车红磊
- 作品数：14 被引量：71H指数：3
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部高等学校骨干教师资助计划陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- ndrg2基因2种亚型重组腺病毒载体的构建被引量：2
- 2009年
- 目的:构建表达N-myc下游调节基因2(ndrg2)2种亚型的重组腺病毒载体,为与ndrg2相关肿瘤的基因治疗奠定基础.方法:采用腺病毒表达系统ViraPowerTM Adenoviral Expression System构建腺病毒载体.首先将ndrg22种亚型(长短2种亚型分别命名为ndrg2L,ndrg2S)利用酶切、连接、转化、扩增后提取质粒等方法克隆入入门载体pENTR2B以获得入门克隆pENTR2B-NDRG2L和pENTR2B-NDRG2S,经双酶切及PCR鉴定正确后,用重组酶LR ClonaseTMⅡ Enzyme Mix进行入门克隆与表达载体pAd-CMV/V5-DEST间的重组反应,以获得表达克隆pAd-CMV/V5-DEST-NDRG2L和pAd-CMV/V5-DEST-NDRG2S的质粒.表达克隆经PCR鉴定后用限制性内切酶PacⅠ线性化后转染HEK293A包装细胞得到重组腺病毒(分别命名为Ad-NDRG2L和Ad-NDRG2S),经过反复的感染扩增后,用半数组织培养感染剂量法(TCID50)检测病毒滴度,用Western Blot法检测重组病毒载体是否能正确表达NDRG2蛋白.结果:证实入门克隆pENTR2B-NDRG2L/S和表达克隆pAd-CMV/V5-DEST-NDRG2L/S经酶切鉴定和PCR鉴定质粒构建正确,转染HEK293A细胞并反复扩增后获得的病毒滴度分别为:Ad-NDRG2L,4.0×1012空斑形成单位(PFU)/L;Ad-NDRG2S,6.3×1012PFU/L.且这2个病毒能正确表达NDRG2蛋白.结论:成功构建了ndrg2基因长短2种亚型的重组腺病毒载体,并包装扩增病毒,可为肿瘤基因治疗的研究提供依据.
- 秦娜邓艳春车红磊牛锋刘新平
- 关键词：NDRG2重组腺病毒基因治疗法肿瘤治疗
- JKA97诱导HepG2凋亡及其分子机制研究
- 2009年
- 目的:研究药物JKA97对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用及其分子机制。方法:采用MTT法观察药物JKA97对细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测线粒体融合蛋白mfn2表达水平变化。结果:药物JKA97抑制人肝癌细胞HepG2细胞增殖,5、10、20μmol/L作用组24h抑制率分别为34.26%、43.08%、54.02%;药物JKA97诱导人肝癌细胞HepG2凋亡,10、20μmol/LJKA97作用HepG2细胞24h,细胞凋亡率分别为22.9%、72.9%;线粒体融合蛋白mfn2表达水平显著降低。结论:药物JKA97对人肝癌细胞HepG2生长具有明显的增殖抑制作用,诱导细胞凋亡;线粒体融合蛋白mfn2表达水平降低可能是其重要的分子机制之一。
- 陈香郡张文斌陈耀明刘明朝车红磊赵芳姚婷孟姗姗马金龙王基野李丹骆文静
- 关键词：HEPG2增殖抑制凋亡MFN2
- 人DDR2基因pShuttle-CMV穿梭载体的构建及表达
- 2007年
- 目的:构建带有flag标签的人DDR2 pShuttle-CMV载体,检测其真核表达并观察DDR2分子的亚细胞分布.方法:以含有人全长DDR2cDNA的质粒为模板,用PCR方法扩增DDR2基因的C-端(DDR2-C),并在其C末端带上含24bp的flag标签,NcoI/EcoRV酶切后亚克隆入含有DDR2全长序列的pMD18-T载体,即替换掉原有DDR2序列的C-端,引入flag标签,测序正确后再克隆入pShuttle-CMV表达载体,酶切鉴定正确后采用脂质体法瞬时转染HEK293细胞,West-ern Blot检测DDR2-flag在细胞中的表达.瞬时转染Hela细胞,通过间接免疫荧光法观察DDR2分子在细胞内的分布情况.结果:测序及酶切显示DDR2-flag/pShuttle-CMV载体构建符合预期;脂质体法转染HEK293细胞,24h后用Western Blot方法检测到目的蛋白的表达;对转染了目的载体的细胞应用FITC标记的抗体进行间接免疫荧光实验,激光共聚焦显微镜观察到DDR2分子主要分布于细胞质与细胞膜.结论:成功构建并表达了C-末端带flag标签的DDR2真核表达载体,使其在真核细胞中表达,并观察到其亚细胞分布.
