马凤琴
- 作品数：18 被引量：119H指数：7
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鼠疫F1抗原胶体金检测试剂的应用评价被引量：1
- 2008年
- 目的探讨鼠疫F1抗原胶体金检测试剂（简称金标试剂）的应用价值。方法制备金标试剂，实验室检测其灵敏度、特异性和稳定性，并在全国17个鼠疫监测点检测动物脏器标本1798份。以细菌培养和反向血凝法作为平行对照，比较金标试剂的符合率和阳性率。结果金标试剂灵敏度为0．0010异／L F1抗原，室温和4℃放置12个月检测效果稳定，检测假结核和小肠结肠炎菌悬液均呈阴性反应。现场检测标本，金标试剂与反向血凝法比较，符合率为97．11％（1746／1798），与细菌培养法比较，符合率为96．83％（1741／1798）；而金标试剂阳性率为9．23％（166／1798），高于反向血凝法[6．79％（122／1798）]和细菌培养法[6128％（113／1798）]。结论金标试剂灵敏度高、特异性强，是可以用于鼠疫现场监测和病例判定的快速诊断方法。
- 徐冬蕾魏绍振史献明张忠兵蔡虹唐永娇秦迎旭耿英芝赵斌夏连续张恩民马凤琴俞东征海荣
- 关键词：耶尔森菌鼠疫抗原胶体金
- 粗提抗原检测炭疽血清抗体ELISA方法的初步评价被引量：1
- 2008年
- 目的对使用粗提抗原检测炭疽血清抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）方法进行初步评价。方法用间接ELISA方法检测人群血清（健康人血清42份、炭疽病人血清42份）特异性抗体，用阳性血清对照绘制标准曲线．按照标准曲线计算出每份血清标本的抗体相对含量，所得结果与重组致死因子（rLF）方法的检测结果进行比较。结果病人组血清抗体相对含量中位数为1．19，健康人组血清抗体相对含量中位数为0．24，两组比较差异有统计学意义（uc=7．643，P〈0．05）。粗提抗原检测与rLF检测结果并不完全对应，但两种方法显示出较高的一致性。结论粗提抗原检测炭疽血清抗体的方法能区分大部分的病人和健康人，有一定的应用潜力．可用在炭疽疾病监测工作中。
- 魏建春张慧娟马凤琴张恩民俞东征
- 关键词：芽孢杆菌炭疽酶联免疫吸附测定抗体
- 鼠疫耶尔森菌基因组中IS100插入位点的特异性分析
- 2008年
- 目的通过鼠疫耶尔森菌基因组中插入序列IS100位点的特异性研究，对我国鼠疫菌基因组的构成类型和特点进行分析。方法以鼠疫菌东方变种C092全长序列为参考，选择5个位置的IS100位点，在IS100基因相邻两外侧设计1对引物，在IS100基因内设计1对向外引物使其分别能够与两外侧引物扩增。对来自13个生态型的91株鼠疫菌和1株假结核耶尔森菌进行PCR扩增，产物进行克隆测序分析，同时把各菌株的IS100位点情况标记在我国鼠疫疫源地类型概图上进行分析。结果实验所用91株鼠疫菌在所选定IS100位点出现含有和不含IS100的插入序列，基因片段组成相对C092序列已发生改变，而且这些IS100基因型的组成在我国鼠疫自然疫源地中呈现区域性分布。结论IS100基因型别分布与我国鼠疫菌疫源地分型分布基本一致．并直接反映了鼠疫菌基因组某特定位点的基因组成状况及其在进化过程中的高度流动性。
- 李丽娜俞东征海荣魏建春付秀萍张恩民张志凯马凤琴蔡虹张建华徐冬蕾
- 关键词：基因组
- 4种病原菌特异基因片段阳性蜱的16SrRNA基因克隆文库分析
