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青蛤Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆及其在组织间的表达分析被引量：2: 2014年; 利用构建的SMART-cDNA文库及高通量测序方法，获得了青蛤Kazal家族丝氨酸蛋白酶抑制剂基因（Serine Protease Inhibitor，SPI）的全长序列，采用荧光定量PCR方法分析了SPI在青蛤各组织的表达情况，并在鳗弧菌胁迫下分析了SPI在青蛤血液中的时序表达关系。结果表明，青蛤SPI基因全长587 bp，CDS为67-520 bp，编码151个氨基酸，具有19个氨基酸的信号肽序列；荧光定量PCR结果显示，该基因在血液、肝脏、外套膜、鳃和闭壳肌等组织中表达差异明显，其中血液中表达水平最高，在闭壳肌中表达水平较低，其他组织表达量极少；在鳗弧菌刺激后3 h和48 h青蛤血液中SPI的表达量出现明显上调的趋势且与对照组有极显著性差异（P〈0.01）,说明SPI基因在青蛤的免疫反应中具有重要的作用。; 张皞赵婷任毅鹏潘宝平; 关键词：青蛤鳗弧菌丝氨酸蛋白酶抑制剂 KAZAL 实时定量PCR

鳗弧菌(Vibrio anguillarum)侵染对青蛤(Cyclina sinensis)髓样分化因子88基因表达的影响被引量：3: 2015年; 经转录组测序后筛选并克隆得到青蛤(Cyclina sinensis)髓样分化因子88(myeloid differenttiation factor 88,My D88)的c DNA序列。在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)胁迫下,采用荧光定量PCR法分析了My D88基因在青蛤体内的表达过程。结果显示,青蛤My D88基因的开放阅读框为1521bp,编码506个氨基酸,分子量约为57.14k Da,氨基酸N段存在DEATH结构域,C段存在TIR结构域(Toll/Interleukin-1 receptor domain)。My D88基因在青蛤血淋巴、肝脏、外套膜、鳃和闭壳肌等组织中普遍表达,但在血淋巴中表达量最高,与其它组织出现显著性差异(P<0.05)。通过检测鳗弧菌刺激下My D88基因在青蛤血淋巴中的表达值,发现My D88基因在24h开始升高,48h达到最大值,约为对照组的10倍,实验组与对照组及空白组均出现了极显著性差异(P<0.01);研究结果表明,该基因在软体动物的免疫应答反应中对革兰氏阴性菌有识别作用。; 高晶任毅鹏潘宝平闫春财; 关键词：青蛤鳗弧菌 MYD88 荧光定量PCR

青蛤(Cyclina sinensis)TLR2基因的克隆与表达分析被引量：7: 2014年; 利用转录组文库分析得到青蛤(Cyclina sinensis)的Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)基因序列,采用荧光定量PCR法分析该基因的表达过程。结果显示,青蛤TLR2基因的cDNA开放阅读框为2082bp,编码693个氨基酸,具典型的LRRs、单次跨膜区和TIR结构域。该基因在血淋巴中的表达量最高,与肝脏、鳃、外套膜、闭壳肌和性腺有显著性差异(P<0.05)。在鳗弧菌和Poly I:C刺激下,青蛤血淋巴中TLR2基因3h开始升高,48h达到最大值,与对照组和空白组有极显著性差异(P<0.01);藤黄微球菌刺激下,血淋巴中CsTLR2基因3h开始升高,48h亦达到最大值,实验组与对照组有显著性差异(P<0.05)。; 任毅鹏高晶潘宝平高虹闫春财; 关键词：青蛤 TOLL样受体2 荧光定量PCR

天津海底淤泥微生物DNA的提取方法研究被引量：2: 2012年; [目的]探索一种快速、高效提取海底淤泥中微生物DNA的最佳方法,为开展海底淤泥微生物的分子生物学研究奠定基础。[方法]分析了不同DNA提取液浓度和不同的腐植酸去除方法对淤泥中微生物DNA提取的产率、纯度的影响,探讨天津市海底淤泥中微生物DNA提取的最佳方法。[结果]海底淤泥用焦磷酸钠和氢氧化钠混合浸提剂提取腐植酸后,再用蒸馏水洗去浸提液,用4 ml DNA提取液提取,所得DNA的产率及纯度均优于对照组。[结论]该试验结果为海底淤泥微生物的分子生物学研究奠定了基础。; 张国刚任毅鹏马成仓多立安满良; 关键词：腐植酸 DNA提取 PCR扩增

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任毅鹏