王桂华
- 作品数：31 被引量：74H指数：6
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TAT-N24穿膜融合多肽的表达与鉴定被引量：8
- 2010年
- 目的表达并纯化TAT-N24穿膜融合多肽,初步探讨其生物学活性。方法构建pTAT-HA-N24原核表达载体,在BL21大肠埃希菌中表达并纯化TAT-N24融合多肽,利用SDS凝胶电泳检测纯化蛋白的纯度,利用免疫细胞化学和流式细胞术检测TAT-N24融合蛋白的穿膜能力和生物学活性。结果在原核表达系统中成功构建并表达纯化了TAT-N24穿膜融合多肽,其在6 mol/L尿素和DMSO中均具有较好的溶解性,纯化的融合多肽经SDS凝胶电泳分析未见明显杂蛋白混入,利用免疫细胞化学染色可见TAT-N24处理结肠HT29细胞12 h后90%以上的细胞中可检测到TAT-N24,流式细胞术检测细胞周期可见TAT-N24能够有效地诱导细胞周期阻滞,抑制结肠癌细胞生长。结论TAT-N24具有高效的穿膜能力,并能有效抑制结肠癌细胞增殖,可望开发成为有效的肿瘤分子治疗药物。
- 王桂华孙黎邓豫李小兰曹小年来森艳陶德定胡俊波
- 关键词：HT29细胞
- hSav1在结直肠癌组织中的表达及其意义
- 2014年
- hSavl（human Salvadorl）是Salvador在人类的同源蛋白,参与了细胞内的许多事件,近年来其在肿瘤发生发展中的作用引起研究者的关注.本研究应用Realtime-PCR、Western blot及免疫组织化学的方法检测hSavl在结直肠癌组织中的表达情况,并探讨其与结直肠癌临床病理特征之间的关系.
- 杨锐李小兰王桂华邹声泉胡俊波
- 关键词：直肠癌组织肿瘤发生发展临床病理特征同源蛋白BLOT结直肠癌
- 含ω-3鱼油脂肪乳的肠外营养对全胃切除患者术后恢复的影响被引量：8
- 2010年
- 目的探讨含ω-3鱼油脂肪乳的肠外营养(PN)支持对全胃切除术后患者营养、肝肾功能及感染性并发症发生率等的影响。方法将88例胃癌患者随机分为对照组和治疗组各44例。在术后的肠内营养支持治疗中,两组均给予普通脂肪乳,治疗组加用ω-3鱼油脂肪乳。于手术前1 d和术后第6天分别测定患者的总蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、前清蛋白(PA)、视黄醇结合蛋白(RBP)、转铁蛋白(TF)、血清总胆固醇(TC)以评价营养状况;测定胆红素(T-BiL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和血肌酐(Cr)等以评价肝肾功能;比较两组患者术后感染性并发症发生率。结果经过术后6 d的肠外营养治疗,两组之间的营养状况、肝肾功能比较差异无显著性(P>0.05)。与对照组比较,治疗组的感染性并发症发生率较低。结论使用普通脂肪乳与使用含ω-3鱼油脂肪乳作为对全胃切除术后患者的术后肠外营养支持,对其营养状况和肝肾功能的影响无明显差别,而使用含ω-3鱼油脂肪乳的患者感染性并发症的发生率有所降低。
- 童宜欣陈清贵卞毅徐丰王桂华邓豫胡俊波
- 关键词：Ω-3鱼油脂肪乳全胃切除术肝肾功能
- c-Myc通过缺氧诱导因子-1α调控结肠癌细胞HT-29的增殖被引量：1
- 2013年
