华实验眼科...
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2014
1篇
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羟基喜树碱联合依托泊苷对人Tenon囊成纤维细胞凋亡的影响及其机制
被引量:1
2014年
背景研究表明,羟基喜树碱(HCPT)和依托泊苷(VP-16)均能诱导人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的凋亡,但这两种药物联合应用对体外培养的HTFs是否有协同作用尚不明确。目的观察HCPT与VP-16联合应用后在促进体外培养的HTFs凋亡方面是否有协同性,并探讨其作用机制。方法人眼Tenon囊成纤维组织取自江苏省人民医院眼库,采用组织块培养法培养和传代HTFs,采用免疫组织化学法检测HTFs中波形蛋白的表达。第4代HTFs接种于96孔板,分别将不同质量浓度的HCPT(1、5、10、50、100mg/L)、VP-16(0.6、2.5、5.0、25.0、50.0mg/L)、HCPT+VP-16(质量比为2:1,终质量浓度分别为0.80、3.75、7.50、37.50、75.00mg/L)加入细胞培养孔处理24h,用CCK-8法检测各组药物对细胞增生的抑制率。将HTFs分为空白对照组、HCPT(50mg/L)处理组、VP-16(25mg/L)处理组、HCPT+VP-16(37.5mg/L)处理组,药物处理24h后用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。提取细胞内总蛋白,采用Westernblot法检测各药物处理组细胞内caspase-3、活化型caspase-3、bax、bcl-2、JNK、p-JNK、Akt、p-Akt的表达水平。结果培养的细胞呈多边形或不规则形,波形蛋白表达阳性。不同质量浓度HCPT、VP-16和HCPT+VP-16作用24h后,随着药物质量浓度的增加,对HTFs增生的抑制率增加,差异均有统计学意义(HCPT:F=41.34,P=0.00;VP-16:F=62.60,P=0.00;HCPT+VP-16:F=46.77,P=0.00),HCPT处理组、VP-16处理组和HCPT+VP-16处理组药物的半数抑制浓度(IC50)分别为80.99、27.93、19.81mg/L,HCPT与VP-16联合应用的合并指数(cI)为0.399,表明VP-16和HCPT具有强协同作用。空白对照组、HCPT处理组、VP-16处理组和HCPT+VP-16处理组HTFs的凋亡率分别为(4.87±0.78)%、(11.20±1.94)%、(12.67±1.51)%和(19.77±2.01)%,�
于东毅
傅煜轩
姚志峰
袁志兰
关键词:
羟基喜树碱
依托泊苷
凋亡
细胞培养
慢性高眼压状态下小鼠水通道蛋白4基因对视网膜胶质细胞活化的影响
被引量:5
2012年
目的研究慢性高眼压状态下小鼠水通道蛋白4(AQP4)基因是否通过影响胶质细胞的活化造成青光眼视网膜的损伤,并探讨其可能机制。方法实验研究。采用小鼠巩膜外静脉烧烙法建立小鼠高眼压模型。应用回弹式眼压计测量小鼠眼压。右眼为慢性高眼压眼,左眼为对照眼。选择造模成功的慢性高眼压雄性AQP4基因敲除(AQP4-/-)小鼠及其背景雄性野生型(可汀)小鼠各40只,根据慢性高眼压模型建立的时间(手术结束时开始计算),将两种小鼠分别分为5组(24h、3d、1、2、4周),每组8只。石蜡切片行AQP4-/-小鼠及wT小鼠胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和wT小鼠AQP4的免疫组织化学染色,荧光显微镜下采集图像。小鼠眼压的组间比较采用t检验。结果小鼠巩膜外静脉烧烙术后24h、3d、1、2、4周,AQP4-/-小鼠和wT小鼠慢性高眼压眼眼压(11.30±1.59、11.20±1.15、10.60±1.53、10.75±1.45、10.45±1.39和11.50±2.56、11.25±1.65、10.75±1.33、10.60±1.33、10.40±1.19)与对照眼(6.60±0.94、6.35±0.99、6.55±0.94、6.45±0.99、6.50±0.94和6.60±1.05、6.50±0.89、6.40±1.09、6.30±1.13、6.50±1.05)相比,差异有统计学意义(t=6.66—18.08,P〈0.05)。免疫荧光染色结果显示,术后24h两种小鼠慢性高眼压眼的GFAP表达量均开始增加,1周时表达水平最高,2周时开始减弱,4周时最弱,但仍高于对照眼;术后1周时WT小鼠较AQP4-/-小鼠GFAP的表达量增加更为明显;WT小鼠在眼压升高1周时AQP4的表达量较对照眼明显增加,2、4周时仍高于对照眼;wT小鼠在眼压升高1、2、4周时AQP4表达水平与GFAP表达水平均具有一致性。结论小鼠巩膜外静脉烧烙的方法能有效升高小鼠眼压;高眼压状态下AQP4基因可能通过影响小鼠胶质细胞的活化造成青光眼�
罗莎莎
陈琴
于东毅
钱朝旭
袁志兰
关键词:
高眼压
小鼠
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