李官成
- 作品数：138 被引量：233H指数：8
- 供职机构：中南大学湘雅医学院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金湖南省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学航空宇航科学技术更多>>
- 儿童急性淋巴细胞白血病复发与基因突变相关性被引量：3
- 2016年
- 急性淋巴细胞白血病是儿童恶性肿瘤中最常见的类型，急性淋巴细胞白血病复发仍然是治疗的难题。随着近几年关于儿童急性淋巴细胞白血病复发机制的研究逐渐深入，越来越多的基因异常已经被证实与儿童急性淋巴细胞白血病复发相关，包括IKZF1缺失、PRED1缺失、JAK突变、CREBBP突变、CEBPE突变、ARID5B突变等。该文重点综述以上基因突变对儿童急性淋巴细胞白血病复发的影响。
- 王璟琳李官成
- 关键词：儿童急性淋巴细胞白血病白血病复发基因突变儿童
- 鼻咽癌人源抗独特型单链抗体诱导的免疫应答被引量：1
- 2010年
- 目的观察鼻咽癌人源抗独特型单链抗体G22ScFv在小鼠体内诱导的免疫应答,探讨其作为鼻咽癌疫苗的可能性。方法在大肠杆菌中诱导表达G22ScFv并进行纯化,以纯化的G22ScFv免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA及竞争抑制ELISA检测免疫小鼠特异性体液免疫应答水平;流式细胞术检测免疫小鼠脾T淋巴细胞表型的变化。结果纯化的融合蛋白纯度达95%以上,且具有良好的反应原性。经ELISA检测,G22ScFv免疫后,小鼠产生了Ab3,且小鼠脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞数量升高。结论G22ScFv可诱导机体产生体液免疫和细胞免疫应答,为鼻咽癌人源抗独特型抗体疫苗的临床应用奠定了基础。
- 汪静李官成童永清张志杰杨丞肖艳孙硕水漩
- 关键词：鼻咽癌免疫应答
- GOLPH2的原核表达、纯化、抗体制备和初步应用被引量：1
- 2011年
- 目前发现GOLPH2蛋白与肝癌密切相关,将golph2基因进行克隆、表达并制备多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.应用RT-PCR技术,从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增得到golph2 cDNA,将其克隆到原核表达载体pET21a(+)-TRX内、转化大肠杆菌DH5a,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.His-tag磁珠纯化试剂盒纯化重组蛋白GOLPH2,SDS-PAGE鉴定.将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA、Western blot方法检测抗体的灵敏度和特异性,并测定临床血清标本中GOLPH2蛋白水平.成功地构建了表达TRX-GOLPH2融合蛋白的原核表达质粒pET21a(+)-TRX-GOLPH2.并在大肠杆菌BL21(DE3)内得以高效表达,且以可溶性的形式存在.SDS-PAGE和Western blot证实,重组GOLPH2蛋白质与预期结果一致.抗血清能够特异地识别52 kD重组蛋白、73 kD细胞裂解液和血清蛋白质.成功制备了GOLPH2蛋白质和多克隆抗体,能用于后续研究.
- 李峰刘艳红谢平丽李跃辉李官成
- 关键词：肝细胞癌蛋白质表达多克隆抗体
- 人源抗肝癌单链抗体SA3与增强型绿色荧光蛋白的融合表达及其体内靶向性研究(英文)被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨人源抗肝癌单链抗体SA3与增强型绿色荧光蛋白(EGFP-SA3)的融合表达、纯化、复性及其体内靶向性。方法:将SA3,EGFP基因,插入pET-25b(+),构建EGFP-SA3/pET-25b(+)原核表达载体,测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导融合蛋白EGFP-SA3的表达,复性、纯化后经SDS-PAGE鉴定;EGFP-SA3与HepG2细胞经体外孵育后在荧光显微镜下观察单链抗体SA3与肝癌细胞的结合作用;然后通过尾静脉将其注射入荷肝癌裸鼠体内观察EGFP-SA3的体内靶向作用。结果:SA3,EGFP基因分别插入载体pET-25b(+)后,重组表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)分别行NcoI-XhoI和NcoI-EcoRI双酶切,结果发现在750 bp左右出现一条带,与EGFP基因大小一致,在1.5 kb左右处出现一条带,与EGFP和SA3两个基因片段的总大小一致,DNA测序结果证实融合表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)构建成功;重组表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE显示融合蛋白EGFP-SA3分子质量为58 kD,主要以包涵体的形式存在;纯化、复性后,免疫荧光检测结果显示SA3与HepG2细胞能特异性地靶向结合;注射了EGFP-SA3的荷肝癌小鼠的肿瘤部位有绿色荧光发出,显示EGFP-SA3具有良好的肿瘤特异性。结论:融合蛋白EGFP-SA3与HepG2细胞有较强的结合能力,单链抗体SA3有望用于肝癌的分子诊断和靶向治疗。
