崔湘霖
- 作品数：5 被引量：51H指数：4
- 供职机构：北京大学基础医学院生理学与病理生理学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部科学技术研究重大项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 三种鼠不同结构p53minigene瞬时转染H1299细胞对其生长的影响被引量：2
- 2001年
- 目的 比较一个位点不同碱基的鼠p5 3minigene对细胞生长的影响。方法 三种小鼠p5 3mini gene[野生型 (Arg)、假野生突变型 (Leu)和突变型 (His) ]真核表达载体 ,由LipofectAMINE介导转染p5 3缺失的H12 99细胞 ,在转染后不同时间点收集细胞 ,利用细胞计数、流式细胞术、蛋白免疫印迹等方法比较三种p5 3对细胞体外生长的影响。结果 在转染后不同时间点 ,野生型和假野生突变型p5 3均能诱导细胞凋亡和周期阻滞 ,并可转录激活Bax、p2 1WAF1和Mdm 2 ,突变型则无以上效应。结论 野生型和假野生突变型p5 3具有诱导肺癌细胞凋亡和引起周期阻滞的功能 ,这种作用可能是通过转录激活Bax和p2 1WAF1而实现 ,Mdm 2与野生型和假野生型p5 3可以反馈调节。 172Leu和 172His两种突变表现出截然不同的生物学效应 ,支持p5 3基因存在保留野生型抑瘤功能突变方式的观点。
- 马怡红吴秉铨柳剑英由江峰崔湘霖王洁良惠培
- 关键词：肺肿瘤P53基因细胞生长
- KLF6和Spl共同促进肿瘤转移抑制基因1的转录激活被引量：5
- 2011年
- 目的探讨肿瘤转移抑制基因1（TMSG-1）的基因转录调控机制。方法PCR扩增TMSG．1转录起始位点上游-271bp与下游＋303bp之间不同长度片段，连入荧光素酶报告基因质粒pGL3-basic，各重组质粒转染后对表达的荧光素酶活性进行检测；对重组质粒pGL3-237插入DNA序列的潜在转录因子结合位点进行定点突变，然后检测其荧光素酶活性的变化；运用凝胶迁移阻滞和染色质免疫共沉淀验证转录因子KLF6和Spl与TMSG-1DNA调控区的相互作用；通过免疫共沉淀实验分析转录因子KLF6和Spl之间的相互作用；对人前列腺癌PC-3M不同转移潜能亚系PC-3M-E8、PC-3M．2134，人肺巨细胞癌PG不同转移潜能亚系PG-BEl、PG-LH7通过荧光定量PCR分析TMSG．1和野生型KLF6mRNA水平；将KLF6真核表达质粒转染PC-3M-284后检测TMSG-1蛋白水平及细胞侵袭能力的变化。结果通过荧光素酶报告基因实验鉴定出TMSG．1基因第1号外显子内存在明显促进基因转录的调控区域＋59～＋123bp。对该区域序列定点突变后重组荧光素酶报告基因表达的荧光素酶活性下降，而共转染未突变的荧光素酶报告基因质粒和KLF6或Spl的真核表达质粒则荧光素酶活性上升，差异具有统计学意义（P〈0．01）。凝胶迁移阻滞和染色质免疫共沉淀结果显示，转录因子KLF6和Spl与该区域特定序列存在相互作用。免疫共沉淀结果验证转录因子KLF6与Spl之间存在相互作用。荧光定量PCR结果显示前列腺癌细胞低转移亚系PC．3M-21M中TMSG-1和野生型KLF6mRNA水平均高于高转移亚系PC．3M-1E8（P〈0．05，P〈0．01），同样肺巨细胞癌低转移亚系PG．LH7中TMSG-1和野生型KLF6mRNA水平均高于高转移亚系PG-BEl（均P〈0．01）。PC-3M-284细胞转染KLF6真核表达质粒后检测到TMSG-1蛋白的增加和细胞侵袭能力的下降。结论前列腺癌细胞中转录因子KLF6与Spl共同作用促进肿瘤转移抑制相关基因
- 龚苗子由江峰裴斐崔湘霖李刚郑杰
- 关键词：肿瘤转移转录基因肿瘤抑制细胞系肿瘤
- 鼠p53 172位点不同结构的minigene四环素负调控表达模式对肺癌细胞体外生长的影响被引量：5
- 2000年
