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家蝇幼虫抗菌肽defensin对食管癌细胞增殖、侵袭迁移的抑制作用研究: 目的：　　明确家蝇防御素成熟蛋白 MD对食管癌细胞的抑制作用以及其可能的作用机制。　　方法：　　1.将成功构建的 pGEX-6P-1/MD表达载体转化入大肠杆菌感受态细胞 BL21， IPTG诱导 MD蛋白表达，纯化目的...; 原发家; 关键词：食管癌细胞增殖抑瘤作用; 文献传递

家蝇抗菌肽defensin基因的克隆、原核表达纯化及抑菌、抑肿瘤活性鉴定被引量：1: 2012年; 为研究家蝇防御素融合蛋白对肿瘤细胞K562有抑制作用，在GenBank中检索家蝇defensin基因，设计特异引物，在家蝇幼虫组织中提取RNA，并通过PCR扩增defensin基因成熟肽部分（Maturedefensin，MD），将该基因与原核质粒表达载体pGEX．6P-1进行重组，构建家蝇抗菌肽重组蛋白pGEX-6P-1／MD。通过双酶切鉴定证明目的片段已稳定融合到载体pGEX-6P-1中并将其转化至BL21（DE3）感受态细胞中，经25℃IPTG诱导在大肠杆菌E．coliDH5u中表达。用GST—Sefinose亲和层析纯化蛋白，15％SDS—PAGE分析鉴定，可见相对分子量为约30kDa的特异性目的条带。运用琼脂孔穴平板扩散法测定表达产物的活性，得知纯化后的重组融合蛋白pGEX-6P-1／MD对大肠杆菌生长有一定的抑制作用，并首次证明家蝇防御素融合蛋白pGEX．6P．1／MD对肿瘤细胞K562有抑制作用。家蝇抗菌肽融合蛋白pGEX-6P-1／MD被成功克隆和表达，证明纯化融合蛋白pGEX-6P-1／MD对肿瘤细胞K562有抑制和损伤作用，这为以后研发蝇防御素抗菌肽药物提供了依据。; 焦莉萍杨敏侯养全赵瑞君原发家杜斌王文建; 关键词：DEFENSIN 抗菌肽原核表达

食管癌相关基因2抑制细胞侵袭迁移的机制研究被引量：1: 2015年; 目的本研究旨在明确食管癌相关基因(ECRG)2基因抑制肿瘤细胞侵袭迁移的分子机制。方法利用HT1080-Tet-On可诱导表达系统,采用基因敲除技术、免疫共沉淀、体外Matrigel transwell实验等技术,深入研究ECRG2基因抑制肿瘤细胞侵袭迁移的分子机制。结果 1敲除HT1080-ECRG2-Tet-On可诱导表达细胞株中的ECRG2后,加入多西环素诱导ECRG2蛋白高度表达,撤除多西环素后ECRG2蛋白表达降低;2HT1080-ECRG2-Tet-On-3′UTR-si可诱导细胞株中尿激酶型纤溶酶原激活剂(u PA)分解尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(u PAR)产生分解后的u PAR(D2D3);而加入多西环素诱导ECRG2表达后,ECRG2通过与u PA/u PAR直接结合,抑制u PA对u PAR的分解作用;3HT1080-ECRG2-Tet-On-3′UTR-si可诱导细胞株中u PAR/甲酰肽样受体(FPRL1)的结合作用显著增强,而添加多西环素诱导ECRG2表达细胞中u PAR/FPRL1的结合作用被完全阻断,撤除多西环素后结合作用又恢复;4敲除HT1080-ECRG2-Tet-On-3′UTR-si可诱导细胞株中FPRL1,细胞的侵袭迁移能力降低。结论 ECRG2通过u PA/u PAR/FPRL1通路抑制肿瘤细胞侵袭迁移。; 原发家毕炀辉杜斌王文健聂守民李彦红赵瑞君刘静; 关键词：肿瘤浸润癌基因 ECRG2 UPAR

