何正贵
- 作品数：6 被引量：6H指数：1
- 供职机构：华东理工大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程医药卫生更多>>
- 一种共表达葡萄糖淀粉酶和α-淀粉酶的重组毕赤酵母菌株及其构建方法,以及混合酶制剂
- 本发明提供了一种共表达葡萄糖淀粉酶和α-淀粉酶的重组毕赤酵母菌株及其构建方法，以及一种由该重组毕赤酵母菌株制备的混合酶制剂。所述重组毕赤酵母菌株同时含有来自微小毛霉菌的葡萄糖淀粉酶基因和α-淀粉酶基因，其基因序列分别如S...
- 魏东芝高蓓何正贵
- 文献传递
- 一种耐热葡萄糖淀粉酶及其编码基因与应用
- 本发明提供的耐热葡萄糖淀粉酶是如下（a）或（b）的蛋白质：（a）具有SEQ ID NO.22所示氨基酸序列；（b）具有与SEQ ID NO.22所示氨基酸序列至少70%同源性的序列。本发明提供的编码基因是如下（1）-（3...
- 高蓓魏东芝何正贵
- Rhizomucor pusillus耐热淀粉酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
- 淀粉酶是指能够水解淀粉及其相关化合物的α-1,4糖苷键或者α-1,6糖苷键,生成寡聚糖或者单糖的一类酶。淀粉酶广泛应用于淀粉糖生产、面包烘焙等食品工业,酒精酿造等发酵工业,以及洗涤剂、纺织、制药等工业。当前应用最广泛淀粉...
- 何正贵
- 关键词：微小毛霉毕赤酵母共表达
- 文献传递
- 一种耐热葡萄糖淀粉酶及其编码基因与应用
- 本发明提供的耐热葡萄糖淀粉酶是如下（a）或（b）的蛋白质：（a）具有SEQ ID NO.22所示氨基酸序列；（b）具有与SEQ ID NO.22所示氨基酸序列至少70%同源性的序列。本发明提供的编码基因是如下（1）-（3...
- 高蓓魏东芝何正贵
- 文献传递
- 一种共表达葡萄糖淀粉酶和α-淀粉酶的重组毕赤酵母菌株及其构建方法,以及混合酶制剂
- 本发明提供了一种共表达葡萄糖淀粉酶和α-淀粉酶的重组毕赤酵母菌株及其构建方法，以及一种由该重组毕赤酵母菌株制备的混合酶制剂。所述重组毕赤酵母菌株同时含有来自微小毛霉菌的葡萄糖淀粉酶基因和α-淀粉酶基因，其基因序列分别如S...
- 魏东芝高蓓何正贵
- 文献传递
- 微小根毛霉耐热α-淀粉酶基因的克隆与高效表达(英文)被引量：5
- 2014年
- 【目的】开发具有高表达活力的耐热耐酸新型真菌α-淀粉酶,研究其酶学性质和催化活性,探讨其潜在工业应用潜力。【方法】采用RT-PCR从嗜热真菌微小根毛霉（Rhizomucor pusillus）中克隆耐热α-淀粉酶基因,并命名为RpAmy。以质粒pPIC9K为表达载体,将α-淀粉酶基因（RpAmy）转入毕赤酵母（Pichia pastoris）表达宿主KM71,进行异源表达,并测定动力学参数和酶学性质,分析水解淀粉的产物。【结果】克隆得到嗜热真菌微小根毛霉（Rhizomucor pusillus）耐热α-淀粉酶基因,其开放阅读框全长1416 bp,编码471个氨基酸,与米根毛霉α-淀粉酶的氨基酸序列相似性最高（56.0%）。RpAmy在毕赤酵母（Pichia pastoris）KM71中表达,最高酶活达到32100.0 U/mL,蛋白表达量为1.5 mg/mL;测定纯化后RpAmy比活力、Km和Vmax,分别为6745.9 U/mg、2.26 mg/mL、0.2875 mg/mL·min;最适pH和最适温度分别为pH 4.0、70℃;具有较宽的pH耐受性（4.0~9.0）和较高的温度耐受性（60℃）;水解可溶性淀粉产物主要为麦芽糖（69.0%,w/w）和葡萄糖（22.0%,w/w）。【结论】从微小根毛霉（Rhizomucor pusillus）中克隆得到α-淀粉酶基因（RpAmy）,其可在毕赤酵母（Pichia pastoris）KM71中高效异源表达并得到α-淀粉酶RpAmy。该酶具有较好的耐酸耐热性质,并能水解淀粉产生高麦芽糖含量的糖浆,在工业应用方面具有很大的潜力。
- 何正贵尹燕辰毛佑志周思行潘琪魏东芝高蓓
- 关键词：Α-淀粉酶麦芽糖毕赤酵母
