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人源鼻咽癌双价抗独特型抗体疫苗的制备及活性鉴定: 目的:构建全人源鼻咽癌双价抗独特型抗体原核表达载体,并对其表达产物作初步鉴定。方法:利用分子克隆技术依次将人源鼻咽癌抗独特型抗体G22、I50基因插入到原核表达载体pET25b(+)中,经菌落PCR,双酶切验证并测序。阳...; 王甲甲郭锋杰李跃辉李官成; 关键词：鼻咽癌抗独特型抗体疫苗原核表达; 文献传递

全人源抗结肠癌噬菌体单链抗体库的构建: 2009年; 【目的】构建全人源抗结肠癌噬菌体单链抗体库。【方法】采用体外致敏、EBV转化技术，PCR技术，噬菌体展示技术。【结果】构建了库容量达4×10^9的全人源抗结肠癌噬菌体ScFv库，ScFv基因的插入率为90％。【结论】体外致敏联合EBV转化及噬菌体展示技术制备抗结肠癌单链抗体库，这一策略是完全可行的，为进一步筛选抗结肠癌特异性单链抗体奠定了基础。; 谢平丽王红红李官成周国华李跃辉郭锋杰; 关键词：结肠肿瘤噬菌体抗体

全人源抗肝癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定被引量：6: 2008年; 目的:构建人源抗肝癌噬菌体单链抗体库,从中筛选抗肝癌单链抗体(scFv),并对其特异性进行鉴定。方法:采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体展示技术构建噬菌体抗体库。对初级抗体库进行亲和富集及ELISA筛选,获得的阳性克隆进行免疫组化鉴定并测序。结果:scFv基因与载体连接后得到库容量为1.0×108的初级噬菌体抗体库。对抗体库进行3轮正负淘选和富集后,随机挑取2798个克隆进行ELISA,发现3个克隆对HepG2呈强阳性反应,而与QSG-7701等人正常细胞系呈弱阳性或不反应。对克隆SA3进行免疫细胞化学鉴定,结果与ELISA一致。免疫组织化学鉴定表明SA3与肝癌组织和肝组织阳性率的差别有统计学意义。结论:构建了库容量达1×108的全人源抗肝癌噬菌体抗体库。通过淘选富集、ELISA和免疫组织化学鉴定获得特异性较强的噬菌体克隆,为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础。; 黄建肖艳童永清郭锋杰周国华李跃辉胡锦跃李官成; 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库单链抗体

STC1过表达抑制人宫颈癌CaSki细胞增殖被引量：1: 2011年; 目的研究STC1基因对人宫颈癌CaSki细胞增殖及周期的影响。方法 CaSki细胞分为3组:实验组转染pcDNA3.1(+)-STC1质粒;空载体转染pcDNA3.1(+)空载体;空白对照组不加任何干扰。挑选稳定表达克隆,用RT-PCR及Western blot检测细胞中STC1基因表达水平;MTT法检测转染STC1基因对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染STC1基因后细胞周期的变化。结果稳定转染后,与空载体组相比,实验组STC1基因的表达水平显著提高(P﹤0.01),CaSki细胞存活率下降(P﹤0.05),G1期细胞比例显著上升(P﹤0.05),细胞出现G1期阻滞。结论 STC1基因与CaSki细胞增殖相关,其高表达引起的宫颈癌细胞增殖速度降低可能与其所致的细胞G1期延长有关。; 李亚林郭锋杰王甲甲宋婕刘艳红李峰李跃辉; 关键词：CASKI细胞细胞增殖细胞周期

人源抗肝癌单链抗体SA3与增强型绿色荧光蛋白的融合表达及其体内靶向性研究(英文)被引量：1: 2011年; 目的:探讨人源抗肝癌单链抗体SA3与增强型绿色荧光蛋白(EGFP-SA3)的融合表达、纯化、复性及其体内靶向性。方法:将SA3,EGFP基因,插入pET-25b(+),构建EGFP-SA3/pET-25b(+)原核表达载体,测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导融合蛋白EGFP-SA3的表达,复性、纯化后经SDS-PAGE鉴定;EGFP-SA3与HepG2细胞经体外孵育后在荧光显微镜下观察单链抗体SA3与肝癌细胞的结合作用;然后通过尾静脉将其注射入荷肝癌裸鼠体内观察EGFP-SA3的体内靶向作用。结果:SA3,EGFP基因分别插入载体pET-25b(+)后,重组表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)分别行NcoI-XhoI和NcoI-EcoRI双酶切,结果发现在750 bp左右出现一条带,与EGFP基因大小一致,在1.5 kb左右处出现一条带,与EGFP和SA3两个基因片段的总大小一致,DNA测序结果证实融合表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)构建成功;重组表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE显示融合蛋白EGFP-SA3分子质量为58 kD,主要以包涵体的形式存在;纯化、复性后,免疫荧光检测结果显示SA3与HepG2细胞能特异性地靶向结合;注射了EGFP-SA3的荷肝癌小鼠的肿瘤部位有绿色荧光发出,显示EGFP-SA3具有良好的肿瘤特异性。结论:融合蛋白EGFP-SA3与HepG2细胞有较强的结合能力,单链抗体SA3有望用于肝癌的分子诊断和靶向治疗。; 黄建李跃辉郭锋杰童永清王甲甲胡锦跃李官成; 关键词：肝癌 SCFV EGFP

