丁园 作品数:8 被引量:21 H指数:3 供职机构: 中国人民解放军第一七四医院 更多>> 发文基金: 厦门市科技计划项目 南京军区医学科技创新课题 福建省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
NRP-1b1/b2单克隆抗体对裸鼠胃癌移植瘤生长的影响 被引量:2 2016年 目的:探讨神经纤毛蛋白1(neuropilin-1,NRP-1)在胃癌细胞BGC823中的表达情况,并观察自主研发的抗NRP-1 b1/b2单克隆抗体(NRP-1 mAb)对裸鼠胃癌移植瘤生长的影响。方法:基于实验室前期已成功制备出纯度和浓度均较高的NRP-1 mAb。利用流式细胞术检测该抗体亲和性、细胞免疫荧光定位检测NRP-1的分布及NRP-1 mAb特异性。建立胃癌移植瘤裸鼠模型,向移植瘤中注射不同浓度的NRP-1mAb,研究抗体对胃癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响。2周后根据瘤体大小得出抑瘤率。最后免疫组化分析癌组织内血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果:胃癌细胞BGC-823上存在NRP-1,且主要分布在细胞膜上,能与自制的NRP-1 mAb有效结合。通过动物实验,NRP-1 mAb能有效抑制移植瘤的生长,高浓度抗体较低浓度对移植瘤抑制作用更明显,NRP-1 mAb治疗组中VEGF表达较空白组低(P<0.01)。结论:胃癌细胞BGC-823细胞膜上表达NRP-1,NRP-1 mAb能特异性结合胃癌细胞上NRP-1蛋白,NRP-1 mAb能抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长,且与浓度呈正相关,可能与下调VEGF表达有关。 丁园 周娟 陈玉强 颜江华关键词:NRP-1 单克隆抗体 胃癌 裸鼠移植瘤 NRP-1mAb对胃癌细胞BGC-823增殖的影响 2017年 目的观察自主研发的抗NRP-1b1/b2IgG单克隆抗体(NRP-1mAb)对胃癌BGC-823细胞生长的影响,并初步探讨可能的作用机制。方法实验室制备NRP-1mAb,采用SDS-PAGE检测纯度。采用0、25、100、200、400μg/ml NRP-1mAb培养胃癌BGC-823细胞,光学显微镜下观察细胞形态学变化;采用MTT法、集落形成实验、流式细胞术观察胃癌细胞BGC-823的增殖、集落形成和凋亡的情况;Western blotting法检测NRP-1mAb作用后Akt、p38、ERK、JNK信号蛋白磷酸化情况。结果SDS-PAGE检测显示,NRP-1mAb的纯度在95%以上。光学显微镜观察显示,NRP-1mAb作用后,BGC-823细胞形态呈凋亡改变。MTT实验显示,NRP-1mAb抑制BGC-823细胞的增殖作用呈浓度和时间依赖性(P<0.01)。集落形成实验显示,不同浓度NRP-1mAb均能显著抑制BGC-823细胞的集落形成,其抑制率呈浓度依赖性(P<0.01)。流式细胞术检测显示,不同浓度NRP-1mAb均明显促进BGC-823细胞凋亡,且大部分集中在早期凋亡。Western blotting检测显示,BGC-823细胞的Akt磷酸化受到抑制,ERK、p38、JNK的磷酸化水平无明显变化。结论NRP-1mAb能抑制胃癌细胞BGC-823的生长、促进凋亡,可能与抑制Akt磷酸化有关。 丁园 周娟 陈玉强 颜江华 彭丽贞关键词:胃癌 增殖 蛋白磷酸化 负载胃癌特异性抗原的DC疫苗相关实验研究及临床应用 丁园 陈玉强 许英艺 邱国钦 洪节 中国是胃癌高发地区,每年新发病例约占全球42%。早诊率低、转移率高、治疗手段局限、死亡率高。免疫治疗已被视为肿瘤治疗的第四大疗法,其中过继性细胞免疫治疗尤显个体化治疗特点。近年来国内外开展了树突状细胞(DCs)疫苗在部分...