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应用四倍体补偿技术建立血友病A小鼠模型被引量：5: 2010年; 目的建立凝血因子Ⅷ（factorⅧ，FⅧ）基因剔除小鼠模型，为研究治疗血友病A提供理想的动物模型。方法应用ET克隆、胚胎干细胞同源重组和四倍体囊胚补偿技术，将小鼠F阿基因第16～19外显子靶向剔除，并应用PCR、逆转录PCR（reverse transcriptase-PCR，RT-PCR）及免疫组织化学染色技术，从DNA、RNA、蛋白水平检测FⅧ基因的转录及表达情况。通过检测激活的部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）和FⅧ的促凝活性（FⅧ：C）进行FⅧ基因剔除小鼠表型鉴定。结果PCR检测在剔除小鼠中未扩增出FⅧ基因的条带；RT—PCR分析显示剔除区域该基因mRNA转录本缺失；免疫组织化学染色显示在雄性半合子（-／y）和雌性纯合子（-／-）小鼠的肝脏中凝血因子Ⅷ表达缺失；FⅧ：C和APTT检测结果显示雌性杂合子（＋／-）FⅧ活性为野生型（wt）的80％，其APTT值较wt略有延长，而-／y和-／-小鼠的FⅧ的活性仅为wt小鼠的8％和10％，且APTT值均大于120s。结论FⅧ基因剔除小鼠具有与人类血友病A患者相似的表型，它的建立将促进我国血友病A治疗新技术的发展。; 匡颖王津津卢希彬陆顺元张良梁沈春玲费俭王铸钢; 关键词：血友病A 基因剔除

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张良梁