李叶 作品数:38 被引量:97 H指数:5 供职机构: 辽宁出入境检验检疫局 更多>> 发文基金: 中央高校基本科研业务费专项资金 国家质检总局科技计划项目 国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 农业科学 轻工技术与工程 医药卫生 生物学 更多>>
检测犬瘟热病毒抗体的重组N蛋白-ELISA方法的建立及应用 被引量:4 2008年 将已构建成功的重组质粒pET-N转化入Rosetta2(DE3)菌株中,在IPTG诱导下获得重组N蛋白。用镍离子亲和层析方法对表达产物进行纯化,对纯化效果及纯化产物的特异性进行SDS-PAGE电泳及Western blot检测。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,对各种反应条件进行了优化,建立了检测CDV抗体的间接ELISA方法。用此方法检测了270份血清样品,并与法国Synbiotics公司ELISA试剂盒检测结果相比较,符合率达92.4%。为应用血清学方法对犬科动物进行犬瘟热流行病学的调查奠定了基础。 简中友 贾赟 王全凯 徐立秋 胡传伟 李叶 李振荣关键词:重组质粒 重组N蛋白 间接ELISA 肉制品中沙门氏菌invA基因实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:26 2013年 针对沙门氏菌invA基因设计一对特异引物,建立SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法,并进行特异性、敏感性、重复性检测。结果表明,所建立的沙门氏菌实时荧光定量PCR检测方法,特异性良好,组间组内重复性良好,沙门氏菌检测下线为101CFU/mL。本研究建立了沙门氏菌特异、敏感、快速的实时荧光定量PCR检测方法,为沙门氏菌的快速诊断奠定了基础。 杜雄伟 李叶 冮洁 胡文忠 武晓松关键词:沙门氏菌 荧光定量PCR A型流感病毒对小鼠致病机制的研究进展 流感是一种古老的疾病,能够引起低等动物、禽类及人发病的疾病,至今仍然不能被人类所控制的疾病,因此,受到了各国政府和学者的重视。根据核蛋白(NP)和基质蛋白(M)的抗原性不同可分为A、B、C三型,其中A型流感病毒的宿主谱最... 杜雄伟 李叶 杨卓文献传递 多种猪腹泻类病毒分子生物学快速检测方法的建立及诊断试剂盒的研制 苏永生 贾赟 姚龙泉 曹瑞兵 富亮 李振荣 李叶 胡传伟 本研究分别选择这三种腹泻病毒的高度保守的基因区域为目的基因,设计引物、探针,用Taq man荧光定量RT-PCR方法对这三种病毒的细胞毒、各种组织病料、及粪便样品进行检测,同时与经典方法、普通RT-PCR、国外试剂盒等检...关键词:关键词:TAQMAN探针 高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用分析水产品中汞、砷的形态和定量检测技术研究 庞艳华 林维宣 曹际娟 薛大方 刘淑艳 蒋丹 李叶 王秋艳 赵景红 高鹭 于灵 王楠 课题背景:中国水环境重金属污染问题十分突出,水产品因重金属超标引发的食品质量安全风波时有发生.水体中的重金属不易被微生物分解,易被生物吸收富集,并转化为毒性更大的金属有机化合物,经食物链传递,对人体构成危害.重金属汞、准...关键词:关键词:水产品 食品质量安全 多种经济动物传染性疾病病原分子生物学快速检测方法的研究及其试剂盒的研制 胡传伟 林颖 苏永生 李振荣 王宝山 李叶 丁家波 耿庆华 本课题建立了应用PCR技术、实时定量PCR技术检测水貂阿留申病毒、犬细小病毒、猫传染性鼻炎病毒的方法,主要原理和技术攻关的内容包括以下几个方面:1.根据病毒的分子生物学特点,设计特异的引物与探针序列,通过对反应条件的优化...关键词:关键词:经济动物 传染性疾病 试剂盒 ISAV实时荧光RT-PCR检测方法的建立 被引量:2 2013年 为建立ISAV(传染性鲑鱼贫血症病毒)实时荧光定量PCR检测方法,针对ISAV基因序列保守区域设计一对特异性引物和一条特异性的探针,建立实时荧光RT-PCR探针检测法,并进行特异性、敏感性、重复性检测。结果表明:所建立的ISAV实时荧光RE-PCR探针检测法,引物和探针特异性良好,组内组间重复性良好,检出ISAV最小拷贝数为13拷贝。 杜雄伟 李叶 庞艳华关键词:实时荧光RT-PCR 牙鲆弹状病毒环介导等温扩增检测方法的建立与应用 被引量:7 2010年 建立了牙鲆弹状病毒的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,首先根据牙鲆弹状病毒的糖蛋白的基因保守序列,利用Primer Explorer V3软件设计了6条引物,并对LAMP反应温度和反应时间等条件进行了优化。该方法的检测限为30fgRNA,比常规RT-PCR灵敏度高100倍,与鲤春血症病毒、传染性胰脏坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒、海洋双RNA病毒、病毒性出血败血症病毒以及病毒性神经坏死病毒等没有交叉反应。该方法检测时间短,在1h内即可完成检测。用建立的LAMP方法对临床鱼样进行了检测,结果表明40尾石鲽鱼样品中有3尾感染HRV,与病毒分离结果一致,说明LAMP方法比较适合牙鲆弹状病毒的早期及现场诊断。 孙颖杰 岳志芹 刘荭 赵玉然 史秀杰 梁成珠 吴斌 李叶 王哲关键词:环介导等温扩增 聚合酶链式反应 嗜水气单胞菌感染的比较病理学研究 2009年 李叶 杜雄伟 王晓辉关键词:嗜水气单胞菌感染 人工感染试验 病理组织学变化 嗜水气单胞菌病 软体动物 剑尾鱼 狐源犬瘟热病毒CDV-FOX-TA株核蛋白基因的原核表达及鉴定 2008年 应用RT-PCR技术扩增出犬瘟热病毒(CDV)核衣壳(N)蛋白基因抗原性好的高保守基因片段,将其TA克隆至pMD18-T载体中,再利用酶切、连接的方法将测序正确的N基因目的片段亚克隆到原核表达载体pET24b中6×HisTag编码基因的上游,并将该重组质粒转化大肠杆菌Rosetta2(DE3)株,经IPTG诱导,N基因融合蛋白获得了高效表达。SDS-PAGE分析和Western blot分析的结果显示,表达产物的分子质量为15kDa,与CDV标准阳性血清呈阳性反应,间接ELISA结果也表明重组表达产物具有良好的抗原性,能够有效区分CDV标准阳性与阴性血清,表明大肠杆菌表达的CDVN蛋白在免疫原性上具有与天然N蛋白同样的特性,可作为检测CDV的间接ELISA包被抗原。 简中友 贾赟 王全凯 胡传伟 肇慧君 李叶关键词:犬瘟热病毒 核蛋白 原核表达