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显性负性突变型TGF-β Ⅰ型受体腺病毒的构建和功能验证: 2009年; 目的:构建制备显性负性突变型转化生长因子(TGF-β)Ⅰ型受体腺病毒,并验证其对于相应配体功能的抑制效应.方法:利用分子克隆技术构建和重组腺病毒技术,构建制备显性负性突变型TGF-βⅠ型受体腺病毒,并用其感染C3H10细胞,采用荧光显微镜观察和RT-PCR证明显性负性突变型TGF-βⅠ型受体腺病毒在C3H10细胞中的表达.采用碱性磷酸酶(ALP)定量和荧光素酶报告基因实验,分析显性负性突变型TGF-βⅠ型受体腺病毒对骨形成蛋白2(BMP2),TGF-β1功能的影响,证明其抑制相应配体功能的有效性.结果:构建和制备了显性负性突变型TGF-βⅠ型受体腺病毒,其可以感染C3H10细胞并在C3H10细胞中表达相应的显性负性TGF-βⅠ型受体;特定的显性负性突变型TGF-βⅠ型受体腺病毒可分别抑制由BMP2诱导的ALP活性及由TGF-β1诱导的荧光素酶活性.结论:成功构建制备的7种显性负性突变型TGF-βⅠ型受体腺病毒具有抑制相应配体功能的特性,为分析TGF-βⅠ型受体功能及靶向TGF-β信号通路的基因治疗提供了有用的工具.; 文巍冯涛张燕翁亚光罗进勇; 关键词：突变 TGF-Β 受体腺病毒信号转导

内皮素对于BMP9诱导成骨的影响: 目的:探讨内皮素在BMP9诱导成骨效应中的作用。方法:细胞水平,用内皮素腺病毒和BMP9腺病毒处理骨髓间充质干细胞,检测C3H10中成骨早期指标ALP的含量与活性及成骨晚期指标钙盐沉积的含量;动物水平,裸鼠皮下注射经内皮...; 文巍罗进勇冯涛赵迎泽张婷卢小娟; 关键词：内皮素成骨效应; 文献传递

HBX基因逆转录病毒载体的构建及在LO_2细胞内的稳定表达被引量：4: 2010年; 目的构建乙型肝炎病毒X基因(HBX)逆转录病毒载体,并使其在人正常肝细胞LO2内的进行稳定表达。方法 PCR扩增HBX基因,克隆到逆转录病毒载体质粒pSEB-Flag中,构建表达HBX的重组逆转录病毒载体质粒pSEB-Flag-HBX,通过通过PCR、酶切、测序验证HBX基因后;体外将重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBX基因的重组逆转录病毒,并感染靶细胞人正常肝细胞LO2,稻瘟菌素(Blasticidin)筛选,获得成功转入HBX的LO2细胞。通过RT-PCR和Westernblot进一步验证HBX基因及HBx蛋白在LO2细胞内的表达。结果 (1)成功获得携带HBX基因的阳性重组质粒pSEB-Flag-HBX;(2)HBX基因被逆转录病毒成功地导入靶细胞LO2细胞,并实现稳定表达,RT-PCR检测到HBXmRNA在靶细胞中的表达,Westernblot检测到HBx蛋白在靶细胞LO2-HBx细胞中的表达。结论成功构建了携带HBX基因的重组逆转录病毒载体,感染人正常肝细胞LO2后能够稳定表达HBx蛋白,为进一步探讨HBx在肝癌发生发展中的作用提供了较为理想的实验模型。; 张婷赵迎泽罗进勇卢晓娟文巍冯涛; 关键词：HBX 逆转录病毒肝癌

S-腺苷酰-L-甲硫氨酸对肝癌细胞HepG2增殖、迁移及癌基因C-myc表达的影响被引量：1: 2010年; 目的探讨S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAMe)对肝癌细胞HepG2增殖、迁移及癌基因C-myc表达的影响,为深入研究SAMe在肝癌治疗中的作用奠定基础。方法体外培养HepG2细胞,MTT法检测不同浓度SAMe作用不同时间对HepG2细胞增殖的影响;细胞划痕法检测最适浓度SAMe对HepG2细胞迁移能力的影响;RT-PCR、免疫细胞化学法及Westernblot法检测SAMe对HepG2细胞癌基因C-myc转录、蛋白定位及表达的影响。结果终浓度为15.0μmol/L的SAMe处理细胞5d,细胞抑制率达54.6%,且抑制作用呈时间与剂量依赖性;经15.0μmol/LSAMe处理的细胞迁移能力明显下降,愈合速率为对照组的76.78%;细胞中癌基因C-myc的转录和蛋白表达均明显下降,蛋白定位无明显变化。结论 SAMe可通过降低C-myc的表达,抑制HepG2细胞的增殖和迁移,为肝癌治疗性药物的研究提供了一个新的方向。; 周炜毕杨冯涛文巍卢小娟赵迎泽张婷; 关键词：癌基因

