蒋忠华
- 作品数：43 被引量：69H指数：5
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 甲型流感病毒M_2蛋白胞外功能区真核表达质粒的构建和表达分析被引量：1
- 2006年
- 目的构建流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)真核表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达。方法根据Genbank(NCBI ISDN13425)中查得的M2e编码序列,设计并合成两条DNA单链;在两条链两端添加碱基构成酶切位点的粘性末端,退火后使之互补结合成为M2e编码序列;然后将其插入到经双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-M2e;经酶切和DNA测序鉴定后,转染HEK293细胞,用免疫荧光技术检测pcD-NA3.1(+)-M2e在HEK293细胞的表达,并通过MTT检测刺激淋巴细胞增殖及M2e蛋白的分泌情况。结果合成的寡核苷酸链经退火形成双链,插入酶切的真核表达载体后构建成pcDNA3.1(+)-M2e。免疫荧光技术证实该质粒表达的M2e蛋白定位于细胞膜上,转染细胞的培养上清经MTT实验证实能刺激淋巴细胞增殖,表明表达的M2e蛋白也可分泌至细胞外。结论成功构建了流感病毒M2e的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-M2e,表达的M2e蛋白不仅存在于细胞膜上,也可分泌到细胞外。流感病毒M2e基因真核表达质粒的构建及成功表达为流感病毒基因工程疫苗、通用疫苗和核酸疫苗的研究奠定了基础。
- 王丰平李明远李燕张卫东李虹蒋忠华李婉宜
- 关键词：甲型流感病毒真核表达载体免疫荧光技术
- 清热解毒口服液在小鼠体内抗甲型流感病毒的实验研究被引量：1
- 2012年
- 目的观察清热解毒口服液在BALB/c小鼠体内抗甲型流感病毒的作用。方法将BALB/c小鼠随机均分为正常对照组、流感病毒感染模型组、利巴韦林片组、连花清瘟胶囊组及清热解毒口服液高、中、低剂量组。小鼠感染流感病毒后ig给药,以生存情况、死亡保护率及延长生命率作为指标,观察清热解毒口服液抗流感病毒的作用。结果清热解毒口服液各剂量组均能减轻感染小鼠的发病症状;死亡保护率为50%～60%;延长生命率为61.56%～73.84%。与阳性药物利巴韦林片及连花清瘟胶囊比较,差异无统计学意义。结论清热解毒口服液在BALB/c小鼠体内有抗甲型H1N1流感病毒的作用,其机制有待深入研究。
- 王保宁张玉芬任来峰左斌李婉宜蒋忠华李明远黄媛莉
- 关键词：清热解毒口服液甲型流感病毒BALB/C小鼠
- 重组鼠β-防御素3多肽及其制备方法与用途
- 本发明通过基因工程技术构建鼠β-防御素3基因(Mbd-3)的原核重组质粒，将原核重组质粒转入工程菌进行诱导高效表达鼠β-防御素3多肽(MBD-3)并进行表达产物的提取、纯化和凝血酶酶切释放出有活性的MBD-3成熟肽。本发...