- 目的研究癌基因c-Myc对人结肠癌细胞HT-29中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响及其对肿瘤细胞增殖的作用。方法构建高表达c-Myc的质粒pcDNA3.1-c-Myc;将构建好的pcDNA3.1-c-Myc质粒转染入HT-29细胞中,通过Western blot印迹法检测c-Myc在HT-29细胞中的表达情况。应用Real-time PCR和Western blot印迹法检测常氧和乏氧状态下HT-29细胞系中HIF-1α的mRNA和蛋白水平,同时检测HIF-1α下游靶基因血管内皮生长因子(VEGF)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的mRNA水平。共转染pcDNA3.1-c-Myc质粒和HIF-1α的siRNA入HT-29细胞中。应用噻唑蓝(MTT)法检测HT-29细胞的增殖情况。结果成功构建pcDNA3.1-c-Myc质粒;常氧、乏氧状态下转染pcDNA3.1-c-Myc质粒后,HT-29细胞系中HIF-1α的mRNA水平无变化,VEGF和eNOS的mRNA水平明显升高,HIF-1α蛋白水平明显增高。高表达c-Myc的HT-29细胞增殖能力明显增强。共转染pcDNA3.1-c-Myc质粒和HIF-1α的siRNA后,HT-29细胞的增殖能力明显降低。结论在HT-29细胞系中c-Myc通过HIF-1α调控HT-29细胞的增殖。
- 陈成王桂华杨熹李小兰陶德定龚建平胡俊波
- 关键词：结肠癌C-MYC缺氧诱导因子-1Α细胞增殖
- TAT-N24穿膜融合多肽对HepG2细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的观察TAT-N24穿膜融合多肽对肝癌细胞增殖的抑制作用。方法用纯化的TAT-N24穿膜融合多肽处理HepG2细胞,使用流式细胞仪检测细胞周期;采用BrdU掺入法检测细胞DNA合成;采用Western Blot法检测细胞内相关蛋白的表达水平。结果空白组、对照多肽组和TAT-N24处理组细胞BrdU掺入阳性率分别为42.7±3.6%、38.2±2.8%和25.3±2.7%(P<0.05);G0/G1期细胞比例分别为52.6±4.7%、52.0±4.6%和68.6±4.7%(P<0.05);三组细胞AKT磷酸化水平无显著性差异。结论 TAT-N24穿膜融合多肽能有效阻滞肝癌HepG2细胞的细胞周期进程,抑制DNA合成。TAT-N24穿膜融合多肽有望被开发为有效的肿瘤分子靶向治疗药物。
- 邓豫王桂华金源李小兰陶德定李维娜龚建平胡俊波
- 关键词：HEPG2细胞分子靶向治疗
- p110β质粒的构建及其对MKN28细胞增殖的影响
- 2014年
- 目的 构建p110β基因高表达质粒,转染胃癌MKN28细胞,观察其对胃癌MKN28细胞增殖的影响.方法 以基因组cDNA为模板,聚合酶链反应（PCR）扩增目的片段,构建pCMV-Flag-p110β质粒,通过酶切鉴定及测序确定无误后,转染MKN28细胞,通过实时定量PCR（Real-timePCR）和Western blot检测p110β高表达,以及通过噻唑蓝（MTT）法检测其对MKN28细胞增殖的影响.结果 成功构建了Flag-p110β质粒,在胃癌MKN28细胞中高表达p110β能促进蛋白激酶B（AKT）的磷酸化,48 h后噻唑蓝（MTT）法检测空白组、阴性对照组和高表达p110PIK组490 nm波长处的吸光度值分别为：0.791 6±0.0425、0.828 1 ±0.015 6、1.031 2±0.1094,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 成功构建Flag-p110β质粒,高表达p110β能够促进MKN28细胞增殖.
