王小波
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- TAT透膜肽介导VP3蛋白诱导HepG_2细胞凋亡效应的研究被引量：1
- 2006年
- 目的探讨TAT透膜肽介导VP3融合蛋白穿透生物膜及诱导HepG2细胞凋亡的效应,为临床应用生物大分子药物治疗肿瘤提供实验基础。方法常规构建TAT-VP3、TAT-GFP及TAT-GFP-VP3的3种融合蛋白的pET28 a原核表达载体,IPTG诱导融合蛋白表达,经镍金属鳌合层析柱纯化获得融合蛋白。通过蛋白转导实验观察其穿透生物膜的效应,利用DAPI染色及TUNEL法观察其诱导HepG2细胞凋亡的效应。结果融合蛋白TAT-GFP及TAT-GFP-VP3可进入体外培养的HepG2细胞,在荧光下可见绿色荧光,融合蛋白TAT-VP3及TAT-GFP-VP3可诱导体外培养的细胞凋亡。结论在VP3的N端加上TAT透膜肽形成的融合蛋白可有效穿透细胞膜,TAT-VP3融合蛋白能诱导HepG2细胞凋亡。
- 王小波孙军彭冬君闫莹邹珺陈娟宗义强屈伸
- PTD4-GFP-VP3融合蛋白在人肝癌细胞HepG_2中的定位观察及凋亡诱导效应的实验研究被引量：2
- 2007年
- 目的观测PTD4-GFP-VP3融合蛋白诱导人肝癌细胞HepG_2的凋亡效应及其在肿瘤细胞中的定位与其凋亡效应关系的研究。方法构建PTD4-GFP-VP3融合蛋白的原核表达载体,利用人源肝癌细胞株HepG_2,经细胞透膜实验在激光共聚焦显微镜下观察PTD4介导的融合蛋白透膜效应,DAPI染色观测该蛋白在细胞中的定位;利用TUNEL法观察PTIM-GFP-VP3融合蛋白诱导肿瘤细胞的凋亡效应,并利用流式细胞仪检测其凋亡率。结果PTD4-GFP-VP3融合蛋白在孵育细胞0.5h后即可透过细胞膜进入到细胞质中,12h后定位于细胞核并诱导肿瘤细胞凋亡,48h达到最高凋亡效应。结论PTD4能携带GFP-VP3融合蛋白穿透细胞膜,在肿瘤细胞中具有核定位效应,并能诱导肿瘤细胞凋亡,为后期进一步研究VP3的凋亡机制及其抗肿瘤治疗奠定了基础。
- 闫莹孙军毕昊王小婷彭冬君邹珺王小波宗义强屈伸
- 关键词：VP3蛋白
