金荔
- 作品数：74 被引量：140H指数：7
- 供职机构：解放军第307医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划军队医药卫生科研基金更多>>
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- 特异性表达新霉素耐药基因Neo^R的人乳腺癌细胞模型的建立被引量：1
- 1999年
- 将含有ＮｅｏＲ基因的ｐＳＶ２－ｎｅｏ质粒经扩增、提取及纯化，以磷酸钙共沉淀法转染入ＭＤＡ人乳腺癌细胞系，经Ｇ４１８长期高压筛选出７株抗性ＭＤＡ细胞克隆，采用ＮｅｏＲ基因特异性引物进行聚合酶链反应，证实了ＮｅｏＲ基因在各株Ｇ４１８抗性ＭＤＡ细胞基因组中的整合。ＭＤＡ－ＮｅｏＲ细胞在传代６个月之后仍可耐受６００ｍｇ／Ｌ高浓度的Ｇ４１８，说明ＮｅｏＲ基因导入后的整合及表达是稳定的。表明已初步建立了携有特异标志基因ＮｅｏＲ的人乳腺癌细胞模型。
- 郭斯启奚永志宋三泰金荔陈兴国孔繁华
- 关键词：乳腺癌基因表达新霉素耐药基因
- GVHD病因学的新视野:HLA分子三维结构研究被引量：1
- 2000年
- 目的 :进一步探索GVHD的发病机理 ,提高临床移植疗效。方法 :采用国际通用的微量淋巴细胞毒试验和混合淋巴细胞培养方法 ;基因分型采用PCR SSP方法 ,对基因亚型进行DNA测序 ,再进行HLA三维结构模拟。结果 :① 4名骨髓移植患者中 ,例 1供 受体间HLA Ⅰ、Ⅱ类血清学分型相合 ,DQB1基因亚型不同 ,例 2、3、4均有 1个Ⅰ类抗原 (分别为HLA A、B和A)血清学分型不合和 1个基因亚型不同。HLA三维结构模拟例 1、3、4供 受者差别明显 ,骨髓移植后发生了Ⅲ～Ⅳ度GVHD ;例 2三维结构模拟差别不明显 ,仅发生Ⅰ度GVHD ;② 4个病例供 受体间HLA分子分别相差 14、17、2 0、12个氨基酸 ,相差数量与GVHD无相关性 ;3例重度GVHD供 受体的HLA分子三维结构均在抗原结合区的β转角处出现明显差异 ,而 1例轻度GVHD则无明显差异。 结论 :当异基因骨髓移植供 受体间HLA基因亚型不同时 ,移植后发生GVHD的程度与HLA分子三维结构差别大小有密切关系 ;三维结构的差别又与差异氨基酸所处的位置有关 ;GVHD与抗原氨基酸差别的数量多少没有直接关系。
- 孔繁华孙玉英奚永志任素萍金荔陈兴国刘楠屠敏郭斯启
- 关键词：人类白细胞抗原移植物抗宿主病骨髓移植
- HL-60细胞中IL6基因的克隆及鉴定被引量：2
- 1999年
- 目的：为探索性构建重组人白细胞介素６－绿脓杆菌外毒素融合蛋白（ＩＬ６－ＰＥ４０）以选择性杀伤高表达ＩＬ６受体（ＩＬ６Ｒ）的白血病细胞，本研究试图从人急性早幼粒细胞白血病细胞株（ＨＬ－６０）中克隆Ｎ－末端缺失２４个氨基酸的人ＩＬ６基因（ＩＬ６ｃＤＮＡ）并构建含此基因的重组质粒。方法：根据ＩＬ６基因序列设计合成可扩增ＩＬ６ｃＤＮＡ的特异性引物；利用基因重组技术，构建含ＩＬ６基因的重组质粒ｐＵＣ－ＩＬ６。结果与结论：本文首次从ＨＬ－６０中扩增出预期４８０ｂｐ的ＩＬ６ｃＤＮＡ，将其克隆至ｐＵＣ１８质粒中，命名为ｐＵＣ－ＩＬ６，并经ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ双酶切电泳及序列分析鉴定加以确证，为进一步构建重组人ＩＬ６－ＰＥ４０奠定了坚实基础。
- 郑黎燕奚永志孔繁华鱼咏涛金荔陈兴国屠敏刘楠
