石成华
- 作品数：57 被引量：110H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- AB_5肠毒素A、B亚基比例表达调控机理的研究
- 2000年
- 霍乱毒素（CT）及大肠杆菌热不稳定肠毒素（LT）的B亚基基因的表达水平是A亚基的5～7倍。研究发现A基因内部存在着1个80bp长的翻译调控区，含有3个翻译起始序列（TIR），其第2个翻译起始序列的终止密码与第3个翻译起始序列的起始密码重叠，因而形成翻译偶联，继续翻译至A基因的终止密码。将TIR3的起始密码ATG突变为ATC后TIR2及TIR3失去功能，这时下游报告基因（类似于ctxB基因）表达水平降低9倍；为了更直接验证，去除了ctxA基因中与翻译起始调控及ctxA、B基因间翻译偶联调控所必须序列之外的其他序列，结果仍然表明TIR3的ATG突变为ACA后，下游基因表达水平降低9倍。结果表明：A亚基基因内部的翻译调控元件及翻译偶联是AB5素A、B亚基基因比例表达的原因。
- 曹诚李平王芃李杰之石成华马清钧
- 关键词：霍乱毒素操纵子翻译调控亚基
- RT-PCR方法检测乳癌组织mdr-1基因表达标准的建立被引量：6
- 1997年
- 目的 合理制定判断多药抗药 ( multidrug resistance,MDR) mdr- 1基因表达的标准 ,为其客观预测化疗疗效和预后提供依据。方法 应用逆转录 -多聚酶链式反应 ( RT- PCR)技术 ,检测了 82例次乳癌组织的 mdr- 1基因表达。用 SAS软件对数据进行单变量分析。结果 本组瘤群 mdr- 1基因表达呈明显的右偏态分布 ( P<0 .0 0 0 1)。遂以百分位数值 P50 ( mdr- 1/β2 - MG=0 .2 )、P75( mdr- 1/β2 -MG=0 .6)作为初步分级标准 ,与其中 56例乳癌标本进行阿霉素 ( ADM)、长春花碱酰胺 ( VDS)、长春新碱 ( VCR)体外药敏试验的结果和 32例复发转移乳癌患者体内化疗效果分别进行比较。结果表明 ,mdr- 1/β2 - MG<0 .2时 ,其与 3种药物体外耐药和患者体内化疗无效的符合率较低 ;比值≥ 0 .2～ <0 .6时 ,符合率虽有所上升 ,但仍约有 30 %～ 50 %病例数与其体内、外药物耐受不符合 ;比值≥ 0 .6时 ,符合率则明显提高。鉴于上述结果 ,将 mdr- 1基因表达分为 3个等级 :mdr- 1/ β2 - MG<0 .2 ( P50 )为mdr- 1基因阴性表达 ;≥ 0 .2～ <0 .6( P75)为 mdr- 1基因低度阳性表达 ;≥ 0 .6为 mdr- 1基因高度阳性表达。结论 不同程度的 mdr- 1基因表达水平可以客观反映细胞对药物的耐受和化疗效果。作者制定判断 mdr- 1基因表达?
- 刘晓晴宋三泰石成华徐建明汤仲明江泽飞
- 关键词：乳腺肿瘤基因表达聚合酶链反应MDR-1
- 丙型肝炎病毒河北定州株C33c基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达
- 1996年
- 采用反转录ＰＣＲ方法从河北定州地区献血员血清中克隆了丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）的Ｃ３３ｃ抗原基因，序列分析结果表明，该株的Ｃ３３ｃ基因和中国泰安株的同源性为９１．０％，氨基酸序列同源性为９２．２％；与ＨＣＶ河北株的同源性分别为９１．３％和９６．２％；和日本ＪＫ１株的同源性分别为９１．６％和９４．８％。克隆的基因在大肠杆菌中得到表达和纯化。
- 曹诚石成华李平佟义贞马清钧
- 关键词：丙型肝炎病毒抗原聚合酶链反应
- 薄层扫描法测定寡核苷酸含量被引量：4
- 1993年
- 建立了薄层扫描测定寡核苷酸含量的新方法.与传统方法相比,该方法具有简单、微量、样品间无交叉污染等优点,该方法的线性方程 Y=—155.7+0.1428X),相关系数(r=0.9989),线性范围(10—3000ng),平均回收率(97.33%)及平均变异系数(5.5%)均属优良.