- 刘鹭曹小年王桂华胡俊波唐锦辉
- 关键词：胃癌细胞增殖
- HAX1和EGFP共表达重组腺病毒载体的构建、鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的构建和鉴定HAX1和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体。方法采用DNA重组技术，将目的基因HAX1克隆至含有报告基因EGFP的穿梭质粒pAdTrack—CMV中，并转化于大肠埃希菌DH5a；筛选出重组质粒pAdTrack—CMV—HAX1，并在BJ5183细菌中与pAdEasy-1质粒进行同源重组，产生重组腺病毒载体；用lipofectamine将其转染HEK293细胞，包装携带全长HAX1的重组复制缺陷型腺病毒pad—HAX1-EGFP，酶切和序列测定鉴定；用制备好的Ad—HAX1-EGFP感染HEK293细胞，流式细胞术检测其感染效率，RT—PCR、Western印迹鉴定外源基因HAX1的表达。BrdU检测感染了Ad—HAX1-EGFP的HEK293细胞增殖情况。结果pAdTrack—CMV—HAX1重组质粒构建成功。pAdTrack—CMV—HAX1质粒与pAdEasy-1质粒同源重组后与预期结果相符。构建好的Ad—HAX1-EGFP能有效感染HEK293细胞；外源基因能在239细胞中有效表达。HAX1高表达的HEK293细胞其增殖率得以提高。结论成功构建了表达HAX1和EGFP共表达的重组腺病毒载体，HAX1能够促进结肠癌细胞HEK293细胞的增殖。
- 李小兰徐向上李兆明王桂华魏欣罗学来刘慎沛肖徽陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：重组腺病毒增殖
- 上皮膜蛋白-1作为胃肠道间质瘤耐药标志物的研究被引量：1
- 2012年
- 目的寻找胃肠道间质瘤（GIST）患者格列卫耐药的标记物，指导格列卫的临床用药。方法采用免疫组织化学方法比较格列卫规范治疗后，耐药的患者耐药前后上皮膜蛋白-1（EMP-1）蛋白的表达水平。将GIST882细胞种植于裸鼠皮下形成移植瘤，裸鼠持续口服伊马替尼3周后传代，直至移植瘤耐药。比较耐药移植瘤与敏感移植瘤中EMP-1基因和蛋白表达水平的差异。结果伊马替尼耐药后，患者及移植瘤肿瘤组织中EMP-1表达较耐药前显著增加，伊马替尼耐药移植瘤中EMP-1的RNA水平较敏感移植瘤增加约11倍。结论EMP-1可以作为GIST耐药的标志物。
- 来森艳王桂华曹小年李兆明龚建平胡俊波
- 关键词：胃肠道间质瘤复发伊马替尼耐药
- 慢性顽固性便秘30例手术治疗分析被引量：4
- 2010年
- 目的研究手术治疗慢性便秘的临床价值、手术适应证及其对肠道功能的影响。方法结肠慢传输型便秘患者25例，结肠慢传输型便秘合并出口梗阻型便秘患者1例，成人巨结肠致便秘患者4例，均行手术治疗。术后随访记录患者排便情况、并发症、生活质量。结果所有患者术后无严重并发症及死亡。30例患者术后生活质量均得到明显改善，随访6—36个月，术后3个月内大便次数均增多，平均每日4．5次（3～6次），软便；以后大便次数逐渐减少，1年后每日1—3次成形大便，无一例需服止泻剂。术后2例患者出现粘连性肠梗阻，1例术后出现吻合口漏，其他患者均未出现肠梗阻、腹泻、腹痛、排便失禁等并发症。结论对排便功能障碍患者，有选择性的行结肠次全切除并盲直肠吻合术，近期疗效理想，特别对于慢传输型便秘疗效较好，但长期疗效尚需进一步研究。
- 王桂华胡俊波杨传永
- 关键词：结肠次全切除术慢性便秘
- 全反式维甲酸对急性前髓性白血病细胞HL60生长的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察全反式维甲酸(ATRA)对急性前髓性白血病细胞HL60生长的影响,探讨其抑制肿瘤生长的作用方式。方法建立急性前髓性白血病细胞HL60的裸鼠皮下实体瘤模型,经尾静脉隔日给予ATRA,第14天测量肿瘤大小;体外实验中,用免疫荧光法检测分化相关抗原CD11b的表达,观察ATRA对HL60分化水平的影响,用碘化丙啶(PI)染色法观察ATRA对HL60的细胞周期的影响。结果 ATRA治疗14 d后,ATRA组瘤体体积为(0.5±0.6)cm3,对照组为(1.9±1.7)cm3(P<0.05);体外实验中,ATRA处理HL60细胞72 h后,细胞分化相关抗原CD11b的表达为(27.3±3.2)%,对照组(5.1±3.2)%(P<0.01);ATRA处理HL60细胞24 h后,检测细胞周期分布比例,ATRA处理组静止期(G0/G1期)细胞比例为(57.6±1.5)%,对照组(43.0±2.0)%(P<0.01)。结论 ATRA能够有效抑制HL60实体瘤的生长;体外实验证实,ATRA抑制HL60生长的作用机制是诱导细胞G0/G1期阻滞,诱导细胞分化。
- 金源邓豫王桂华李小兰龚建平胡俊波
- 关键词：HL60
