王亚楠
- 作品数：8 被引量：27H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学社会学经济管理更多>>
- 小麦WPBF与高分子量谷蛋白基因上游Prolamin-Like box的特异结合被引量：4
- 2012年
- 【目的】克隆普通小麦胚乳特异表达转录因子基因WPBF,对其原核表达条件进行优化,并验证其编码蛋白和小麦高分子量谷蛋白亚基基因(HMW-GS)上游Prolamin-Like box的结合特性,为小麦HMW-GS表达调控机制的阐明奠定基础。【方法】利用RT-PCR扩增得到WPBF编码区,将其连接到pET-21a-MBP载体中,并分别在E.coliT7 Express和Origami B(DE3)菌株中诱导表达。依次利用Amylose和Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,最后通过凝胶迁移阻滞试验(EMSA)对重组蛋白的DNA结合特性进行分析。【结果】在33℃的Origami B(DE3)菌株中表达含MBP和His双标签的重组WPBF大部分以可溶性形式存在,其表达量占细菌总蛋白的48.0%。重组WPBF和含HMW-GS上游Prolamin-Like box的两类DNA探针能发生特异结合,但重组WPBF和含"TGCAAAG"基序DNA探针的结合强度高于其和含"TGCAAG"基序DNA探针的结合。【结论】建立了优化的WPBF原核表达系统,并获得具有生物活性的重组蛋白;重组WPBF能与HMW-GS启动子来源的两种Prolamin-Like box特异性结合,但结合能力存在差异。
- 卫晓彬王亚楠张超单丽伟唐如春范三红
- 关键词：小麦HMW-GSBOX
- 秦岭中段不同坡向锐齿栎种子雨、土壤种子库与幼苗更新被引量：19
- 2019年
- 以秦岭中段不同坡向(阳坡、半阳坡、半阴坡及阴坡)锐齿栎天然林为对象,对锐齿栎种子雨、种子库的数量、质量动态以及幼苗发育过程进行研究.结果表明:锐齿栎种子雨一般从8月中旬开始,9月中下旬到10月上旬达到高峰期,11月中上旬结束;不同坡向的种子雨降落历程、发生时间和组成不同;半阳坡种子雨强度最大,为134.13粒·m-2,其余大小依次为阳坡、半阴坡、阴坡;阳坡种子雨降落时间最早、持续时间最长,高峰期持续时间也最长,阴坡种子雨降落时间最晚、持续时间最短,高峰期持续时间也最短;种子活力及成熟种子占其种子雨的比例大小顺序为半阳坡>阳坡>半阴坡>阴坡.从种子雨降落结束到翌年8月,各坡向土壤种子库总储量大小顺序均为半阳坡>阳坡>半阴坡>阴坡;各坡向的土壤种子库中成熟、未成熟、被啃食种子数量和种子活力均随时间变化呈递减趋势,而霉烂种子数量增加;各坡向土壤种子库中的种子均主要集中在枯落物层,其次为0~2 cm土层,而在2~5 cm土层中只有极少量种子存在.4种坡向中锐齿栎幼苗的密度差异显著,半阳坡幼苗最多,其余依次是阳坡、半阴坡和阴坡.半阳坡更适合锐齿栎种子的萌发和幼苗生长.
- 卢彦磊张文辉杨斌王亚楠
- 关键词：锐齿栎阳坡半阴坡阴坡种子雨土壤种子库
- 核酸酶P1在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达、纯化及活性分析
- 核酸酶P1（Nuclease P1, NP1，EC3.1.30.1）是一种非特异性的分解单链DNA和RNA为5’-单核苷酸的核酸酶，而5’-单核苷酸及其衍生物广泛应用于生物医药、食品等行业。目前工业用NP1对纯度要求较低...
- 王亚楠
- 关键词：核酸酶P1重叠延伸PCR原核表达毕赤酵母
- 文献传递
- 农民合作组织对农村妇女发展作用研究——以山西蒲韩联合社为例
- 随着城市化进程的加快和农业产业结构的不断调整,大批男性劳动力加入到城市务工和经商的行列,多数农村妇女因其自身和家庭的原因留守在家,农业女性化的趋势越来越明显。作为农业生产的主力军和农村发展的主要力量,她们在农村建设发展中...