- 王升启马立人张京生石成华
- 关键词：薄层扫描寡核苷酸
- HeLa细胞中编码人组织型纤溶酶原激活物K2P结构域突变体cDNA的克隆及特性
- 1999年
- 组织型纤溶酶原激活物(t-PA)在人体纤溶系统中发挥着重要作用。基因重组t-PA已被用于急性心肌梗死等血栓性疾病的溶栓治疗。另外,t-PA还与肿瘤浸润和转移等多种过程有关,因此对t-PA进行功能结构研究具有重要应用价值和理论意义。本实验用RT-PCR方法从豆蔻酰佛波醇乙酯(phorbol myristate acetate,PMA)处理的HeLa细胞扩增并克隆获得了人t-PA K2P结构域的编码cDNA。序列分析显示该序列含有两个碱基突变,分别导致了成熟蛋白分子两个氨基酸践基序列的改变。第263位密码子突变(ACC→GCC)导致Thr^(263)→Ala^(263),另一突变(CTG→CCG)导致Leu^(485)→Pro^(485)。两个突变分别位于K2和P结构域的连接区和P区。将此含有突变的K2Pt-PA cDNA重组到原核表达载体,在大肠杆菌中获得了表达。纤维蛋白平板法检测显示重组K2Pt-PA复性后具有纤溶活性。以上结果表明HeLa S3细胞表达一种具有纤溶活性的t-PA突变体。
- 崔立斌马清钧孙光周平坤孙玉龙石成华
- 关键词：组织型纤溶酶原激活物HELA细胞基因克隆
- CTB与HCV抗原决定簇融合蛋白的抗原性及其在抗HCV ELISA试剂盒中的应用
- 1994年
- 系统研究了通过霍乱毒素B亚基与HCV的4个抗原决定簇进行基因融合所表达的12种融合蛋白中HCV抗原决定簇的反应原性,探索了以融合蛋白为抗原,进行抗-HCV检测的途径。结果表明,多数融合蛋白中HCV抗原决定簇均能与对应的HCV抗体结合。以融合蛋白95082为抗原研制的抗-HCV ELISA试剂检测122名献血员血清,结果与美国雅培公司抗-HCV ELISA试剂检测的结果完全一致,经药品生物制品检定所检定,其特异性、灵敏度、精密性及稳定性均达到国家卫生部抗-HCV ELISA试剂的暂行检定标准。
- 曹诚马清钧于公义石成华李平李杰之佟义贞张艳红张京生
- 关键词：基因融合丙型肝炎病毒
- 人胰岛素样生长因子-2 cDNA的PCR扩增及序列分析
- 1994年
- 人胰岛素样生长因子(Human Insulin-like growth factor,简称hIGF)是一类既有细胞分化和增殖活性,又有胰岛素样作用的多肽,包括IGF-1和IGF-2两种。其中IGF-1的功能比较清楚,而IGF-2的作用正在研究中,可能在胎儿的生长发育及脑组织和神经系统中起重要作用。IGF-2能刺激一些细胞系的生长,对不同的肿瘤起自分泌和旁分泌生长因子的作用。最近又发现IGF-2能刺激神经及肌肉的再生。由于天然IGF-2的分离困难。
- 吴雅旭石成华陈国凤
- 关键词：PCR扩增INSULIN自分泌克隆表达基因工程方法
- 恶性疟原虫子孢子CS抗原融合基因的表达及其生物活性
- 1997年
- 采用遗传工程技术获得了含有恶性疟原虫子孢子CS抗原融合基因的重组质粒pMC055－CS的工程菌株，能高效分泌CS抗原的融合蛋白至胞外，可达25mg／L．具有霍乱毒素B亚单位（CT－B）和子孢子CS的抗原性．将纯化的融合蛋白免疫C57纯系小鼠，免疫后抗CT－B抗体滴度可达1：3200～6400，抗CS抗体滴度可达1：320～640．免疫小鼠采用约氏疟子孢子腹腔攻击，保护率达34～45％．
- 李杰之马清钧曹诚于秀琴石成华
- 关键词：恶性疟原虫子孢子基因融合生物活性
- 重组霍乱毒素B亚基与恶性疟原虫多表位融合蛋白的免疫原性研究被引量：1
- 2000年
- 目的 评价霍乱毒素B亚基与恶性疟原虫多价抗原的融合蛋白的免疫原性。方法 在大肠杆菌中表达重组霍乱毒素与恶性疟原虫多价抗原的融合蛋白 ,通过免疫小鼠评价融合蛋白的免疫原性。结果 通过亲和层析纯化霍乱毒素B亚基与恶性疟原虫多价抗原的融合蛋白 ,不加任何佐剂 ,以 5 0 μg/只的剂量免疫C5 7BL/ 6J小鼠 ,3次免疫后 ,CTB抗体滴度达 1∶6 40 0 ,抗疟原虫抗体滴度 1∶16 0 0 ,其CTL活性为 2 0 7%。结论 霍乱毒素具有较好的佐剂作用 ,经融合蛋白免疫的小鼠能产生良好的体液和细胞免疫 。
- 李平曹诚钟辉石成华马清钧
- 关键词：疟疾疫苗免疫原性恶性疟原虫
- 霍乱毒素B亚基融合蛋白表达系统的构建被引量：2
- 1994年
- 霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）是良好的免疫佐剂和载体蛋白。本研究通过定点突变，在ＣＴＢ基因（ｃｔｘＢ）３′端终止密码前引入了限制性内切酶ＥｃｏＲＩ，构建了质粒ｐＭＣ０５。ｐＭＣ０５中ＣＴＢ与下游ｌａｃＺ′基因阅读框架相同，转化大肠杆菌后能够表达ＣＴＢ与β－半乳糖苷酶α肽的融合蛋白；所表达的融合蛋白能与ＧＭ１结合，说明融合蛋白保持ＣＴＢ的基本高级结构和生物学活性；融合蛋白能与抗－ＣＴＢ抗体结合，说明融合蛋白具有ＣＴＢ的抗原性。以上结果表明：通过将外源抗原决定簇基因融合至ｃｔｘＢ的３′端，在大肠杆菌中表达融合蛋白，构建基因工程肽苗是可行的。还探索了转录终止序列对融合基因蛋白表达水平的影响，构建了高效表达融合蛋白的载体－宿主系统。
- 曹诚石成华张京生马清钧
- 关键词：基因融合