抗菌肽对肿瘤细胞的作用机制及应用前景被引量：2: 2015年; 抗菌肽（antibacterial peptide）是具有抗菌活性的一类多肽，广泛存在于生物界。它是宿主免疫防御系统的重要成分，具有广谱杀菌、相对分子量较小、热稳定性及水溶性好等优点，更重要的是它可以选择性作用于肿瘤细胞，对正常细胞损伤小，毒性小，不易产生耐药性．有望开发成为新一代具有广阔应用前景的抗癌药物。该文综合近年来抗菌肽的研究，概述了抗菌肽对肿瘤细胞的作用机制及其应用前景。; 聂守民赵瑞君杜斌王文建原发家; 关键词：抗菌肽肿瘤

家蝇幼虫抗菌肽粗提物与8种纯化物对SUP-B15细胞增殖抑制和诱导的凋亡作用被引量：2: 2015年; 将家蝇三龄幼虫抗菌肽粗提物利用反相高效液相色谱仪（RP—HPLC）进行分离纯化，得到8种与对照组有差异的蛋白分别命名为I1、12、13、14、G1、G2、G3、G4组。通过CCK-8试剂盒检测发现，其中有4种蛋白及粗提物（E0组）对sup-b15细胞有增殖抑制作用，生存率均值分别为11：0．714、12：0．785、14：0．641、G2：0．686、E0：0．561。采用流式细胞仪检测其诱导凋亡的效果，其凋亡率均值分别为11：16．73、12：9．79、14：18．60、G2：11．85、E0：35．94。对比发现，粗提物（E0）对sup—b15细胞的抑制率明显高于纯化物，证明粗提物较纯化物对肿瘤细胞抑杀作用更为明显，间接的说明各种纯化蛋白之间具有某些协同作用。; 王文健赵瑞君李珀杜斌原发家聂守民程璟侠李彦红; 关键词：家蝇抗菌肽增殖抑制诱导凋亡

家蝇抗菌肽对FBL-3红白血病原代细胞增殖影响浓度的探索被引量：2: 2015年; 本文初步探究不同浓度家蝇幼虫抗菌肽对FBL-3红白血病原代细胞增殖的影响。采用诱导、研磨、离心、C18固相萃取等方法制备家蝇幼虫抗菌肽混合物，然后处理传代期的FBL-3细胞，调整浓度为2．25×10^6／mL并通过尾静脉注射C57BL／6小鼠，建立红白血病动物模型。待肿瘤生长较大时，处死并剥离肿瘤，再通过研磨、裂红液裂解、获取原代肿瘤细胞并培养。将抗菌肽混合物调整为不同浓度作用于传代期的FBL-3原代细胞，之后经倒置显微镜观察照相，台盼蓝染色试验计算死亡率、CCK-8试剂盒做细胞毒性检测。结果显示抗菌肽混合物浓度为250—350μg／mL作用FBL-3原代细胞时，细胞碎片大量增多，死亡率增高，细胞毒性变大。初步证明了抗菌肽混合物在250～350μg／mL抑制细胞增殖效果明显，在300μg／mL浓度下抑制作用最强，本研究结果可作为动物模型体内实验的参考。; 杜斌赵瑞君程璟侠王文健原发家聂守民李彦红; 关键词：家蝇抗菌肽

家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的增殖、凋亡和周期的影响被引量：4: 2014年; 采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法，分析家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2体外生长增殖与凋亡的影响，用倒置光学显微镜检测defensin对人肝癌细胞HepG2和人正常心肌细胞H9C2生长增殖情况的影响，并采用流式细胞术检测defensin对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响。结果显示，家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的生长有抑制作用，对人正常心肌细胞H9C2无抑制作用。通过显微镜观察HepG2细胞凋亡的形态变化，MTT检测发现defensin对肿瘤细胞的增殖抑制率呈剂量反应关系和时间反应关系。defensin能诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡，并且影响人肝癌细胞HepG2的细胞周期。家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2具有增殖抑制作用及凋亡作用，对正常人心肌细胞H9C2基本无抑制作用。; 程璟侠焦莉萍赵瑞君原发家杜斌王文建; 关键词：家蝇抗菌肽 DEFENSIN 增殖凋亡

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