- 关键词：白细胞介素6白血病HL-60细胞克隆融合蛋白
- 中国汉族人群人类白细胞抗原HLA不同基因座位间的基因重组被引量：7
- 2007年
- 人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)复合体基因座位间的重组、重组热点、连锁不平衡与疾病易感性的关联性研究已成为免疫遗传学与人类后基因组学等研究领域的研究重点与焦点.本文报道了在中国汉族人群中发现的10例HLA复合体中的基因重组家系.采集重组家系的2～3代家庭成员的外周血标本,首先对其HLA-Ⅰ,Ⅱ类区域的5个经典基因位点进行PCR-SSP低、高分辨率基因分型及SBT分析,然后再进行遗传家系分析研究,确定HLA基因重组相关位点,并对重组家系的单体型进行了群体统计学分析.结果发现,在10例HLA重组家系中有8例重组发生在HLA-A/Cw位点之间,其中4例重组发生在A*02-Cw*03单体型中,2例重组发生在A*24-Cw*03单体型中;1例重组发生在HLA-B/DRB1位点之间,还有1例重组发生在HLA-B/Cw位点之间.群体统计学分析发现,A*02-Cw*03单体型呈一定程度的连锁不平衡但不是很强(?/δ(?)=3.0,?(r)=0.30);另有3个单体型虽呈强连锁不平衡却发生了重组事件,即A*33-Cw*03(?/δ(?)=7.22,?(r)=0.51),A*30-Cw*06(?/δ(?)=10.37,?(r)=0.93)和B*13-Cw*03(?/δ(?)=7.69,?(r)=0.38),这说明重组可能是打破旧的连锁不平衡来产生新的连锁不平衡的重要原因.本文绘制了每个重组家系成员的HLA单体型,并建立了中国汉族人群的HLA重组遗传图谱,初步定位重组发生的范围并分析了位点间重组与连锁不平衡的关系,这为更深入地研究HLA重组事件奠定了基础.
- 骆媛袁方孙玉英金荔梁飞刘楠宋新强刘曙光刘金锋王丹薛红孔繁华奚永志
- 关键词：基因重组家系研究
- 参照链介导的构象分析策略在人类白细胞抗原-A基因位点分型中的临床应用被引量：5
- 2003年
- 目的 建立并稳定人类白细胞抗原 (HLA)分型新策略—参照链介导的构象分析 (RSCA)系统 ;以HLA A位点为靶标 ,鉴定RSCA分型策略的优劣。方法 采用国际RSCA协作组提供的 2 0例标准分型DNA首先确定RSCA系统的稳定性、准确性及可复性。然后分别提取 84例拟进行造血干细胞移植病人及家系成员的外周血DNA ,采用RSCA和序列特异性引物体外基因扩增 (PCR SSP)法平行对照对HLA A基因位点进行分型。结果 对 2 0例标准分型DNA的分型结果显示 ,所获分型结果与国际RSCA协作组的完全一致 ,准确性及重复率均为 10 0 %。在全部 84例移植病人及家系成员标本中 ,有 82 /84例 ( 97.6 %)标本可明确判定结果 ,其中有 33/84例 ( 39%)可直接指定等位基因型别 ;此外 ,还有 2 /84例 ( 2 .4%)标本因PCR扩增结果太弱 ,致使RSCA法未能获得分型结果。随机选择 2 0例移植标本进行RSCA重复性实验表明 ,前后结果完全一致 ,然而在PCR SSP分型中 ,约有 10 %的标本需要重复 1～ 3次方能判定结果。结论 RSCA与PCR SSP分型结果相比 ,具有灵敏、特异、分辨率高、重复性好、可发现变异基因及新的等位基因、高通量和低成本的优点 ,非常适合于对拟进行非血缘异基因造血干细胞移植供 受体进行HLA分型。
