孙鲁宁
- 作品数：32 被引量：94H指数：4
- 供职机构：中国医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金美国中华医学基金辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 我国粘多糖贮积症IH型患者α-L艾杜糖苷酶基因的一种同义突变被引量：1
- 2002年
- 目的 :探讨我国粘多糖贮积症IH型 (MPS -IH)患者α -L艾杜糖苷酶 (IDUA)基因的突变类型。方法 :采用荧光分光光度计检测临床疑似MPS患者及其家属白细胞中IDUA活性 ;对IDUA活性为零的患者及其家属扩增其IDUA基因外显子VII并对其进行单链构象多态 (SSCP)分析 ;根据SSCP结果进行基因序列分析。结果 :酶学检查发现 10例MPS -IH型患者 ,其白细胞中IDUA活性均为 0 ;SSCP分析发现在这 10个MPS -IH家系中有 7个家系出现同一种泳动变位 ;基因序列分析结果显示这 7个MPS -IH家系均出现一种同义突变 ,该突变在正常人群中未检测到。结论 :我国MPS -IH型患者IDUA基因外显子VII出现一种高发的同义突变。
- 孙鲁宁徐岩董贵章张海鹏
- 关键词：突变遗传性疾病染色体病
- 靶向TNF-α基因shRNA干扰片段的筛选和重组体的构建
- 2009年
- 本研究利用RNA干扰技术,筛选出可以高效、特异性抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的小发夹状RNA(shRNA)片段,设计并构建重组质粒,进行序列分析,为探索TNF-α相关疾病的基因治疗提供新途径。取原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,置于15%DMEM中,调细胞浓度为2×107/L,接种于6孔板,3ml/well;细胞用脂多糖(LPS)激活,ELISA法测不同时间培养上清中TNF-α的浓度;将针对TNF-α基因的5段shRNA干扰片段的表达框经PCR扩增、纯化后,与转染试剂混合转染入巨噬细胞,细胞用LPS激活24小时后用ELISA法测培养上清中TNF-α的浓度,RT-PCR法测细胞TNF-αmRNA的表达;将最有效抑制TNF-α表达的干扰片段插入质粒载体,转化E.coliDH5α感受态菌株,提取质粒,进行测序分析。结果表明:LPS刺激巨噬细胞24小时后,细胞分泌TNF-α达高峰;转染了干扰序列1的细胞培养上清中TNF-α浓度与对照组相比下降最明显(p<0.05),达59.46%,TNF-αmRNA的表达被抑制了61.2%;将干扰序列1DNA序列克隆到载体上,经测序鉴定确实为所需序列。结论:成功筛选出靶向TNF-α基因的shRNA干扰片段并构建重组质粒,可进一步利用克隆所得到的shRNA干扰TNF-αmRNA的表达,为TNF-α相关疾病的基因治疗提供新手段。
- 宋晓宇郑宁宁孙鲁宁张海鹏
- 关键词：肿瘤坏死因子-ΑRNA干扰
- 低氧培养小鼠肝细胞膜蛋白的蛋白质组学研究被引量：2
- 2011年
- 目的:采用蛋白质组学方法研究低氧条件下培养小鼠肝细胞膜蛋白表达的变化情况并探讨其病理生理学意义。方法:直接消化法分离C57BL/6小鼠肝细胞,于低氧条件下(5%CO2,4.5 mg/L O2)培养8 h后提取膜蛋白,然后采用双向电泳法分离差异表达的蛋白,凝胶银染后切取差异蛋白点进行MALDI-TOF质谱检测,对获取的数据采用Mascot软件在NCBInr数据库内检索,并采用Western blottng方法验证差异蛋白的表达。结果:发现低氧组小鼠肝细胞膜蛋白图谱中有28个蛋白点表达量与对照组有显著差异(P<0.05),根据数据库检索结果,鉴定了低氧时低表达的膜蛋白9个和低氧时高表达的膜蛋白7个。Western blotting验证结果与蛋白质组学分析一致。结论:低氧时,抑素、细胞色素b-c1复合体亚单位1和血红素结合蛋白p22HBP可能在细胞感受外界环境的氧变化及随后的细胞内低氧信号传递的过程中起到了非常重要的作用。
- 孙鲁宁张静萍孙娇张海鹏
- 关键词：低氧膜蛋白质蛋白质组
- 粘多糖贮积症Ⅰ型的分子遗传学研究进展被引量：1
- 2001年
- 粘多糖贮积症 型 (MPS- )是由于溶酶体内α- L艾杜糖苷酶 (IDUA )缺乏而引起的一种常染色体隐性遗传病。IDUA基因定位于 4p16 .3,长约 19kb,含 14个外显子。迄今发现的 IDUA基因突变达 5 1种。突变在不同种族 ,不同民族的患者中发生率不同。严重型突变基因的纯合子引起 MPS- H,轻型突变基因的纯合子引起 MPS- S,严重型突变基因与轻型突变基因的杂合子引起 MPS- H/
- 孙鲁宁张海鹏董贵章
- 关键词：分子遗传学基因突变
- 雷帕霉素抑制小鼠血管瘤血管内皮细胞生长、增殖、迁移及血管瘤形成
- 常规细胞培养建立稳定的小鼠血管瘤血管内皮细胞(EOMA)系;用WST-1法检测细胞增殖;用Transwell法检测细胞迁移能力;蛋白免疫印迹法检测AKT/mTOR信号通路各蛋白激酶的表达情况;裸鼠侧腹皮下注射EOMA细胞...