骨形态发生蛋白9定向诱导多潜能干细胞成骨分化被引量：27: 2009年; 为确认和评价骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein9,BMP9)定向诱导多潜能干细胞成骨分化的能力,以鼠间充质干细胞C3H10、小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)和骨髓基质细胞(bone marrow stromalcell,BMSC)三种多潜能干细胞为目标细胞,用重组腺病毒的方法将BMP9导入细胞,通过荧光素酶报告基因实验、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)定量测定、钙盐沉积实验、realtime PCR、动物实验和组织化学染色等方法,观察BMP9对于多潜能干细胞成骨分化的定向诱导作用.结果提示,BMP9能诱导C3H10、MEFs和BMSC细胞ALP的表达,且具有剂量依赖性.BMP9在体外能够促进C3H10细胞和MEFs细胞的钙盐沉积.经BMP9刺激后,C3H10细胞成骨相关基因ALP、Runx2、骨桥素(osteopontin,OPN)和骨钙素(osteocalcin,OC)的mRNA水平均增加.荧光素酶报告基因实验证实,BMP9可以活化Smad和成骨关键基因Runx2.动物实验和组织化学染色检查显示,BMP9可以诱导C3H10细胞在裸鼠皮下异位成骨,因此,BMP9具有定向诱导多潜能干细胞成骨分化的能力.; 张燕文巍罗进勇; 关键词：多潜能干细胞信号转导分化转化生长因子

BMP9和BMP2纳米羟基磷灰石/聚酰胺复合物对桡骨缺损后修复效果的比较研究: 目的:比较腺病毒介导的人骨形态发生蛋白一9(Adv-hBMP9)和Adv-hBMP2纳米羟基磷灰石/聚酰胺复合物在损伤部位的骨缺损重建修复效果。方法:新西兰白兔36只,随机分成三组,制成双侧桡骨中段13mm骨缺损模型。A...; 卢小娟冯涛赵迎泽文巍张婷周炜陈恒君康权; 关键词：BMP2 骨缺损成骨作用; 文献传递

S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(SAMe)对HepG2细胞增殖,迁移能力的影响及机制研究: 目的:探讨S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(SAMe)对于肝癌细胞增殖,迁移等的影响,并且探索性研究SAMe对于癌基因C-myc表达的影响,为进一步深入研究SAMe在肝癌治疗的作用奠定基础。方法:体外培养HepG2细胞,MTT法...; 周炜毕杨冯涛文巍卢小娟赵迎泽张婷; 关键词：HEPG2细胞; 文献传递

ALK1和ALK2在BMP9诱导C3H10细胞成骨分化中的作用: BMPs属于TGFβ超家族,最初是作为骨生长因子被发现的,目前共分离和鉴定了20余种BMPs。骨形态发生蛋白(BMPs)在器官发育和组织损伤再生等过程中发挥着重要作用。目前,已报道的具有诱导成骨活性的BMPs主要是BMP...; 文巍; 关键词：骨骼发育基因干扰细胞生长; 文献传递

BMP2诱导C3H10细胞成骨分化的TGFβ-Ⅰ型受体的体外分析: 2009年; 筛选和分析与BMP2诱导间充质干细胞C3H10成骨分化有关的TGF-βⅠ型受体。利用显性负性突变型TGF-βⅠ型受体竞争抑制配体功能的特性,运用碱性磷酸酶定量测定、Real time PCR等方法,初步筛选出可能与BMP2诱导间充质干细胞C3H10成骨分化有关的的TGF-βⅠ型受体,随后运用RNA干扰的方法抑制相应TGF-βⅠ型受体的表达,进一步证实相关TGF-βⅠ型受体与BMP2发挥诱导成骨活性的关系。结果证实,显性负性突变的ALK3和ALK6能够抑制BMP2诱导的C3H10细胞成骨分化;RNA干扰抑制ALK3或(和)ALK6表达后,BMP2诱导C3H10细胞向成骨分化的趋势受到抑制。因此,ALK3和ALK6是与BMP2诱导C3H10细胞成骨分化有关的TGF-βⅠ型受体。; 张燕翁亚光文巍冯涛罗进勇; 关键词：RNA干扰

重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白9与骨形态发生蛋白2复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺多孔支架修复桡骨缺损的比较被引量：5: 2010年; 背景:课题组采用新的重组腺病毒介导的基因表达手段,与传统方法比较具有高效、方便、安全等优点,可作为进入临床基因治疗应用的潜在有力手段。目的:比较腺病毒介导的人骨形态发生蛋白9(Adv-h BMP-9)与腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2(Adv-h BMP-2)分别复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺多孔支架材料修复重建桡骨缺损的效果。方法:新西兰白兔36只,随机分成3组,制成双侧桡骨中段13mm骨缺损模型。分别植入Adv-h BMP-9+纳米羟基磷灰石/聚酰胺骨、Adv-h BMP-2+纳米羟基磷灰石/聚酰胺骨、Adv-GFP+羟基磷灰石/聚酰胺骨。植入后进行大体观察、X射线摄片、组织学检测。结果与结论:BMP-9组骨缺损完全修复,BMP-2组骨缺损部分修复,而GFP对照组骨缺损修复明显欠佳。提示重组腺病毒介导的BMP-9对桡骨骨缺损后的成骨修复作用强于BMP-2。; 卢小娟赵迎泽文巍张婷陈恒君周炜冯涛康权; 关键词：人骨形态发生蛋白2 腺病毒骨缺损成骨作用

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文巍

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