刘胜旺
- 作品数：261 被引量：1,145H指数：19
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 鸡传染性支气管炎病毒弱毒疫苗株及其应用
- 刘胜旺
- 鸡传染性支气管炎弱毒疫苗株LDT3-A株是针对中国鸡传染性支气管炎流行现状而研制的具有自主知识产权的新型活疫苗株。该疫苗株具有安全性好、保护率高的特点，能有效保护中国主要流行鸡传染性支气管炎病毒的感染，避免了现有商品化疫...
- 关键词：
- 关键词：传染性支气管炎养殖场
- 鸡传染性支气管炎病毒LH2/01/10的分离鉴定
- 2003年
- 20 0 1年在我国黑龙江省某鸡场疑似鸡传染性支气管炎的发病鸡群中 ,分离到一株病毒 ,将该病毒接种 10日龄SPF鸡胚 ,取 72h的尿囊液进行电镜观察并用 1%胰酶处理 ,结果发现尿囊液中存在典型的冠状病毒 ,用胰酶处理过的尿囊液能凝集SPF鸡的红细胞 ,初步鉴定为鸡的传染性支气管炎病毒。将该病毒尿囊液再次接种 10日龄SPF鸡胚 ,通过病毒对鸡胚的致病作用、病毒超微形态特征以及病毒凝集鸡红细胞的特性等对该毒株进行研究 ,结果表明 :经胰酶处理后的病毒尿囊液可凝集鸡红细胞。鸡胚的第二代病毒尿囊液 (命名为LH2 / 0 1/ 10 )分别接种 1日龄和 15日龄的SPF鸡 ,发现对不同日龄的鸡表现不同的致病性 ,对 1日龄接种鸡和同笼饲养的同居对照鸡致病力高 ,发病率为 11/ 11,致死率分别为 4 / 6和 2 / 5 ;15日龄接种和同居感染鸡发病率为 9/ 9,致死率分别为 1/ 5和 1/ 4。实验应用反转录_聚合酶链式反应技术对LH2 / 0 1/ 10的膜蛋白基因进行扩增、克隆和序列测定 ,结果表明该基因具有IBVM基因的共有分子特征 ,与IBV标准株M4 1的M基因核苷酸的同源性为 90 % ,氨基酸的同源性为 91%。这从分子水平进一步证实引起鸡群死亡的病毒为鸡传染性支气管炎病毒。
- 刘丽玲孔宪刚刘胜旺刘玉芬谷守林
- 关键词：传染性支气管炎病毒
- 鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白的研究进展被引量：11
- 2001年
- 贺秀媛孔宪刚刘胜旺王建华刘丽玲
- 关键词：传染性支气管炎病毒S1蛋白分子生物学抗原位点
- 鸡传染性支气管炎病毒LX4株mRNA_5和mRNA_6 cDNA的分子特征被引量：26
- 2003年
- 本研究参照已发表的IBV基因序列设计合成了一对引物,经反转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription-polymerase Chin Reaction,RT-PCR)技术扩增得到我国地方分离株LX4 mRNA_5和mRNA_6的全部cDNA大小约1.7kb的片段。将该片段克隆并进行序列测定,与国内外部分参考毒株的相应序列比较分析发现:LX4 5a基因与已发表的国内外IBV毒株之间同源性很低,而这些参考毒株间5a基因同源性却很高(推导的氨基酸同源性在90％以上)。5b基因与国内分离株D971同源性最高。在所选的12株参考毒株中,LX4 N基因推导氨基酸同源性与国内分离株SD/97/02最高(94％),与HB次之(93％),与其他毒株核苷酸和推导氨基酸同源性在89％和92％以下。对已报道的N基因所编码蛋白的三个保守碱性区同源性比较发现,LX4在第66-88位与Beau、M41、H52及FIB同源性均为100％。在第181-234位,推导氨基酸同源性与SD/97/02最高(94％)。在第334-373位推导氨基酸同源性与H120和ZJ971推导氨基酸同源性均为93％,与其他毒株在82％以下。同时还发现在c末端350-409位,LX4与H120推导氨基酸的同源性为100％,与HB次之(98％),与其他毒株在95％以下。以上研究结果提示:我国地方分离毒株LX4 mRNA_5和mRNA_6 cDNA序列与国内其他分离株最高,表明与国内其他分离株具有较近的?