- 王亚楠
- 关键词：农村妇女发展农民合作组织
- 文献传递
- 切刻核酸内切酶PNE45的原核表达与活性鉴定
- 2011年
- 【目的】对大肠杆菌噬菌体phiV10第45个基因编码蛋白PNE45进行原核表达,并检测其酶活性。【方法】设计并合成10段密码子优化的寡核苷酸序列,采用重叠延伸PCR技术,将其拼接克隆,获得人工合成的PNE45基因,然后将其整合入含有MBP纯化标签的pET21a原核表达载体中,构建重组载体pET21a-MBP-PNE45,诱导表达后获得融合蛋白MBP-PNE45。利用Amylose亲和层析纯化融合蛋白MBP-PNE45,以pUC19为底物,分别在Mg2+和Mn2+参与下对MBP-PNE45活性进行初步鉴定。【结果】融合蛋白MBP-PNE45主要以可溶性形式表达,其表达量占细胞总蛋白的35%左右。PNE45融合蛋白在Mg2+缓冲液中具有DNA随机切刻活性,在Mn2+存在时还具有切刻位点对位切刻活性。【结论】首次成功表达并制备了PNE45,并初步证明其是一种新的随机性切刻核酸酶。
- 梁亚峰张超王亚楠范三红
- 关键词：重叠延伸PCR表达纯化
- 核酸酶P1的原核表达、纯化及酶学特性分析
- 2012年
- 为了建立一种核酸酶P1(Nuclease P1,NP1)的原核表达纯化系统,首先采用重叠延伸PCR将22段寡核苷酸拼接,获得人工合成的NP1基因。将其克隆至分泌型表达载体pMAL-p4X获得重组质粒pMAL-p4X-NP1,然后将重组载体转化T7 Express和Origami B(DE3)菌株诱导表达,利用Amylose亲和层析柱纯化获得重组蛋白,并对其活性、热稳定性和金属离子依赖性进行系统分析。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白MBP-NP1(Maltose binding protein-NP1)在T7 Express和Origami B(DE3)菌株中均可表达,且以可溶性形式存在。活性检测表明Origami B(DE3)菌株中获得的重组蛋白活性高于T7 Express菌株(75.48 U/mg:51.50 U/mg);利用蛋白酶Factor Xa切除MBP标签后,两种重组蛋白的比活力均有提高,分别为258.13 U/mg和139.20 U/mg。重组NP1表现出良好的热稳定性,80℃温浴30 min后重组酶仍具有90%以上的活力。2.0 mmol/L Zn2+对NP1有比较明显的激活作用,相同浓度的Cu2+则对该酶有强烈的抑制作用。该研究实现了NP1在大肠杆菌系统中的功能性表达,为NP1纯酶的制备提供一个替代途径。
- 王亚楠魏爱云王美艳卫晓彬张超单丽伟范三红
- 关键词：核酸酶P1原核表达热稳定性
- 农村留守儿童行为偏差的个案介入研究
- 农村留守儿童问题是我国城镇化发展的结果,是社会经济转型期产生的重大问题。由于父母长期在外地,留守儿童缺乏父母的管教与监督,在心理上表现为自卑,在行动上表现为自由散漫。近年来,农村留守儿童在生活、学习、心理等方面的问题引起...
- 王亚楠
- 关键词：农村留守儿童社会工作
- 文献传递
- 子午岭地区麻栎实生苗构型及生长研究
- 为了从实生苗阶段开始培育高品质林木,以子午岭桥山林区阴、阳坡麻栎(Quercus acutissima)林中,1-8 a生实生苗为研究对象,采用典型取样的方式,分别调查了不同坡向(阴、阳坡)及其林下、林窗和林缘微生境下麻...
- 王亚楠
- 关键词：麻栎实生苗生境构型