- 李明远江滟李婉宜王月玲巩天祥王保宁杨远王欢蒋忠华
- 文献传递
- 组织荚膜胞浆菌感染的诊断与分析(附1例报告)被引量：2
- 2009年
- 目的对1例组织荚膜胞浆菌病(histoplasmosis)进行病原学诊断并分析组织荚膜胞浆菌的培养特征。方法取外周血液推片,瑞氏染色,进行初步诊断;将0.1 ml血样接种于5%兔血心脑浸液琼脂平板,37℃培养分离病原菌,再将分离出的单菌落涂片染色并做单菌落小培养(25℃湿盒培养),同时转种于沙保弱培养基平板,分别置于37℃和25℃湿盒培养至4周。将25℃沙保弱培养基平板的培养物挑丝状物转种沙保弱培养基平板,置37℃培养7 d,涂片染色观察。结果血涂片瑞氏染色可见单核细胞胞浆内有多个酵母样菌,菌周有未着色的空晕;血标本接种于兔血琼脂平板37℃培养24 h后形成乳白色酵母型菌落,菌周无溶血环,单菌落25℃培养3 d镜检有典型的菌丝;用沙保弱培养基25℃培养4周后出现明显的深入培养基的丝状物,将丝状物转种后置37℃培养,孢子转变成酵母样菌。结论该菌在25℃培养形成丝状型菌落,37℃培养为酵母型菌落,符合组织荚膜胞浆菌一般特征。病例被诊断为组织荚膜胞浆菌感染。
- 邝玉李婉宜杨远马巨辉蒋忠华李明远
- 关键词：外周血
- 大鼠干扰素诱导蛋白-10的体外表达和鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的构建大鼠干扰素诱导蛋白-10(IP-10)真核表达载体,在NIH3T3细胞中表达重组载体pcDNA3.1(+)-IP-10,并对其表达产物进行鉴定。方法通过PCR扩增IP-10基因片段,通过酶切和连接反应,构建IP-10的真核表达载体pcDNA3.1(+)-IP-10,重组载体经限制性内切酶、PCR及DNA序列测定等证实构建成功后,用PolyFect脂质体转染NIH3T3细胞,免疫荧光技术检测pcDNA3.1(+)-IP-10在NIH3T3细胞的表达情况。转染的NIH3T3细胞通过G418筛选出稳定表达的细胞克隆,Western Blotting鉴定IP-10蛋白在细胞培养上清的表达情况。结果酶切分析、PCR及DNA序列测定证实,IP-10基因被成功克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),免疫荧光技术检测证实重组载体可在NIH3T3细胞表达。Western Blotting结果显示细胞培养上清有IP-10蛋白表达。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-IP-10,为进一步研究其对Th1型自身免疫性疾病的治疗效果奠定基础.
- 赵玉杰林媛李明远李虹蒋忠华
- 关键词：干扰素-Γ真核表达自身免疫性疾病
- 高度特异性的重组免疫毒素及其制备方法
- 一种高度特异性的重组免疫毒素，以IL－18为导向分子、以绿脓杆菌外毒素的活性片段PE38为毒素分子，通过基因重组构建而成。该免疫毒素的制备方法包括重组质粒的构建、重组质粒转染的工程菌的制备、免疫毒素IL－18－PE38的...
- 张林李虹李明远胡怀忠蒋忠华
- 文献传递
- hTR-siRNA腺病毒的构建及其体外抗肿瘤的初步研究被引量：2
- 2008年
- 目的:构建RNA干扰(RNAi)腺病毒,通过体外实验观察其抑制肿瘤细胞中人端粒酶RNA(hTR)基因表达、降低瘤细胞中的端粒酶活性、以及促进肿瘤细胞凋亡等作用。方法:首先用一种新的体外连接法构建腺病毒Ad-hTR-siR-NA,表达靶向hTR的小干扰RNA分子(siRNA),用100MOI的重组腺病毒感染不同的肿瘤细胞系,再用TRAP-ELISA法测定细胞端粒酶活性、Real-timePCR测定hTR的mRNA水平、流式细胞术(FCM)测定肿瘤细胞凋亡率及人端粒酶反转录酶(hTERT)的蛋白变化。结果:感染了Ad-hTR-siRNA的肿瘤细胞的端粒酶活性明显降低,其中以HeLa细胞降低最明显,其端粒酶活性抑制率达到58.87%,hTR的mRNA表达下调70.21%,细胞凋亡率为29.7%,但hTERT的蛋白表达并不被阻断。结论:Ad-hTR-siRNA可以有效、特异地抑制hTR基因表达,诱导体外培养的肿瘤细胞凋亡,具有抗肿瘤活性;此结果提示Ad-hTR-siRNA在肿瘤基因治疗方面具有潜在的应用价值。
