高尚先
- 作品数：108 被引量：167H指数：6
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学社会学农业科学更多>>
- 贝氏柯克斯体抑制宿主单核细胞的碳源代谢
- 2010年
- 贝氏柯克斯体是一种专性细胞内寄生的革兰阴性小球杆菌，为Q热的病原体。本文通过比较贝氏柯克斯体感染单核细胞和非感染单核细胞的蛋白表达谱，研究该病原体感染引发宿主细胞表达差异的蛋白。用贝氏柯克斯体I相毒株感染人单核细胞（THP一1），采用等电聚焦和SDS-PAGE双向电泳对感染单核细胞和非感染单核细胞进行比较蛋白质组学研究，用电泳图谱分析软件发现它们之间的差异表达蛋白，用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪鉴定差异表达蛋白。结果发现，电泳图谱分析发现137个差异蛋白，质谱分析鉴定到15种差异蛋白与细胞生理代谢有关。这些蛋白的表达变化说明贝氏柯克斯体感染单核细胞使宿主细胞碳源代谢受到抑制，由此可能影响单核细胞正常杀菌功能，而有利于贝氏柯克斯体在细胞内的生存。
- 李丽莉朱力温博海高尚先王恒樑陈梅玲
- 关键词：贝氏柯克斯体单核细胞蛋白质组
- 总甲状腺素定量标记免疫分析试剂盒行业标准的制定
- 目的对总甲状腺素(TT4)定量标记免疫分析试剂盒行业标准的制定及实验室验证进行讨论。方法选择具有代表性的5家国内外厂家试剂盒对总甲状腺素定量标记免疫分析试剂盒行业标准中规定的8个条款进行实验验证,并通过详细分析论证了行业...
- 张春涛黄颖沈舒刘艳石大伟高尚先
- 关键词：总甲状腺素体外诊断试剂医疗器械
- 人丙氨酸转氨酶高效重组表达体系的构建
- 2014年
- 目的：构建人丙氨酸转氨酶（ ALT）高效重组表达体系，为ALT相关参考物质的原料制备奠定基础。方法利用生物信息学方法优化编码人ALT核苷酸序列中的密码子，合成人ALT新的基因，并将其克隆至pRSF-Duet表达载体中。重组表达质粒pRSF-Duet-ALT转化大肠埃希菌BL21，以2 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导目的蛋白的表达，并通过改变诱导剂浓度、振摇速度及诱导温度优化表达条件，以产生可溶性蛋白。可溶性蛋白经镍离子柱亲和层析及分子筛层析纯化，以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS-PAGE）及蛋白质免疫印迹（ Western blot）鉴定蛋白的性质，并对重组蛋白的活性、不同储存条件下在血清基质中的稳定性进行检测。结果经过优化的ALT核苷酸密码子在大肠埃希菌中的使用频率均在10％以上；经表达优化，在IPTG 终浓度为2 mmol/L、25℃、150 rpm振摇8 h诱导条件下，可增加可溶性蛋白的产率；纯化后的目的蛋白经电泳及免疫印迹鉴定为谷丙转氨酶，活性可达80000 U/L。重组ALT在2～8℃、25℃均可稳定2～8 d，相对偏差均在5％以内。结论通过密码子优化，成功构建了重组ALT的高效表达系统，本重组蛋白可以达到作为参考物质原料的要求。
- 王玉梅徐超刘艳高尚先杨昭鹏
- 关键词：丙氨酸转氨酶重组蛋白质类密码子
- 短棒状杆菌或其组合物在制备治疗乙型肝炎药剂中的应用
- 本发明涉及一种短棒状杆菌制剂(CPP)或无细胞短棒状杆菌制剂(NCPP)在制药领域中的应用，尤其涉及在制备治疗乙型病毒性肝炎感染药剂中的应用，以及CPP或NCPP联合乙肝免疫球蛋白(HBIG)或抗乙型肝炎免疫球蛋白(人源...