- 2009年
- 目的建立16SrRNA基因克隆文库分析蜱媒菌群的方法，观察该方法对蜱寄生病原菌的检测效率以及对细菌群落多样性分析和对病原菌的筛检能力。方法用伯氏疏螺旋体、汉赛巴通体、嗜吞噬细胞无形体和查菲埃立克体4种病原菌特异基因设计引物，扩增蜱标本提取的核酸，以上述4种病原菌特异基因片段扩增均阳性的蜱核酸提取物做模板，用16SrRNA基因的通用引物进行PCR扩增、纯化、连接、克隆和测序，建立16SrRNA基因克隆文库，将测序结果与数据库进行比对，计算克隆文库Coverage值和Shannon—Wiener多样性指数。结果测出103个有效序列，检出16种已知种属的细菌，其中8个是优势类型（克隆子数〉5个）；检测到伯氏疏螺旋体、汉赛巴通体和立克次体3种病原菌，但这3种病原菌均不是优势类型（克隆子数均〈5个）。Coverage值为96．11％，Shannon—Wiener多样性指数为2．40。克隆序列分析结果表明，蜱寄生细菌主要为仅、1变形菌纲，占56．25％（9／16）。结论16SrRNA基因序列分析可以对蜱标本进行菌群相对定量研究，可以同时检出多种病原菌．是一种较好的细菌菌群多样性分析和病原菌筛检方法。
- 张守印孙继民贺金荣付秀萍张景山张建华蔡虹马凤琴海荣俞东征
- 关键词：RRNA基因多样性
- 等位基因特异性PCR方法检测炭疽芽胞杆菌致死因子基因点突变的评价被引量：4
- 2007年
- 目的建立并评价等位基因特异性聚合酶链反应(PCR)在筛选炭疽芽胞杆菌致死基因点突变中的作用。方法等位基因特异性PCR方法。结果等位基因特异性PCR扩增的筛选方法假阳性率较高,其特异性与引物3′端的碱基类型关系不大,与退火温度、模板浓度等均有关系。高保真Taq DNA聚合酶不能改善这种假阳性。结论等位基因特异性PCR筛选方法影响因素较多,假阳性率高,不适于直接作为点突变的筛选方法。
- 魏建春张建中张恩民马凤琴张建华
- 关键词：等位基因特异性聚合酶链反应点突变炭疽芽胞杆菌
- 应用Taq Man荧光PCR定性定量检测炭疽芽孢杆菌被引量：19
- 2005年
- 目的 发展一种快速、敏感、特异的检测炭疽芽孢杆菌的方法。方法 应用基于TaqMan荧光探针的实时(real time)PCR技术,针对致病炭疽毒株的两个质粒pXO1、pXO2上的pagA ,cap基因和染色体上的ropB基因设计引物和探针定性、定量检测炭疽芽孢杆菌。构造并应用上述探针的外标对照及pagA的内标对照,采用多重荧光定量PCR技术建立荧光定量方法并发现假阴性;采用UDG抗污染和ROX矫正背景噪音,提高检验能力;用该方法检测炭疽芽孢杆菌疫苗株感染的动物脾脏标本,盲法评价该方法在实际工作的应用。结论 该方法能特异、灵敏、高效地检测炭疽芽孢杆菌,该方法的推广和应用对有效防范炭疽生物恐怖袭击、提高突发事件应对能力、快速诊断具有重要意义。
- 李伟俞东征海荣魏建春马凤琴
- 关键词：炭疽芽孢杆菌荧光定量PCRTAQMAN
- 炭疽芽胞杆菌基因组中串联重复序列拷贝数的分析
- 2006年