- 赵丹丹孙玉英奚永志金荔刘楠梁飞
- 关键词：人类白细胞抗原-A基因位点造血干细胞移植
- HLA-A~*02等位基因分型技术及汉族HLA-A~*02多态性研究被引量：7
- 1999年
- 建立高分辨率的套式ＰＣＲ－ＳＳＰ，对１７个ＨＬＡ－Ａ＊０２等位基因分型。利用国际标准分型细胞进行特异性鉴定，并在５４例Ａ＊０２阳性的无血缘关系汉族健康人中应用。共检测到５个Ａ＊０２亚型，显示出较高多态性：其中Ａ＊０２１１（ｎ＝２）首次在东方人群检测到；Ａ＊０２０１频率最高，占有４８．２％；其余依次为Ａ＊０２０６、Ａ＊０２０７和Ａ＊０２０３。套式ＰＣＲ－ＳＳＰ既适用于移植供体选择，又可用于人类进化研究。
- 任素萍孔繁华金荔陈兴国屠敏
- 关键词：HLA-A抗原等位基因遗传多态性
- 单向MLC中刺激细胞的照射剂量
- 1995年
- 本文讨论了混合淋巴培养中刺激细胞的￣（６０）Ｃｏγ射线照射剂量。６个人的淋巴细胞分成６份，分别用０、６、１０、１５、２０、２５Ｇｙ的￣（６０）Ｃｏγ射线照射，然后进行混合淋巴细胞培养。结果显示在混合淋巴细胞培养中。
- 张蕊芳孙成文陈兴国金荔孔繁华
- 关键词：细胞培养淋巴细胞钴60Γ射线照射剂量
- 毒素蛋白PE40的基因克隆及序列分析被引量：5
- 1999年
- 细胞因子－受体介导的靶向杀伤作为导向治疗白血病与肿瘤的第二代新策略，是现代分子导向药物研究的最新领域之一。它是利用细胞因子与其受体的特异性结合来导向传递重组细胞因子－细菌外毒素融合蛋白以达到特异性杀伤高表达相应细胞因子受体的白血病及肿瘤细胞〔１～３〕...
- 郑黎燕奚永志孔繁华金荔陈兴国屠敏
- 关键词：白血病基因治疗基因克隆
- 新霉素耐药基因(Neo^R)的整合与表达并不改变人乳癌细胞(MDA)的原有生物学特性
- 1999年
- 目的：通过对比ＭＤＡ－ ＮｅｏＲ 与ＭＤＡ 人乳癌细胞的生物学特征，阐明原核标志基因ＮｅｏＲ 的长期稳定整合与表达是否对乳癌细胞原有的生物学特性产生影响。方法：对已建立且证实表达ＮｅｏＲ 基因＞ ６ 个月的７ 株ＭＤＡ－ＮｅｏＲ 细胞系进行Ｇ４１８ 抗性、表面抗原、细胞倍增时间、细胞周期、肿瘤细胞集落形成及裸鼠体内成瘤能力的检测。结果：ＭＤＡ－ ＮｅｏＲ 细胞对高浓度的Ｇ４１８ 仍产生抗性并表达Ｎｅｏ Ｒ 基因；其细胞倍增时间、Ｓ 期分数、肿瘤细胞体外集落形成率与ＭＤＡ 无明显区别（ Ｐ＞ ０－０５） ；角蛋白ＣＫ１９ 与表面膜抗原ＥＭＡ 的表达在两组是等同的；并且ＭＤＡ－ ＮｅｏＲ ７ 细胞系在裸鼠体内的成瘤能力与ＭＤＡ 细胞也是相似的。结论：外源标志基因ＮｅｏＲ 的长期稳定整合与表达对ＭＤＡ
- 郭斯启奚永志宋三泰金荔陈兴国孔繁华
- 关键词：新霉素耐药基因
- HLA(人白细胞抗原)血清库的建立
- 1989年
- 经两年半的努力,从4000份产后妇女的产道血中筛选出250份 HLA特异性抗血清,阳性率为6.25%,经计算机处理,其中83份血清的 r 值在0.6以上,这83份血清中包括有33个特异性,可供 HLA 系统的各研究领域使用。本研究每份产道血清用40份随机血沉血的白细胞作抗原进行筛选。抗原、抗体均为废物利用,从废物中找宝,省钱省力。本文还比较了用各型标准白细胞作抗原,用随机血沉血的细胞作抗原筛选产道血清以及用胎儿脐带血白细胞作抗原筛选其母亲产道血清三种方法的优缺点。本文还详细地介绍了实验过程中的经验和体会。
- 王增慧赵绮华郭秋霞蔡冬青何旦莎孔繁华刘东林金荔
- 关键词：特异性