- 黄建李跃辉郭锋杰童永清王甲甲胡锦跃李官成
- 关键词：肝癌SCFVEGFP
- 体外致敏鼻咽癌患者B细胞构建抗独特型噬菌体抗体库
- 2001年
- 李官成何小鹃等
- 关键词：鼻咽癌噬菌体抗体库
- 鼻咽癌中生长因子细胞因子mRNA差异表达分析被引量：7
- 2000年
- 目的 :考察鼻咽癌中差异表达的生长因子 细胞因子 ,推测鼻咽癌发生中可能存在的免疫机制。方法 :采用cDNA阵列杂交技术 ,同时对 98个己知与肿瘤相关的生长因子 细胞因子在鼻咽癌、正常鼻咽组织及其他几种头颈部鳞癌中的mRNA表达水平进行筛查 ,筛选出在鼻咽癌中差异表达的生长因子 细胞因子基因。结果 :在鼻咽癌中上调的基因包括 :早期生长应答蛋白 1,肝癌来源生长因子 ,白介素 1β ,血小板来源生长因子A链 ,干细胞因子 ,畸胎瘤来源生长因子 ,干扰素诱导肽、蛋白 ,干扰素调节因子及干扰素受体等 ;在鼻咽癌中下调的基因有 :TGF β 2等。 结论 :鼻咽癌细胞可能自分泌或促进分泌大量生长因子 ,鼻咽癌侵润淋巴细胞分泌的细胞因子主要为Th1细胞型。
- 谢鹭许亮国蓝轲何志巍李官成姚开泰
- 关键词：鼻咽癌细胞因子CDNA阵列MRNA
- HOXA7促进宫颈癌细胞体外增殖的实验研究
- 2018年
- 该研究敲低同源盒基因A7(homeobox genes A7,HOXA7)后,研究宫颈癌细胞Siha、Caski体外增殖的影响。将HOXA7基因的si-RNA稳定转染至Siha、Caski细胞;RNA干扰的效果采用RTPCR、Western blot进行鉴定;细胞生长速度采用MTT法、细胞倍增时间实验来进行检测;平板克隆形成实验检测细胞接种的存活率;流式细胞术检测细胞周期。RNA干扰结果显示,敲低HOXA7基因后,Siha、Caski细胞中HOXA7表达下调。MTT结果显示,实验组Siha/si-HOXA7、Caski/si-HOXA7细胞生长速度明显下降。研究发现,对照组细胞Siha/NC、Caski/NC与实验组细胞Siha/si-HOXA7、Caski/si-HOXA7的平均倍增时间为分别为5.652±0.352 h、4.650±0.340 h、7.342±0.331 h和6.987±0.330 h;对照组细胞Siha/NC、Caski/NC与实验组细胞Siha/si-HOXA7、Caski/si-HOXA7的克隆形成率分别为35.400%±1.429%、31.700%±1.943%、24.200%±1.098%和21.200%±1.838%。分别与对照组细胞Siha/NC、Caski/NC比较,实验组细胞Siha/si-HOXA7、Caski/si-HOXA7增殖、倍增时间和克隆形成能力差异极显著(P<0.01)。实验组细胞周期也发生改变:G_1期细胞增多、S期细胞减少。这说明,HOXA7基因可以促进宫颈癌细胞Caski、Siha的增殖,这为进一步探索HOXA7基因的功能及研究宫颈癌的发病机制打下了坚实的基础。
- 陈军李跃辉刘朝阳李跃辉杨小会李官成
- 关键词：RNA干扰宫颈癌
- 用体外致敏的鼻咽癌患者B细胞构建噬菌体抗独特型抗体库被引量：3
- 2003年
- 目的 :构建噬菌体人源抗独特型抗体库。方法 :体外致敏并用EBV转化鼻咽癌患者的PBMC。用PCR分别扩增VH 和VL 基因并组成ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后 ,转化大肠杆菌MC10 6 1,构建噬菌体呈现型ScFv库。结果 :经EBV转化的 10例鼻咽癌患者的PBMC中 ,8例有鼻咽癌抗独特型抗体产生。经多次PCR ,扩增出 5种VH(γ、μ)和 7种VL(κ、λ)基因 ,经连接组成 14种ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后 ,导入大肠杆菌MC10 6 1。经四环素抗性筛选 ,得到库容为 1.1× 10 7的初级噬菌体抗独特型抗体库 ,噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为 70 %。结论 :用体外致敏法结合噬菌体抗体库技术 ,制备人源抗独特型单链抗体(Ab2 βScFv)
- 何小鹃李官成朱建高李跃辉
- 关键词：鼻咽癌噬菌体呈现技术抗独特型抗体
- 大肠癌相关抗原CA--Hb<,3>的纯化及其在胃肠道肿瘤血清学诊断中的应用
- 李官成
- 人源鼻咽癌双价抗独特型抗体疫苗的制备及活性鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的：构建全人源鼻咽癌双价抗独特型抗体原核表达载体，并对其产物作初步鉴定。方法：利用分子克隆技术依次将G22，150插入到原核表达载体pET25b（＋）中，经菌落PCR，双酶切验证并测序。阳性重组子转化入表达菌株E．coliBL21（DE3），经IPTG诱导表达后，表达的重组蛋白经Histag纯化试剂盒纯化后复性。用Western blot方法鉴定G22-150双价蛋白的表达，ELISA方法分析其蛋白活性，并进一步观察其对外周血单个核细胞的刺激增殖情况。结果：构建的原核表达载体pET25b—G22—150经测序验证，序列正确。双价蛋白G22—150以包涵体形式高效表达，经纯化后纯度达90％以上。Westernblot鉴定表达的蛋白相对分子质量（Ms）约42000，与预期相符。ELISA鉴定复性后的蛋白已恢复活性，并能在体外刺激外周血单个核细胞的增殖。结论：成功获得了有活性的双价抗独特型抗体，为临床对鼻咽癌进行主动免疫治疗提供了理论基础。
- 王甲甲郭锋杰李跃辉李官成
- 关键词：鼻咽癌抗独特型抗体疫苗原核表达