- 高尚先李守悌
- 文献传递
- 表皮生长因子受体基因突变检测方法及质量评价
- 2013年
- 表皮生长因子受体(EGFR)属于酪氨酸激酶受体,它介导的信号转导途径调节细胞的生长、增殖和分化。EGFR基因突变的检测能为肿瘤靶向治疗提供依据。EGFR突变有多种检测方法,如何评价这些方法,规范产品,提升产品质量,保障临床检测质量,更好地为临床服务,是检测机构对试剂质量检测和考核的目标。本文就EGFR基因突变检测方法以及质量评价要点进行简要阐述。
- 黄杰高尚先
- 关键词：基因突变
- 总IgE定量标记免疫分析试剂盒行业标准的验证
- 2014年
- 目的对总IgE定量标记免疫分析试剂盒行业标准可行性进行验证。方法按照拟定行业标准的要求,选择不同免疫分析方法的试剂盒,进行验证。结果外观、空白限、线性、准确度、精密度、稳定性等指标符合要求,特异性项目中有个别试剂盒对IgM、IgG的测定结果高于行业标准要求。结论总IgE定量标记免疫分析试剂盒行业标准制定合理,有助于规范此类试剂盒的技术要求和实验方法,从而提高此类试剂盒的产品质量,并为其监管提供依据。
- 孙楠于婷刘艳王玉梅高尚先
- 关键词：总免疫球蛋白E
- 大鼠抗——HB_s的单克隆抗独特型抗体杂交瘤细胞系的建立被引量：4
- 1993年
- 用纯化的小鼠单克隆抗—HBs和纯化的大鼠多克隆抗—HBs免疫LOU/C大鼠,取免疫大鼠脾细胞与IR983F骨髓瘤细胞融合,获得两株(TD_1、TD_2)持续分泌抗—HBs的单克隆抗独特型抗体(抗—Id,Ab_2)杂交瘤细胞系。对TD_2进行了较全面的鉴定,TD_2的Ig类型为IgG,亚类为IgG_(2?),核型分析结果染色体数为65条。通过ELISA竞争抑制和中和抑制试验表明,TD_2所分泌的Ab_2既能被不同来源的抗—HBs所中和。又能被HBsAg.所竞争,且都呈现剂量依赖关系。将纯化的TD_2IgG免疫同系大鼠,诱导出了具有抗—HBs活性的抗—抗—独特型抗体(Ab_3)。上述结果证实,TD_2所分泌的单克隆抗体(McAb)是带有HBsAg表位内影像,具有HBsAg免疫源性的抗—HBs的单克隆抗—Id。
- 高尚先王玉琴李修兰罗玉芳李秀华高光袁曾麟李德富
- 关键词：单克隆抗体乙型肝炎疫苗
- 一种无细胞短棒状杆菌制剂
- 本发明公开了一种无细胞短棒状杆菌制剂(NCP)，是由短棒状杆菌(CP)制备的无细胞制剂，热原小于160EU/ml，蛋白质含量10－40％(g/g)，核酸含量3－25％(g/g)，其余为多糖，粒度小于100nm。本发明的N...
- 高尚先李守悌
- 文献传递
- 人巨细胞病毒IgG抗体质控盘的建立被引量：4
- 2012年
- 目的建立人巨细胞病毒IgG抗体质控盘,为以酶联免疫法和化学发光法为原理的人巨细胞病毒IgG抗体诊断试剂盒的性能评价提供可靠的质控物质。方法通过试剂盒筛选出人巨细胞病毒IgG抗体的阳性和阴性血清,将10份不同来源的阳性血清作为质控盘的P1~P10,5份不同来源的阴性血清作为质控盘的N1~N5,5份阳性血清混合制成质控盘的L1~L3。之后,用不同的试剂盒验证建立的质控盘。结果六家公司的试剂盒对本质控盘进行的准确性、特异性和检测限的验证结果均符合要求。对本质控盘的稳定性研究结果表明,质控盘的稳定性良好。成功建立了人巨细胞病毒IgG抗体质控盘。结论本研究建立的质控盘可用于以酶联免疫法和化学发光法等原理的人巨细胞病毒IgG抗体诊断试剂盒的性能评价。
- 徐超黄杰曲守方孙楠高尚先
- 关键词：人巨细胞病毒IGG抗体
- 一种人类K-ras基因突变检测试剂盒的质量标准研究被引量：2
- 2012年
- 目的评价和分析一种新的人类K-ras基因突变检测试剂盒质量,确定该类试剂质量标准和评价方法。方法利用实时荧光定量PCR方法,检测7种K-ras基因单一突变点质控品的准确性、特异性、最低检测量和重复性。分别检测7例肠癌患者K-ras基因突变阳性组织样本和10例阴性样本的准确性和特异性。结果试剂盒准确性、特异性、最低检出量和重复性均符合质量标准。能准确和特异的检出单一点突变,具有较好的灵敏度和重复性。结论该试剂盒质量标准设定较合理,在指导K-ras基因突变检测方面具有较好的应用前景。
- 刘艳黄杰张春涛阮力陈琰高尚先
- 关键词：K-RAS突变试剂盒