- 李燕肖丽英姚刚李虹杨志伟李婉宜蒋忠华李明远
- 关键词：HTR腺病毒RNA干扰端粒酶抗肿瘤作用
- HPV16E7蛋白编码基因原核表达与鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的研究HPV16E7蛋白的生物学特性及其细胞转化机制,对HPV16E7蛋白原核表达质粒进行构建、表达和鉴定。方法以临床确诊的HPV16感染患者子宫颈细胞DNA为模板,采用PCR方法扩增HPV16E7基因,经BamH和Hind双酶切后插入相同酶切pET32a(+)载体,转化JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选。经IPTG对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot检测目标蛋白表达情况。结果成功构建了原核表达质粒pET32/E7,HPV16E7-TRX融合蛋白在BL21(DE3)菌株中高效表达,在1mmol/LIPTG、30℃诱导条件下融合蛋白表达量占菌体总蛋白的30%左右。结论pET32/E7原核表达质粒的构建、HPV16E7融合蛋白的表达为进一步深入研究HPV16E7蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用机制奠定了基础。
- 施桥发王保宁李虹魏晓丽张卫东曹康蒋忠华李明远
- 关键词：HPV16免疫印迹
- 小鼠β防御素2在MDCK细胞中的表达和抗流感病毒活性研究
- 2011年
- 目的探索小鼠β防御素2(mouseβ-defensin 2,mBD2)表达载体在狗肾传代细胞(Madin-Darby canine kidney,MDCK)中的表达和抗甲型流感病毒(influenza Avirus,IAV)活性。方法将真核表达载体pcDNA3.1/mBD2利用脂质体法转染MDCK细胞,G418筛选得到稳定转染的阳性细胞,用RT-PCR方法鉴定目的基因和免疫荧光法鉴定目的蛋白在转染细胞中的表达。用TCID50测定转染细胞的抗IAV活性。用pcDNA3.1/mBD2质粒免疫小鼠,观察死亡保护率。结果 pcDNA3.1/mBD2转染MDCK细胞后在细胞中稳定表达,转染细胞的TCID50比对照组的病毒效价降低近77.98倍;重组质粒免疫小鼠后,死亡保护率为55.55%。结论 mBD2能够在MDCK细胞中稳定表达,并且在体外及体内实验中显示出抗流感病毒活性,该结果为抗流感病毒制剂研究奠定了实验基础。
- 巩天祥冯伟李婉宜张强戴军裴德翠蒋忠华李明远
- 关键词：甲型流感病毒
- 抗感颗粒抗甲型流感病毒的实验观察被引量：5
- 2010年
- 目的 观察抗感颗粒在鸡胚和BALB/c小鼠体内抗甲型流感病毒的作用.方法 （1）鸡胚实验：将甲型流感病毒鼠肺适应株FM1接种9日龄鸡胚,再将不同剂量的抗感颗粒注入鸡胚,以血凝效价为指标,观察抗感颗粒对流感病毒的作用,设立流感病毒对照组和利巴韦林片对照组,每组6个鸡胚.（2）小鼠实验：将BALB/c小鼠随机分为病毒感染模型组、正常对照组、利巴韦林片组及抗感颗粒低、中、高剂量组,每组20只小鼠.用流感病毒感染小鼠后灌胃给药,以实验小鼠的生存情况、死亡保护率及延长生命率等指标观察抗感颗粒的抗流感病毒作用.结果 在鸡胚实验中,抗感颗粒高、中剂量组均能抑制流感病毒复制并达到显效结果,病毒血凝效价比流感病毒对照组分别低了5个、3个稀释度.在小鼠实验中,抗感颗粒各剂量组均能减轻感染小鼠的发病症状,减少小鼠死亡,死亡保护率为35.0%～55.0%;生存时间延长,延长生命率为73.0%～88.9%、最低有效剂量为3.00g/kg.结论 抗感颗粒对甲型H1N1流感病毒的增殖有抑制作用,对流感病毒感染引起的小鼠死亡有保护作用.
- 刘冯欢李明远罗俊李婉宜王保宁杨远邝玉左斌马秀英蒋忠华
- 关键词：流感病毒A型抗感颗粒H1N1
