乔彩霞
- 作品数：58 被引量：154H指数：8
- 供职机构：北京出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目质检公益性行业科研专项项目国家科技基础性工作专项更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 进境蓝舌病抗体阳性动物带毒分析及检疫处理研究被引量：2
- 2017年
- 为评估进口蓝舌病病毒(BTV)抗体阳性动物的感染状态,分析其带毒风险,对从国外进口的9批19714头动物,无菌采集全血分离血清,采用竞争ELISA方法检测BTV抗体。对BTV抗体检测阳性的动物,采集抗凝血,采用OIE推荐的套式RT-PCR和荧光RT-PCR方法进行检测,同时将样品送往蓝舌病参考实验室进行病毒分离鉴定,以确定动物的蓝舌病感染状态。结果 9批动物中检出28头BTV抗体阳性动物,但核酸检测和病毒分离鉴定的结果均表明这些BTV抗体阳性动物并不携带有非感染性和感染性病毒粒子。结合9个批次的进口动物并无明显临床表现,且进口动物来源地也无蓝舌病(BT)的疫情发生,据此根据OIE《陆生动物卫生法典》条款,判定这些抗体阳性动物为带毒阴性。本研究通过对BTV抗体阳性动物的带毒分析,并结合OIE确定BTV感染的要求,对BTV口岸隔离检疫流程提出建议,以指导动物检疫工作,阻止病原经口岸传入。
- 乔彩霞汪琳蒲静高志强刘环艾军张伟尹羿
- 关键词：蓝舌病抗体阳性检疫
- 牛肠道病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：9
- 2012年
- 为建立快速、准确地检测牛肠道病毒(BEV)及对北京周边地区牛群中BEV感染情况进行检测,本研究通过设计合成扩增BEV 5'UTR序列的引物及探针建立了检测BEV的通用型TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测方法并对反应条件进行了优化。该方法对BEV的最小检测量为0.1 TCID50/0.1 mL,敏感性比病毒分离法高10倍。而且该方法对其他牛相关病毒均无交叉反应。用3批试剂对3个稀释度的BEV培养物进行批内和批间重复性试验,其变异系数均小于1.1%,表明该方法具有良好的重复性。采用该方法对北京周边地区牛群采集的852份临床样品进行检测,并与病毒分离方法比较,两种方法检测结果完全一致。因此,本研究所建立的BEVTaqMan RT-PCR检测方法具有快速、准确、特异性强、敏感性高、重复性好的优点,为国内BEV的检测提供了有力的技术支持。本研究首次通过病毒核酸检测证明了我国部分地区的牛群中存在BEV感染。
- 吴丹吴涛张鹤晓高志强蒲静张伟乔彩霞谷强夏春
- 关键词：TAQMANRT-PCR病毒核酸检测
- 新城疫病毒核酸检测标准物质研究被引量：9
- 2012年
- 分别设计了3对引物,从灭活新城疫病毒F48E9株和Lasota疫苗株病毒提取的RNA中扩增了完整的M、FA和HN基因编码序列,并克隆于pGEM-T。经测序确认后,采用体外转录方法制备了6种RNA纯品。初步定量后,用RNA保存液稀释至含量约108拷贝数/mL,分装。分装后均一性检测结果显示瓶间差异<5%,稳定性实验表明室温20～25℃(相对湿度20%～50%)14天稳定;长期监测结果表明:2～8℃6个月及-20℃保存1年的含量均无明显变化。委托多家实验室采用外标实时荧光定量RT-PCR检测方法对制备的标准物质进行准确定值。以上结果表明该制备物可以作为新城疫病毒的核酸检测标准物质。
- 谷强张伟高志强张鹤晓刘环蒲静乔彩霞张利峰
- 关键词：新城疫病毒核酸扩增标准物质
- 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒核酸检测标准物质的制备研究被引量：8
- 2012年
- 针对目前口蹄疫病毒核酸扩增检测缺乏标准物质的现状,以口蹄疫病毒亚洲Ⅰ型核酸为模板,分别设计引物扩增具有检测意义的5′端1nt～2208nt的片段(含完整的5′NCR)和3012nt～5155nt片段(含完整1D～2B区域),并克隆于pMD20-T。测序后采用体外转录方法制备2种RNA纯品,进行初步定量稀释后等量混合分装。采用荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验后,委托外部实验室对RNA片段进行拷贝数定值。结果显示,制备的标准品均匀性和稳定性良好。
- 吴亚琼高志强吴延功张鹤晓乔彩霞张利峰单虎尹燕博朱淑芬王慧珊
- 关键词：口蹄疫病毒核酸扩增标准物质
- 检测用抗体标准样品的研究现状和展望被引量：1
- 2018年
- 血清学检测方法是利用抗原抗体在体外的免疫反应,实现疫病感染检测和免疫效果评估,已在人类和动物疫病的监测和诊断中得到了普遍使用。常规的血清学方法主要包括有琼脂免疫扩散试验、血凝抑制试验、补体结合试验、病毒中和试验和酶联免疫吸附试验等。
- 乔彩霞王强刘艳华高志强周建边勇刘巍
- 关键词：血清学检测抗原抗体琼脂免疫扩散试验酶联免疫吸附试验血凝抑制试验补体结合试验
- 禽流感病毒通用和H5亚型特异性核酸检测用标准物质的研制
- 利用基因克隆和体外转录技术,将禽流感病毒M基因和H5亚型HA基因分别转录合成cRNA,经初步定值,稀释分装后作为禽流感病毒通用和H5亚型特异性核酸标准物质候选物。采用荧光定量RT-PCR方法对标准物质候选物进行检测,确定...
