韩鹂
- 作品数：6 被引量：24H指数：2
- 供职机构：南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅开放课题江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 内皮型一氧化氮合酶与血管结构及功能的相关性被引量：3
- 2005年
- 目的:应用内部核糖体进入位点构建携带内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子的双基因表达载体,研究外源性基因内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在人脐静脉内皮细胞ECV304中的转染表达,探讨内皮型一氧化氮合酶与血管结构及功能的相关性。方法:实验于2003-12/2004-12在南京鼓楼医院科研部完成。将Phcmvsp1a-enos中内皮型一氧化氮合酶基因和PcDNA-vegf中血管内皮生长因子基因定向克隆到真核表达载体PcDNA-ires中,构建重组质粒PcDNA-enos-ires-vegf,经酶切,聚合酶链反应扩增和部分DNA测序分析证实后,转染人脐静脉内皮细胞,硝酸还原酶法检测转染后细胞中一氧化氮和一氧化氮合酶活性,免疫组化和荧光双标记及westernblotting检测转染后细胞蛋白水平的表达,Trizol提取总RNA,反转录-聚合酶链反应测定转染后细胞mRNA水平的表达。结果:成功构建携带内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子的双基因表达载体PcDNA-enos-ires-vegf,双基因内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在人脐静脉内皮细胞基因组中获得整合及表达。重组基因PcDNA-enos-ires-vegf组与对照组PcDNA-enos在一氧化氮含量和一氧化氮合成酶活性的表达差异无显著性意义。PcDNA-enos-ires-vegf转染细胞后转染效率为30%～40%。
- 韩鹂孙雪梅乔彤
- 关键词：内皮型一氧化氮合酶基因血管内皮生长因子基因一氧化氮合成酶活性聚合酶链反应扩增一氧化氮合酶活性ECV304
- 单细胞反转录酶聚合链式反应技术对胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子的鉴别
- 2006年
- 目的:利用干细胞分化获得胰岛细胞后目前还没有较理想的鉴别方法,实验通过单细胞反转录酶聚合链式反应技术鉴别胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子,以建立一种检测胰岛干细胞的有效方法。方法:实验于2001-10/2005-08在加拿大多伦多大学和南京大学附属鼓楼医院完成。①将收集培养2～4周的单个胰岛干细胞用于实验。②胰岛活性测定实验中,选择1×106分化的胰腺干细胞,用低浓度和高浓度葡萄糖分别刺激1～4h,检测12,14,24d培养液中胰岛素的浓度。③单细胞反转录酶聚合链式反应检测胰岛素促进因子基因实验中,选择12个单个胰腺干细胞进行检测,另取12个单个未分化的干细胞作为对照。聚合链式反应体系为20μL。聚合链式反应扩增反应条件为94℃预变性4min,94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸2min条件下循环35次。聚合链式反应产物以质量浓度为20g/L的琼脂糖凝胶电泳。结果:①分化的胰腺干细胞培养液中胰岛素浓度的检测:培养12,14,24d时培养液中胰岛素的浓度分别为42.6,68.2,73.5IU/L,随着时间的延长,呈逐渐升高的趋势。②单个胰岛干细胞胰岛素促进因子反转录酶聚合链式反应检测结果:12个单个胰岛干细胞中有7个胰岛素促进因子表达呈阳性,而作为对照的12个未分化干细胞均未检出,两者差异显著(P<0.001)。结论:采用单细胞反转录酶聚合链式反应检测方法为胰腺干细胞的鉴定和纯化提供了技术保障,证明单细胞反转录酶聚合链式反应是一种检测胰腺干细胞标记物的有效方法。