- 郑宁宁孙鲁宁张海鹏
- 关键词：血管瘤雷帕霉素血管内皮细胞生理机制
- 文献传递
- 高压氧对异基因骨髓移植后aGVHD影响的实验研究(英文)被引量：5
- 2008年
- 本研究探讨高压氧(HBO)在抗异基因骨髓移植后aGVHD和提高生存率中的作用及机制。给受致死量照射的C57BL/6受鼠注入供鼠BALB/c骨髓与脾淋巴细胞的混合液,分别给与高压氧、环孢素A、氨甲蝶呤处理。用流式细胞仪检测脾T细胞及其亚群和黏附分子CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD11a+、CD4+CD18+、CD8+CD11a+、CD8+CD18+的表达,用ELISA和RT-PCR法检测细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和TNFα的表达。结果表明:HBO组小鼠11天的活存率明显高于异基因移植组及CsA+MTX组;HBO和CsA+MTX可明显降低脾组织中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD11a+、CD4+CD18+、CD8+CD11a+、CD8+CD18+的表达(p<0.05);HBO组小鼠血清IL-2和TNFα的浓度及脾组织中IL-2和TNFα mRNA的含量都低于异基因骨髓移植组(p<0.05),但高于CsA+MTX组;HBO组小鼠脾组织中IL-4和IL-10 mRNA的含量显著高于异基因骨髓移植组和CsA+MTX组(p<0.05)。结论:高压氧在对抗aGVHD和提高活存率方面优于环孢素A和氨甲蝶呤,其抗aGVHD的作用机制与调节促炎/抑炎细胞因子的分泌和黏附分子的表达及抑制T淋巴细胞作用有关。
- 宋晓宇孙鲁宁郑宁宁张海鹏
- 关键词：高压氧异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病
- 线粒体核糖体蛋白与人类线粒体疾病被引量：4
- 2013年
- 哺乳动物线粒体核糖体(mitochondrial ribosome,mitoribosome)在漫长的进化阶段经过一系列的结构重组,rRNA比例降低,新增了部分线粒体核糖体蛋白(mitochondrial ribosomal proteins,MRPs),成为蛋白含量最丰富的核糖体。所有MRPs均为核基因编码,在细胞质中合成,再转运到线粒体,与线粒体基因(mitochondrial DNA,mtDNA)编码的两种rRNA结合。mtDNA除编码tRNA和rRNA外,还编码组成线粒体呼吸链复合体的13种蛋白质。由于线粒体核糖体负责翻译这13种蛋白,MRPs和其他翻译工具的突变和缺陷可造成线粒体的相关疾病。
- 赵一婷孙鲁宁
- 关键词：线粒体疾病
- MRPL48基因在代谢综合征诊断中的意义探讨
- 2011年
- 目的通过观察RNA干扰线粒体核糖体大亚基蛋白48(MRPL48)基因表达对Hela细胞线粒体能量代谢的影响,探讨MRPL48基因在代谢综合征诊断中的意义。方法将MRPL48特异性shRNA片段转入体外培养的Hela细胞,48 h后采用Western blotting方法确认shRNA的干扰效果;用JC-1染色法观察线粒体膜电位的变化。结果 MRPL48 shRNA转染细胞后,能够有效抑制Hela细胞MRPL48基因的表达;JC-1染色显示,RNA干扰组Hela细胞较对照组绿色荧光颗粒明显增加,提示线粒体膜电位下降。结论 MRPL48是维持线粒体正常功能的关键蛋白质,该蛋白在细胞代谢过程中起到了非常重要的作用,提示MRPL48可作为代谢综合征临床诊治的新靶点。
- 孙鲁宁张宁宋晓宇郑宁宁张海鹏
- 关键词：RNA干扰代谢综合征
- 辽宁地区人群中α-L艾杜糖醛酸酶基因多态性研究
- 2005年
- 目的探讨辽宁地区粘多糖贮积症Ⅰ型(MPS-Ⅰ)患者及正常人群中α-L艾杜糖醛酸酶(IDUA)基因的多态性分布情况。方法采用PCR、RFLP和DNA测序的方法检测1999年10月至2002年2月辽宁地区20例MPS-Ⅰ型患儿以及120名正常人群中IDUA基因的多态性分布情况。结果发现辽宁地区MPS-Ⅰ型患儿及正常人群中IDUA基因存在4种多态性位点R105Q、L118、A314和A361T;位于外显子Ⅲ的多态性位点L118在MPS-Ⅰ型患者中的频率为45%,而在正常人群中的频率为18%。结论辽宁地区人群中IDUA基因存在4种多态性位点R105Q、L118、A314和A361T,其中L118在MPS-Ⅰ型患儿和正常人群中出现的频率具有明显的差异。
- 孙鲁宁董理鸣董贵章张海鹏
- 关键词：基因多态性
- 在七年制学生中开展病理生理学双语PBL教学的实践与探讨
- 孙鲁宁张海鹏赵成海