人源鼻咽癌双价抗独特型抗体疫苗的制备及活性鉴定被引量：1: 2010年; 目的：构建全人源鼻咽癌双价抗独特型抗体原核表达载体，并对其产物作初步鉴定。方法：利用分子克隆技术依次将G22，150插入到原核表达载体pET25b（＋）中，经菌落PCR，双酶切验证并测序。阳性重组子转化入表达菌株E．coliBL21（DE3），经IPTG诱导表达后，表达的重组蛋白经Histag纯化试剂盒纯化后复性。用Western blot方法鉴定G22-150双价蛋白的表达，ELISA方法分析其蛋白活性，并进一步观察其对外周血单个核细胞的刺激增殖情况。结果：构建的原核表达载体pET25b—G22—150经测序验证，序列正确。双价蛋白G22—150以包涵体形式高效表达，经纯化后纯度达90％以上。Westernblot鉴定表达的蛋白相对分子质量（Ms）约42000，与预期相符。ELISA鉴定复性后的蛋白已恢复活性，并能在体外刺激外周血单个核细胞的增殖。结论：成功获得了有活性的双价抗独特型抗体，为临床对鼻咽癌进行主动免疫治疗提供了理论基础。; 王甲甲郭锋杰李跃辉李官成; 关键词：鼻咽癌抗独特型抗体疫苗原核表达

太空诱变宫颈癌细胞差异表达基因的筛选及其功能初步研究: 目的：本研究利用前期构建的地面对照和太空诱变宫颈癌CaSki细胞株消减文库，筛选在地面对照和太空诱变宫颈癌CaSki细胞中差异表达的基因，并对其功能进行研究。　　方法：利用消减杂交文库制备反向Northem杂交膜，对...; 郭锋杰; 关键词：宫颈癌核转录因子KB 差异表达基因消减文库; 文献传递

从自然选择学说看肿瘤免疫被引量：1: 2008年; 当今人类生存的环境发生了变化,肿瘤的发病率和病死率也越来越高,肿瘤细胞面对强大的免疫系统生存下来,说明肿瘤生存能力增强已经适应了其生存环境,这是环境对肿瘤细胞自然选择的结果。自然选择学说始终贯穿于肿瘤免疫学的免疫监视理论和免疫编辑学说之中,从自然选择的角度看肿瘤免疫学,将为肿瘤治疗策略开创一条新路。; 郭锋杰李官成; 关键词：自然选择肿瘤免疫免疫监视免疫编辑

STCl过表达对宫颈癌CaSki细胞生物学行为的影响: 2011年; 【目的】研究转染STCl基因对人宫颈癌CaSki细胞生物学行为的影响。【方法】通过MTT、集落形成、划痕实验、Tranwell实验、裸鼠成瘤等方法检测STCl基因转染对宫颈癌CaSki细胞增殖、迁移、侵袭、体内成瘤能力的影响。【结果1MTT和集落形成实验表明，与空载体组相比，CaSki／STCl细胞生长受到抑制，细胞存活率和集落形成率较低（P〈0．05）。划痕实验显示CaSki／STCl较CaSki／NC组细胞迁移率降低（35±3．2％ VS 64±4．5％，P〈0．05）。TranweⅡ实验显示CaSki／NC的85±5，而CaSki／STCl组穿膜细胞数较少为54±4（P〈0．05）。裸鼠成瘤实验显示，CaSki／STCl组和CaSki／NC组的肿瘤平均质量依次为（O．285士0．057）g、（0．523±0．154）g，差异具有统计学意义（P,0．01）。【结论】sTCl过表达抑制宫颈癌细胞增殖、转移及侵袭，STCl基因可用于宫颈癌的基因治疗。; 李亚林郭锋杰王甲甲宋婕刘艳红李官成

利用抑制性消减杂交技术构建太空诱变宫颈癌细胞cDNA消减文库被引量：1: 2009年; 目的利用抑制性消减杂交技术构建太空诱变宫颈癌细胞的消减文库，为进一步从基因表达水平研究空间特殊环境影响肿瘤细胞生物学行为改变的分子机制奠定基础。方法采用SuperSMART和SSH技术，以太空诱变的宫颈癌48A9细胞株作为Tester，地面正常对照组宫颈癌细胞株作为Driver，分离太空诱变的宫颈癌48A9细胞中差异表达的基因片段；连接T载体，转化宿主菌，构建太空诱变的宫颈癌48A9细胞cDNA抑制性消减文库。结果经蓝白筛选后随机挑取300个阳性克隆，以接头1和2R内侧序列为引物进行菌液PCR扩增鉴定阳性克隆，结果显示其中288个克隆有插入片段，阳性率为96％，大小分布在0．2—1．0kb间。结论本实验利用抑制性消减杂交技术成功的构建了高质量的太空诱变宫颈癌细胞消减文库，为进一步从基因水平阐明太空特殊环境对肿瘤细胞生物学行为改变的分子机制奠定了基础。; 张志杰郭锋杰童永清李跃辉谢平丽李官成; 关键词：基因文库

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郭锋杰

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