- 乔彩霞马贵平张鹤晓高志强蒲静
- 关键词：禽流感病毒核酸荧光定量RT-PCR标准物质
- 文献传递
- 阪崎肠杆菌单克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立被引量：8
- 2013年
- 试验旨在制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体,初步建立其ELISA检测方法。以灭活的阪崎肠杆菌全菌体为抗原免疫BALB/c小鼠,筛选血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,制备杂交瘤细胞,并用间接ELISA法选取阳性杂交瘤细胞,扩大培养后测定单克隆抗体的效价,进行特异性及抗体间的配对,使用mAb亚类检测试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型,并利用得到的抗体建立双抗体夹心ELISA检测方法。本试验得到3株具有良好特异性能稳定分泌单克隆抗体的阳性细胞株5C10、2B6和Ab02,经两两配对,据阳性D450nm值及P/N值选择1∶20000稀释的5C10作为包被抗体,1∶40000稀释的Ab02作为酶标二抗,建立ELISA检测法,应用建立的方法与荧光定量PCR方法检测动物实验室保存的20份进出口送检奶粉样品,结果显示试验结果一致。本试验成功制备阪崎肠杆菌的单克隆抗体并建立其ELISA检测法,为大批量快速检测阪崎杆菌奠定了基础。
- 汪琳李勐伟刑佑尚柏亚铎尹羿蒲静乔彩霞高志强魏学良李朝明李琴
- 关键词：阪崎肠杆菌单克隆抗体杂交瘤细胞ELISA检测
- 禽流感病毒通用和H5亚型特异性核酸检测用标准物质的研制
- 基因克隆和体外转录技术，将禽流感病毒M基因和H5亚型HA基因分别转录合成cRNA，经初步定值，稀释分装后作为禽流感病毒通用和H5亚型特异性核酸标准物质候选物。采用荧光定量RT-PCR方法对标准物质候选物进行检测，确定其均...
- 乔彩霞马贵平张鹤晓高志强蒲静
- 文献传递
- 流感病毒H1/H3亚型通用双重短探针实时RT-PCR检测技术与标准质控品研究
- 2012年
- 采用TaqMan方法,在对人、禽、猪以及马流感病毒代表株HA序列多重比对基础上,设计合成动物流感病毒H1亚型和H3亚型的兼并引物和LNA和MGB修饰短探针,经反应条件优化,建立了针对流感病毒H1亚型及H3亚型的双重实时RT-PCR检测方法。应用建立的方法分别对人、禽、猪以及马流感病毒核酸进行检测,结果显示,建立的方法通用性良好,可有效检测和鉴别H1和H3亚型流感病毒,但对其他亚型的流感病毒以及新城疫病毒核酸检测结果为阴性,表明建立的方法特异性强。进一步经体外转录制备了猪流感病毒H1和H3亚型HA完成编码区的核酸标准品cRNA,经稀释、分装、定量、均匀性和稳定性检验后,作为方法的质控品对建立的方法进行评价,结果表明,所建立的双重短探针实时RT-PCR方法灵敏度可达2.0×102拷贝/反应。在对586份临床样品的检测中,进一步证实了该方法快速、灵敏且重复性好,可满足动物流感病毒H1/H3亚型的早期快速检测的需求。
- 高志强张鹤晓乔彩霞蒲静张利峰张伟谷强
- 关键词：实时RT-PCR
- 内含猪繁殖与呼吸综合征病毒保守基因序列假病毒粒子的构建及应用被引量：6
- 2016年
- 为构建内含猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守基因序列的假病毒粒子,将MS2噬菌体基因组中5′非编码区、成熟酶蛋白基因、衣壳蛋白基因、包装位点和复制酶基因部分起始位点的cDNA序列克隆于原核表达载体pET32a,在其下游插入PRRSV ORF7和3′非编码区保守序列,获得重组表达载体pET-MS2-PRRSV。将重组质粒pET-MS2-PRRSV转化表达菌株BL21(DE3),经诱导表达、纯化,获得高纯度的病毒样颗粒。病毒样颗粒经RT-PCR和PCR鉴定含有PRRSV ORF7和3′非编码区RNA且没有质粒DNA残留,并能耐受RNase降解。采用荧光定量RT-PCR对病毒样颗粒定值后,制备了用于PRRSV核酸检测的标准品,该标准品模拟了真实病毒粒子的结构,无生物传染性,经检测均匀性和稳定性良好,可作为PRRSV核酸检测的阳性标准质控品,实现对核酸检测的全程监控。
- 乔彩霞张鹤晓高志强尹羿蒲静汪琳刘环张伟
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7病毒样颗粒
