张鹤晓
- 作品数：101 被引量：462H指数：10
- 供职机构：北京出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：质检公益性行业科研专项项目国家质检总局科技计划项目国家科技基础性工作专项更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳法在禽流感病诊断中的应用被引量：11
- 1998年
- 用鸭源Ａ型流感病毒Ａ／Ｄｕｃｋ／Ｎａｎｊｉｎｇ／９Ｓ（Ｈ９Ｎ？），人工感染１８只２５日龄ＳＰＦ鸡，发病率为１００％，病死率为７２％。然后建立了尿素～聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分别应用鸭源ＡＩＶ及其攻毒发病鸡脏器匀浆上清作为诊断材料，分析了３株鸭源ＡＩＶ及其对应攻毒鸡源流感病毒。结果显示出特征性的Ａ型流感病毒核酸图谱，而且各株病毒核酸条带的迁移率基本一致。所以，在关于禽流感的口岸检疫工作中，尿素－聚丙烯酰胺凝胶电泳法，因其特有的敏感、准确性，完全可以作为现行琼脂扩散方法的补充或辅助诊断手段。
- 赵增连林祥梅崔向东王彩兰马贵平张鹤晓张鹤晓唐艉英陈溥言
- 关键词：禽流感PAGE检疫流行性感冒
- 动物RNA病毒检测关键试剂—反转录酶(M-MLV RTase)的制备
- 2016年
- 反转录酶是动物RNA病毒分子诊断用到的关键试剂之一。为获得纯度高、活性高、制备简单经济的M-MLV RTase,本试验将M-MLV RTase的基因序列进行密码子优化,合成并构建表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta宿主菌种,经IPTG诱导后实现M-MLV RTase的可溶性表达。利用Ni2+柱亲和层析纯化载有6x His标记的重组MMLV RTase,对重组酶进行Western Blotting试验,鉴定为M-MLV RTase。通过对动物流感病毒RNA的普通RT-PCR和荧光RT-PCR检测来评价重组酶的活性并估测其活性单位。将活性单位相当的重组酶和商品酶进行比较,结果显示,制备的重组酶活性高,对不同浓度病毒RNA的检测结果与商品酶相当。研制的M-MLV RTase可以用于动物RNA病毒的分子诊断。
- 牛建蕊高志强蒲静张伟刘环刘文晓张鹤晓
- 关键词：纯化RT-PCR
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因A、D抗原共表达的复制缺陷型重组腺病毒构建及鉴定
- 本研究通过RT-PCR技术和重叠PCR技术扩增出含有猪传染性胃肠炎病毒S基因的A抗原表位和D抗原表位，构建复制缺陷型腺病毒穿梭质粒。穿梭质粒与腺病毒骨架质粒经PacI线性化之后，共同转染AD-293细胞，获得共表达A、D...
- 刘文晓高志强蒲静张伟刘环牛建蕊张鹤晓
- 关键词：猪传染性胃肠炎复制缺陷型腺病毒疫苗
- 2009大流行H1N1流感病毒与经典H1N1猪流感病毒核酸扩增检测标准物质研究
- 根据已发表的A/California/04/2009(H1N1)基因序列,通过基因合成获得该毒株的完整M、HA和NA的基因序列,并克隆于pET32a.从经典猪流感病毒A/swine/2003(H1N1)提取的RNA中扩增...
- 高志强张鹤晓乔彩霞蒲静张利峰刘环汪琳谷强张伟
- 关键词：计量学H1N1流感病毒核酸扩增标准物质
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光RT-PCR检测方法的建立
- 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的保守基因序列设计合成引物和TaqMan荧光探针,并对其进行了优化筛选;对荧光RT-PCR的反应条件进行优化,建立了PRRSV荧光RT-PCR检测方法。将PRRSV细胞培养物系列稀...