- 耿东进陈军浩陈蕾蕾张乐刘勇周锦勇顾香芳韩鹂
- 关键词：细胞分离胰岛素
- HCCR1和HCCR2可溶性蛋白在细菌中表达、纯化及在早期肝癌诊断中的应用(英文)被引量：2
- 2006年
- 目的评估HCCR1和HCRR2克隆、细菌表达及可溶性蛋白的纯化及应用于早期肝癌诊断的可行性。方法cDNA克隆、表达、蛋白质的纯化、Westernblot分析用于评估HCCR1和HCCR2蛋白的生产,Elisa方法用检测血清抗原。结果HCCR1和HCCR2能够高水平地在细菌中表达,纯化的可溶性蛋白能用于生产抗体并应用于肝癌的早期诊断。结论HCCR1和HCCR2蛋白质可以在细菌中生产,并能成功地用于肝癌的早期诊断。
- 耿东进陈军浩顾香芳陈蕾蕾张乐刘勇韩鹂
- 关键词：肝细胞性肝癌重组蛋白
- 用猪AMI模型研究荧光染料CFSE和Brdu作为移植细胞标记物的实用性被引量：1
- 2006年
- 目的研究荧光染料CFSE和Brdu作为体内细胞移植标记物的实用性。方法构建猪急性心肌梗死(AMI)模型。用CFSE和Brdu对骨髓单个核细胞进行双标记,经冠状动脉回输至MI区。4周后,利用激光共聚焦显微镜和免疫组织化学法分别观察CFSE和Brdu的定位和标记情况。结果细胞移植4周后,发现Brdu阳性细胞多位于心肌疤痕形成区且MI区的新生血管内壁也出现阳性染色。在MI区可见CFSE标记的带绿色荧光的细胞,但背景色较高。结论在动物实验中,CFSE和Br-du均可作为移植细胞标记物,Brdu的标记效果优于CFSE,适于同时进行形态学和组织学研究。
- 陈蕾蕾孙雪梅施广飞张荣林耿东进顾香芳韩鹂张葵
- 关键词：CFSEBRDU细胞移植荧光染料
- 应用免疫磁珠法分离人胚胎神经干细胞的培养及鉴定
- 2006年
- 目的:从流产胚胎中分离出神经干细胞并培养、扩增和进行鉴定,为神经干细胞移植寻找源泉。方法:实验于2001-02/2005-06在加拿大多伦多大学和南京大学附属鼓楼医院完成。收集流产的胎儿脑组织,备人胚胎大脑组织细胞悬液制免疫磁珠法分离神经干细胞,实验设计共随机选择24个分离的单个神经干细胞通过反转录酶聚合链反应技术的方法用DNA扩增仪检测单个细胞中nestin神经干细胞标记物,betaactin为内参对照。以结果:分离的人胚胎神经干细胞生长、扩增正常,nestin阳性细胞纯度极高。结论:免疫磁珠法对胚胎神经干细胞的分离,及反转录聚合酶链反应技术在神经干细胞鉴定中的应用是值得进一步探讨的途径。
- 耿东进陈军浩陈蕾蕾张乐周锦勇刘勇顾香芳韩鹂
- 关键词：干细胞细胞培养细胞分离免疫磁珠法胚胎神经干细胞
- 小鼠骨癌痛模型的建立及痛行为学和骨损害的观察被引量：18
- 2007年
- 目的:在小鼠骨癌痛模型的基础上观察小鼠行为学和骨质损害的程度。方法:将2×105个NCTC2472小鼠纤维肉瘤细胞注射到C3H/HeJ小鼠右侧股骨远端骨髓腔内制作骨癌痛动物模型。分别于注射后1、3、5、7、10、14、21、28天观察小鼠的体重和痛行为学表现:vonFrey细丝刺激足底测量机械缩足阈值和行走后足使用评分评价行走诱发患肢痛;分别于注射后7、14、21、28天进行X线检查评估股骨破坏程度;取股骨进行组织切片,HE染色光镜下观察肿瘤组织和骨结构破坏情况。结果:模型组小鼠体重在注射后第28天显著低于对照组和基础体重(P<0.05),注射后第7天模型组小鼠出现机械性痛觉超敏,第14天出现行走诱发患肢痛。第14天X线摄片显示有明显的骨破坏,第28天出现病理性骨折。组织学研究显示骨髓腔内肿瘤生长,向外侵蚀破坏骨皮质。结论:从疼痛行为学、放射学、组织学多方面的研究表明小鼠骨癌痛模型复制成功。
- 马正良夏小萍朱巍业光衡韩鹂费强
- 关键词：骨癌癌痛触诱发痛