- 目的 利用四环素负调控表达载体诱导表达鼠野生型p5 3、假野生突变型p5 3和突变型p5 3(172位点氨基酸分别是精氨酸、亮氨酸和组氨酸 ) ,比较一个位点不同DNA结构的p5 3minigene对细胞生长的影响。方法 通过基因重组构建四环素负调控表达的小鼠上述 3种p5 3minigene真核表达载体 ,由LipofectAMINE介导转染p5 3突变的PG细胞 ,嘌呤霉素筛选得到稳定克隆 ,利用四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术、蛋白质免疫印迹等方法比较 3种p5 3对细胞体外生长的影响。结果 野生型和假野生突变型p5 3可以导致细胞生长变慢、细胞周期阻滞、p2 1表达增高 ,突变型则无以上效应。结论 野生型和假野生突变型p5 3具有抑制细胞生长引起周期阻滞的功能 ,突变型p5 3则丧失了野生型p5 3的抑瘤功能 ;p5 3基因的某些突变 (如鼠 172位点精氨酸→亮氨酸 )
- 马怡红吴秉铨谢建武由江峰柳剑英崔湘霖王洁良惠培
- 关键词：肺肿瘤四环素负调控
- G3BP单克隆抗体制备及G3BP在肿瘤组织中表达的检测被引量：18
- 2005年
- 目的 为了研究G3BP(Ras- GAPSH3- bindingprotein)的功能及作用机制,采用原核表达G3BP蛋白诱导免疫,制备抗G3BP单克隆抗体,并检测G3BP在临床常见肿瘤中的表达情况。方法 采用原核表达载体pGEX- 5X1,通过IPTG诱导,使用大肠杆菌BL21,高质量表达GST -G3BP融合蛋白。将纯化后的原核表达蛋白注射BALB/c小鼠诱导产生免疫应答,采用经典杂交瘤技术制备单克隆抗体,并应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白免疫印迹和免疫组织化学染色ABC法进行抗体鉴定和肿瘤检测。结果 筛选出分泌抗G3BP抗体的单克隆杂交瘤细胞,免疫球蛋白亚类鉴定为IgG1,蛋白免疫印迹及抗原竞争抑制实验表明该抗体是特异性抗G3BP抗体。石蜡切片免疫组织化学法检测临床标本,在肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌等临床肿瘤活检标本中检出G3BP表达明显增高。在乳腺癌临床组织标本中,G3BP表达水平与c -erbB2表达正相关,与淋巴结转移正相关。结论 成功制备了抗人G3BP单克隆抗体,所得到的特异性G3BP单克隆抗体能够应用于ELISA、Western蛋白免疫印迹以及免疫组织化学染色对不同样本的G3BP表达水平进行检测。G3BP在肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤中表达明显增高。G3BP有可能作为肿瘤标志物辅助对乳腺癌预后的判断。
- 宁钧宇由江峰裴斐王洁良崔湘霖郑杰
- 关键词：G3BP单克隆抗体G3BP肿瘤组织基因表达免疫应答
- 人肿瘤转移抑制基因TMSG-1单克隆抗体的制备、鉴定及在肿瘤检测中的应用被引量：23
- 2005年
- 目的 明确人肿瘤转移抑制基因TMSG- 1蛋白分子量大小和细胞定位,制备和鉴定TMSG- 1单克隆抗体,并探讨其在临床肿瘤标本检测的价值。方法 采用多肽固相合成法 (Fmoc法 )合成 15肽TMSG -1抗原片段,并与匙孔槭血蓝蛋白 (mcKLH)偶联,免疫BALB/C小鼠,采用细胞融合、ELISA法检测和快速有限稀释法筛选和制备单克隆抗体,并应用Western印迹和免疫组织化学ABC法染色进行抗体鉴定和肿瘤检测。结果 筛选出抗TMSG- 1抗体的单克隆杂交瘤细胞系C8,免疫球蛋白亚类测定为IgM。半抗原竞争抑制实验证实该抗体是特异的抗TMSG- 1抗体。Western印迹显示不转移癌细胞亚系 2B4和LH7有明显的相对分子质量为 45 .000蛋白条带,而高转移亚系 1E8和BE1则条带很弱。细胞免疫组织化学染色显示 2B4和LH7强阳性,为细胞膜和细胞质着色;而 1E8和BE1则为阴性。石蜡切片ABC法检测 52例乳腺癌和 41例结肠癌组织中TMSG- 1蛋白表达发现:未转移的癌组织多为中度阳性或强阳性,中度以上阳性率分别为 36% (乳腺癌 )和 52. 4% (结肠癌 );而转移的癌组织多为弱阳性或阴性, 中度以上阳性率分别为 7 .4% (乳腺癌 )和 35% (结肠癌 ),统计学分析表明TMSG 1在未转移癌组织中的表达显著高于转移性癌组织 (P<0 .05)。结论 成功制备了抗人肿瘤转移抑制基?
- 裴斐由江峰宁钧宇杨京平王玉萍韩志惠王洁良崔湘霖杨邵敏郑杰
- 关键词：乳腺肿瘤结肠肿瘤肿瘤转移单克隆抗体