- 刘胜旺杜恩岐孔宪刚杨增岐
- 关键词：传染性支气管炎病毒CDNA分子特征
- 鸡细胞因子研究进展被引量：31
- 2000年
- 与人类和哺乳动物比较 ,以鸡为主的非哺乳动物细胞因子的研究不但在研究鸡免疫系统的发生及其免疫调节机理中具有重要作用 ,而且在与人类和哺乳动物的比较免疫学、生物发育和进化的研究中具有重要意义。本文从发现、生物学特性及分子特征等方面对鸡白细胞介素 - 1、6、8、骨髓单核细胞生长因子、转移生长因子_β家族、肿瘤坏死因子_α。
- 刘胜旺孔宪刚卢景良
- 关键词：细胞因子免疫调节白细胞介素肿瘤坏死因子
- 我国非洲猪瘟防控策略的哲学思考被引量：4
- 2019年
- 非洲猪瘟是猪的一种烈性传染病,是全球公认的养猪业第一杀手。2018年8月我国首次发生非洲猪瘟以来,先后在31个省份和香港地区发生130余起疫情,给生猪产业造成巨大冲击。党中央、国务院高度重视非洲猪瘟防控,农业农村部将非洲猪瘟防控列入2019年的五件大事之一。本文学习运用马克思主义哲学的立场、观点和方法,分析我国非洲猪瘟的流行特点、防控现状、面临挑战,并思考提出相关防控策略和措施建议,以期对防控工作提供借鉴和参考。
- 翟新验张衍海刘胜旺郭辉
- 关键词：非洲猪瘟防控策略哲学思考
- 鸭β-防御素2基因的克隆、表达和表达产物的生物学特性分析被引量：12
- 2009年
- 【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素(AvBD)2基因,在大肠杆菌中高效表达,检测重组鸭AvBD2蛋白的生物学特性。【方法】应用RT-PCR技术从鸭胰腺组织中扩增鸭AvBD2基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-2的氨基酸序列构建系统进化树,将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对该重组蛋白进行纯化,测定体外抗菌活性与理化特性。【结果】鸭胰腺组织中克隆出鸭AvBD2基因的cDNA大小为195bp,编码64个氨基酸。同源性分析表明,鸭AvBD2与其它物种AvBD2同源性较高。凝胶电泳结果显示重组鸭AvBD2蛋白在原核高效表达(分子量约为32kD),对多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌有较高抗菌活性,对大肠杆菌与猪霍乱沙门氏菌的抗菌活性较弱。重组鸭AvBD2蛋白对上述细菌的最小抑菌浓度为15.25～125μg·ml-1,对猪霍乱沙门氏菌最小抑菌浓度大于400μg·ml-1。重组鸭AvBD2蛋白在-20～100℃或pH3～12条件下处理30min后仍有抗金黄色葡萄球菌作用。【结论】克隆并表达了鸭AvBD2基因,表达产物具有抗菌活性,对温度和酸碱度有较高的稳定性。
- 王瑞琴廖文艳马得莹韩宗玺刘胜旺
- 关键词：遗传进化重组蛋白抗菌活性
- 鸡传染性喉气管炎病毒gG蛋白间接竞争ELISA方法的建立及初步应用被引量：4
- 2023年
- 鸡传染性喉气管炎是由鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。为建立检测该病毒g G蛋白的间接竞争ELISA方法,本研究以原核系统表达ILTV g G蛋白,并采用切胶纯化该重组g G蛋白(rg G)后经western blot检测纯化的rg G (P-rg G)与本研究室制备的g G蛋白单克隆抗体(MAb) 3C8的反应原性。将MAb 3C8采用Protein G亲和层析柱纯化后与HRP偶联(HRP-3C8),利用间接ELISA法测定纯化HRP-3C8的效价。结果显示,P-rg G与MAb 3C8发生了特异性反应,在30 ku处出现特异性条带。纯化的HRP-3C8效价达1∶51 200。以P-rg G作为包被抗原,以纯化的HRP-3C8作为检测抗体,通过对各反应条件优化后初步建立了ILTV g G蛋白间接竞争ELISA (ic-ELISA)检测方法。条件优化结果显示,P-rg G包被量为12.5 ng/孔,HRP-3C8抗体稀释度为1∶10 000,将待检样品与HRP-3C8抗体在37℃孵育40 min后加入ELISA板再反应20 min,TMB底物反应10 min。将待检样品的抑制率(PI)≥31.08%判为阳性;采用该方法分别检测ILTV、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡痘病毒(FPV),通过计算PI,评估该方法的特异性;按照Reed-Muench法测定ILTV K317株的鸡胚半数感染量(EID_(50)),再将该病毒2倍倍比稀释(1∶10~1∶2 560)后,以该ic-ELISA方法检测,评估该方法的敏感性;利用同批次和不同批次P-rg G分别包被ELISA板,采用该ic-ELISA方法检测ILTV阳性及阴性样品,评估该方法的重复性。结果显示,该方法除了能检测ILTV外,其余相关病毒均为阴性结果;将ILTV稀释至1∶320时检测结果仍为阳性,相当于75 EID_(50)/0.1 m L;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%。利用该方法及荧光定量PCR (q PCR)分别检测50份临床ILTV、IBV和FPV感染鸡的口咽拭子和喉头组织、10份ILTV活疫苗,该方法检测结果显示,阳性检测率为73.3%(44/60),阴性率为26.7%(16/60)。q PCR的检测结果显示,阳性检测率为81.7%(
- 郭鹏宇赵妍刘胜旺
- 关键词：鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体间接竞争ELISA
- 传染性支气管炎病毒诱导Vero细胞发生自噬促进病毒的复制
- 2024年
- 为探究禽传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)能否诱导细胞自噬及其对病毒复制的影响,本研究利用IBV细胞适应株CEA接种DF-1和Vero细胞,通过Western-blot、透射电镜和激光共聚焦显微镜检测自噬通路关键蛋白LC3和P62的表达和分布以及自噬小体的形成情况,并通过自噬抑制剂和诱导剂处理评估了自噬对IBV复制的影响。结果显示,IBV不能在DF-1细胞中诱导LC3的转化,但能够诱导Vero细胞中LC3-II和P62的水平升高,并能在Vero细胞中诱导形成自噬小体以及LC3-II向自噬体中的聚集,表明IBV能够诱导Vero细胞发生完整自噬。用自噬抑制剂渥曼青霉素和氯喹处理细胞能够抑制IBV诱导的自噬以及病毒的复制,而用自噬激活剂雷帕霉素处理则能够促进病毒的复制。综上所述,IBV能够在Vero细胞中诱导自噬的发生,从而促进病毒的复制。
- 杨雪晴孙军峰李慧昕韩宗玺刘胜旺
- 关键词：禽传染性支气管炎病毒自噬
- 应用鸡传染性支气管炎病毒重组核衣壳蛋白建立ELISA抗体检测试剂盒的研究
- 引言鸡传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种鸡的急性、高度接触性的传染病,是威胁养鸡生产的重要疾病之一。IBV血清型众多,并不断有新的变异株出现,给IB的预防和诊断带来了很大的困难。IBV的核...
- 张宇韩宗玺刘胜旺
