张晓锋
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：西安高新医院更多>>
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- SARS-CoV 5’-UTR相应cDNA作启动子时转录起始位点研究被引量：1
- 2005年
- 目的:分析具有启动子功能的SARS-CoV基因组5’-UTR cDNA在转录出mRNA时,转录起始的位点,从而分析序列功能。方法将SARS-CoV 5’-UTR驱动下报告基因的真核表达质粒pGL3-5’-UTR,转染HepG2细胞,然后提取总 RNA,采用5’-RACE,扩增出相应序列,通过比照,查找转录其始的位点。结果通过逆转录和二轮PCR,得到一个约440bp 的产物,经A-T克隆后测序,转录体起始位点在SARS-CoV 5’-UTR的第56位核苷酸,其下游是保守的保守的转录调控序列(TRS)。结论SARS-CoV 5’-UTR在调控基因转录时,第56位核苷酸及其下游的TRS具有重要作用。
- 张建军黄爱龙史小玲张晓锋
- HBV前C/C基因与绿色荧光蛋白基因融合表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达被引量：2
- 2004年
- 目的 :构建含HBV前C C基因与绿色荧光蛋白基因的融合表达载体 ,并在真核细胞中表达。方法 :用PCR法扩增含 1.3倍HBVayw型全基因组真核表达载体pHBV1.3的前C C基因片断 ,应用含绿色荧光蛋白基因的真核表达质粒构建融合表达载体 ,采用脂质体介导方法将其转染到HEK2 93细胞 ,并用荧光显微镜及ELISA法检测融合蛋白的表达。结果 :经PCR及酶切鉴定 ,证实成功构建了含HBV前C C基因的真核表达重组体pEGFP -HB VC ,显微镜下观察及ELISA法证实在HEK2 93细胞中表达了相应融合蛋白。结论 :构建的重组表达载体能在真核细胞中表达目的蛋白与GFP的双功能融合蛋白 ,适合于针对HBV前C C区的相关研究。
- 王超张建军黄爱龙张晓锋白伟利
- 关键词：肝炎病毒乙型绿色荧光蛋白
- 针对HBV X基因的siRNA抑制HepG2细胞HBV的复制和表达
- 2007年
- 目的构建能转录产生针对乙型肝炎病毒(HBV)X基因转录体的小干扰RNA(siRNA)转录载体pSIH-BV/X,研究其在体外对HBV复制和抗原表达的抑制作用。方法将构建成功的pSIHBV/X与HBV1.3倍体真核表达质粒pHBV1.3共转染HepG2细胞,转染后24、48、72h检测上清液中HBsAg、HBeAg的变化,并检测72h时HBV DNA的变化。结果成功构建了针对HBVX基因转录体的siRNA表达载体pSIHBV/X,并发现它能抑制HBsAg、HBeAg的分泌,抑制高峰在72h,抑制率分别是64%和61%,而无关对照序列的siRNA无此作用。荧光定量PCR证实HBV DNA的复制亦受到抑制,抑制率31%。结论针对HBVX基因转录体的siRNA在体外具有抑制HBV复制和抗原表达的作用。
- 张晓锋张建军史小玲王明勇白伟利
- 关键词：RNA干扰基因重组抗原表达