- 任婷婷刘新平车红磊张健张璟李霞苏金
- 关键词：DDR2聚合酶链式反应克隆免疫荧光
- 自噬参与锰诱导的PC12细胞毒性的初步研究
- 目的锰的神经毒性症状类似于帕金森病,被认为是帕金森病的重要环境危险因素。自噬-溶酶体途径能够降解细胞内错误折叠和异常损伤的蛋白以及细胞器,与泛素-蛋白酶体途径一道在维持细胞内环境稳态的过程中发挥重要的作用。近年来研究发现...
- 姚婷蔡同建陈景元张建彬季爱玲杜可军陈耀明车红磊张文斌骆文静
- 关键词：锰自噬PC12细胞
- 铅诱导PC12细胞衰老的作用及机制研究
- 目的铅中毒可导致认知功能严重损害,长期铅暴露可引起记忆力衰退和大脑老化。为研究铅对脑组织老化的影响,我们选用PCl2细胞为模型,观察铅诱导细胞衰老的作用及可能机制。方法分别以1,5,10μmol/L铅对体外培养的PC12...
- 车红磊张文斌姚婷陈香郡杨群陈景元
- 铅暴露对生长发育期大鼠肝、肾功能及血液学指标的损伤作用研究被引量：10
- 2012年
- 目的通过检测铅中毒大鼠肝、肾功能及部分血液学指标,阐明铅暴露对发育期大鼠肝、肾功能及血液学指标的损伤作用,为铅中毒的毒性效应研究以及防治提供实验依据。方法大鼠醋酸铅饮水染毒建立模型,通过模型肝、肾功能及血液学指标的改变,探讨铅暴露对大鼠肝、肾功能的损伤作用。结果染铅大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平较对照组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);血清胆碱酯酶(CHE)水平较对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),提示肝细胞损伤;染铅大鼠血清尿素氮(BUN)、胱抑素C(CYS-C)水平较对照组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),提示肾小球率过滤及肾功能损伤;铅暴露大鼠红细胞、血红蛋白、血小板数量下降显著,差异有统计学意义(P<0.05),提示贫血及凝血机制障碍。结论慢性铅暴露可以引起生长发育期大鼠的肝、肾功能损伤及贫血的发生。
- 徐焰车红磊张建彬黄萍柯涛袁亚娟郝晓柯陈景元
- 关键词：铅暴露血铅肾功能
- 心肌细胞面积与其活力缺乏相关关系
- 2004年
- 目的 :建立培养心肌细胞活力的测定与简便的面积测量方法 ,观测不同培养条件下 ,新生大鼠心肌细胞面积与活力的关系 .方法 :采用一步伊红染色法与NIHImage软件测量心肌细胞面积 .MTT比色法测量心肌细胞的A490nm 值 ,以A490nm/总细胞数之比作为衡量心肌细胞活力的指标 .结果 :心肌细胞面积随培养时间延长而增大 ,随接种密度增加而减小 ,且有血清培养组的面积明显大于无血清培养组 (P <0 .0 1 ) .心肌细胞的A490nm值与A490nm/总细胞数之比随培养时间延长均保持不变 ,当细胞接种密度为 4 .5× 1 0 4/cm2 时 ,A490nm/总细胞数之比达峰值 ,且无血清培养组的A490nm值与A490nm/总细胞数之比皆明显低于有血清组 (P <0 .0 1 ) .结论 :在培养时间与细胞接种密度不同的培养条件下 ,培养新生大鼠心肌细胞面积的改变并未对其活力产生明显影响 。
- 车红磊余志斌谢满江
- 关键词：心肌细胞细胞培养细胞活力
- 新生大鼠心肌细胞培养技巧被引量：47
- 2003年
- 王涛余志斌谢满江车红磊
- 关键词：心肌细胞细胞培养
- RNA干扰现象研究获诺贝尔奖的启示
- 2007年
- RNA干扰现象是目前生命科学领域的研究热点。由于RNA干扰具有十分重要的理论和应用价值,因此该现象在揭示后仅8年其研究者就获得了诺贝尔生理与医学奖。通过回顾RNA干扰现象的发现历程,可以为今后的科研探索过程提供许多有益的启示。
- 沈岚车红磊药立波
- 关键词：RNA干扰诺贝尔奖
- 氧化应激在锰诱导的PC12细胞tau蛋白磷酸化过程中的作用研究
- 目的机体内过量锰的毒性作用正受到人们的日益关注。神经系统是锰的主要毒作用器官,成年个体锰中毒主要表现为神经毒性,可出现明显的锥体外系受损症状,与帕金森病(Parkinson''''s disease,PD)症状类似,被认...
- 蔡同建姚婷季爱玲杜可军陈耀明张文斌车红磊骆文静陈景元
- 关键词：锰TAU磷酸化氧化应激