- 目的研究炭疽芽胞杆菌基因组中多位点串联重复序列遗传标记的遗传变异规律。方法根据文献上发表的串联重复序列位点,利用已发表的13对引物,对88株炭疽芽胞杆菌基因组DNA进行PCR扩增,扩增产物进行琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳,利用凝胶影像分析软件对PCR产物DNA片段的碱基含量进行测算,计算出串联重复拷贝数。对部分PCR扩增产物DNA片段进行测序,利用DNAStar软件进行序列比对,分析不同菌株间的串联重复序列遗传变异规律。结果(1)炭疽芽胞杆菌基因组中的串联重复序列位置,同一菌株具有相对稳定的串联重复拷贝数。(2)88株炭疽芽胞杆菌DNA上的13个串联重复序列遗传标记中,有的串联重复序列拷贝数变异较小,有的却存在着复杂的多态性;(3)有些串联重复序列单位内的核苷酸数目不变,但核苷酸的排列组合有差异,不过其重复单位内都包含着一个相同的稳定不变的核心核苷酸序列。结论炭疽芽胞杆菌基因组DNA中串联重复序列可以精确定位,测定结果可以数值化,并且串联重复序列在菌株DNA中具有相对的稳定性,因此,串联重复序列是研究炭疽芽胞杆菌遗传特征的较好指标,具有鉴别炭疽芽胞杆菌菌株间差别的能力。
- 田国忠俞东征海荣魏建春马凤琴蔡虹张建华郑玉红付秀萍张志凯张恩民徐冬蕾
- 关键词：炭疽芽胞杆菌串联重复序列
- 应用荧光PCR检测土壤、脏器中的炭疽芽孢杆菌被引量：9
- 2006年
- 目的用荧光定量PCR方法检测土壤、动物脏器和血液中炭疽芽孢杆菌,评价并优选目标核酸纯化方法。方法采用TaqMan荧光定量PCR技术,以炭疽芽孢杆菌pagA、rpoB2引物探针和相应外标、内标为手段,比较4种从土壤中检测炭疽菌及3种从感染脏器及血液中检测炭疽菌的方法,探讨环境和组织样品中抑制因素对荧光定量PCR检测的影响,优选并确定纯化检验手段。结果应用NaI裂解glassmilk纯化炭疽菌核酸并用荧光定量PCR检验,检出底限为2·5万拷贝/g土壤(pagA),从血液样本的检出限为1000拷贝/ml。结论荧光定量PCR技术和NaI裂解glassmilk纯化制备模板的联合应用可灵敏、特异地从土壤、血液中检测炭疽芽孢杆菌。
- 李伟俞东征海荣马凤琴张建华
- 关键词：炭疽芽孢杆菌荧光定量PCR土壤动物脏器
- 基因和抗原检测技术在鼠疫监测中的应用与评价被引量：6
- 2007年
- 目的 对鼠疫特异性基因和抗原检测新技术进行鼠疫监测现场的应用及评价。方法检测来自鼠疫自然疫源地的各类标本中鼠疫菌DNA和F1抗原,采用多重PCR、胶体金免疫技术和酶联免疫吸附试验,与鼠疫菌培养和反向间接血凝试验进行平行对照。结果 使用5种方法平行检测鼠类、蚤类标本1798份,共判定鼠疫标本132份,总阳性率为7．34%;与单纯鼠疫菌培养阳性相比（113份,阳性率为6．28%）,其中鼠疫菌培养与基因、抗原检测的总阳性率为7．34%,与单纯检菌阳性率比较检出率提高16．81%,符合率达到97．13%。结论 在鼠疫监测中增加基因与抗原联合检测,可以提高鼠疫的确诊率。
- 海荣俞东征史献明张忠兵唐永娇王鹏夏连续魏绍振徐兵秦迎旭张志凯石国祥徐冬蕾蔡虹张恩民魏建春耿英芝黄德惠赵斌汪立茂马凤琴黄富王月张涛张建华
- 关键词：鼠疫耶尔森菌基因抗原
- 鼠疫F1抗体胶体金检测试剂的研制和现场评价被引量：13
- 2007年
- 目的为建立鼠疫诊断和监测所需的快速检测F1抗体水平的方法,研制并评价金标检测试剂。方法胶体金标记和实验室检测,14个省17个监测点现场监测中检测了动物和人的血清样本4789份。结果金标检测试剂特异性强,敏感性、稳定性好,现场检测结果与间接血凝方法无差异。结论鼠疫F1抗体胶体金检测试剂可以用于鼠疫病例诊断和动物监测。
- 徐冬蕾魏邵振史献明张忠兵蔡虹唐永娇徐兵秦迎旭耿英芝赵斌黄富黄德蕙汪立茂张涛石国祥王月王鹏夏连续张恩民马凤琴张建华俞东征海荣
- 关键词：鼠疫F1抗体胶体金