- 蒲静谷强段向英高志强赖平安张鹤晓柏亚铎汪琳吴丹乔彩霞张伟
- 关键词：PRRSV繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR检测
- 文献传递
- 基于VP1重组蛋白的口蹄疫病毒O型间接ELISA检测技术被引量：2
- 2012年
- 采用RT-PCR方法扩增O型口蹄疫病毒VP1基因片段,将其克隆于pET-32a。将重组质粒转化宿主菌Rosetta,经1.0mmol/L IPTG诱导,外源基因获高效表达。通过Western-blot以及ELISA试验证明,重组VP1蛋白与标准阳性血清发生反应。以纯化的VP1蛋白作为检测抗原包被酶标板建立了检测口蹄疫病毒O型抗体的间接ELISA方法。对355份临床血清样品的检测结果显示,建立的方法与口蹄疫病毒O型液相阻断试剂盒符合率为98.87%。表明建立的方法能够用于口蹄疫病毒O型抗体的快速分型检测。
- 于军超张乐萃高志强张鹤晓马贵平蒲静张利峰吴亚琼王慧珊朱淑芬张伟谷强
- 关键词：VP1基因间接ELISA
- 口蹄疫病毒亚洲1型TaqMan实时定量RT-PCR快速定型检测方法研究
- 采用TaqMan方法,根据口蹄疫病毒亚洲Ⅰ型VP1的基因编码区基因(ID)序列,设计合成多对引物和多条探针,通过对引物、探针的筛选,反应条件的选择和优化,建立了口蹄疫病毒亚洲Ⅰ型荧光RT-PCR检测技术,试验体系采用一对...
- 高志强张鹤晓赖平安谷强张利峰乔彩霞蒲静张向东
- 关键词：口蹄疫病毒TAQMAN实时定量RT-PCR
- 文献传递
- 六种重要动物外来病早期快速检测试剂盒研发
- 花群义徐自忠周晓黎董俊杨建明杨云庆秦智锋吕建强詹爱军张鹤晓张常印唐泰山乔彩霞姜焱
- 该课题主要研究了六种重要动物外来病的快速检测方法，在无可获得病原体的情况下，采用病毒基因人工合成、基因克隆、蛋白质表达、纯化、ELISA检测方法研究、胶体金标记检测试纸条研制、RT－PCR、多重RT－PCR、实时荧光定量...
- 关键词：
- 关键词：动物诊断试剂盒实时荧光定量PCR
- 直接涂片镜检法和沉淀法检验出口猕猴溶组织阿米巴的比较被引量：1
- 1995年
- 在对出口到法国的62只猕猴进行的溶组织阿米巴的检验中，对直接涂片镜检法和沉淀法进行了比较。直接法检溶组织阿米巴包囊的检出率为6．45％，沉淀法的检出率为30．65％，t检验结果表明，沉淀法与直接法的检出率差异极显著（P＜0．001），沉淀法的检出率显著高于直接法。
- 于文军李楠张鹤晓熊盛荣李凤良
- 关键词：猕猴镜检法沉淀法检疫
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因A、D抗原共表达的复制缺陷型重组腺病毒构建及鉴定被引量：2
- 2016年
- 通过RT-PCR技术和重叠PCR技术扩增出含有猪传染性胃肠炎病毒S基因的A抗原表位和D抗原表位,构建复制缺陷型腺病毒穿梭质粒。穿梭质粒与腺病毒骨架质粒经PacI线性化之后,共同转染AD-293细胞,获得共表达A、D抗原表位的复制缺陷型重组腺病毒。经Western Blotting检测,该重组腺病毒能够正确表达目的蛋白基因,而且目的蛋白能够与猪传染性胃肠炎阳性血清反应。本研究结果为猪传染性胃肠炎重组疫苗研发奠定基础。
- 刘文晓高志强蒲静张伟刘环牛建蕊张鹤晓
- 关键词：猪传染性胃肠炎复制缺陷型腺病毒疫苗