关键词:关键词:胃癌 免疫治疗 肿瘤治疗 幽门螺杆菌感染对晚期胃癌自体DC-CIK维持治疗的影响 被引量:5 2015年 目的:对比幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染阴性和阳性的晚期胃癌患者接受自体树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤(dendritic cells-cytokine induced killer,DC-CIK)细胞维持治疗的疗效差异。方法:收集2010年6月至2012年6月中国人民解放军第174医院肿瘤中心收治的72例晚期胃癌患者,年龄29~90岁,中位年龄56岁,通过胃镜检查进行胃癌确诊并检测Hp,分为Hp阳性组(45例)及Hp阴性组(27例),在接受手术或/和放化疗后,接受2疗程自体DC-CIK维持治疗,比较两组外周血培养的DC分化成熟情况及临床疗效差异。结果:两组DC成熟过程形态变化无差异;Hp阳性组DC表面分子CD83、CD86表达显著高于Hp阴性组(P<0.01),两组间HIA-DR表达无明显差异(P>0.05)。Hp阳性组治疗后生活质量评分(KPS)、外周血T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)比例较治疗前显著提高(P<0.05),肿瘤标志物(CEA、CA199、CA724)表达较治疗前下降(P<0.05)。Hp阴性组治疗后肿瘤标志物表达、外周血T淋巴细胞比例较治疗前显著降低(P<0.05),KPS评分较治疗前无明显变化(P>0.05)。Hp阳性组治疗后KPS评分、CEA和CA199表达以及CD3+和CD4+T细胞数量等的改善均优于Hp阴性组(P<0.05),但瘤体稳定率、CA724、CD8+T细胞比例无显著差异(P>0.05)。共随访2年,阳性组患者中位生存期为12.64个月,长于阴性组的11.42个月(P<0.05)。结论:携带Hp抗原信息的DC疫苗协同CIK治疗能够提高Hp感染的晚期胃癌患者的自身免疫功能,达到稳定瘤体、改善生活质量、延长生存期的目的。 丁园 陈玉强 李巧珍 米彦军 颜江华 叶燕华关键词:DC-CIK 幽门螺杆菌 胃癌 DC-CIK与rmhTNF腹腔灌注治疗晚期胃癌恶性腹水的临床对照研究 被引量:8 2015年 目的 探讨重组人肿瘤坏死因子(Recombinant mutant human tumor necrosis factor,rmhTNF)腹腔灌注及自体树突状细胞(Dendritic cell,DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine induced killer,CIK)腹腔灌注治疗晚期胃癌恶性腹腔积液的临床疗效差异。方法 将48例确诊的晚期胃癌合并腹水患者,随机分为DC-CIK组、rmhTNF组。治疗后1个月观察两组不良反应发生情况,评估治疗后患者临床受益反应(CBR)、腹水控制率(RR)、免疫指标、肿瘤标志物(CEA、CA199、CA724)水平等疗效,观察至疾病进展时间(TTP)。结果 DC-CIK组RR、CBR分别为66.67%、83.30%,rmhTNF组RR、CBR分别为58.33%、75.00%,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者CA724水平均较治疗前降低,差异有统计学意义(P=0.015);治疗前后两组间各肿瘤标志物均无显著差异(P>0.05)。DC-CIK组治疗后患者外周血CD3+、CD4+、NK细胞较治疗前明显增多(P<0.05),CD8+细胞数量无明显变化(P=0.55)。rmhTNF组治疗后NK细胞较治疗前明显增多(P=0.03),T淋巴细胞亚群无明显变化(P>0.05)。随访1年,DC-CIK组患者TTP为7.1个月,rmhTNF组为5.8个月,差异有统计学意义(P=0.02)。结论 DC-CIK及rmhTNF腹腔灌注两种治疗方案均能有效控制恶性腹水,自体DC-CIK治疗在增强机体特异性免疫抗肿瘤方面更显优势。 丁园 陈玉强 李月 米彦军 叶燕华 李强关键词:晚期胃癌 腹水 重组人血管内皮抑素和长春瑞滨对人肺腺癌裸鼠移植瘤放射增敏作用的实验研究 2014年 目的探讨重组人血管内皮抑素(Endostar)和长春瑞滨(Vinorelbine)单独或联合应用对人肺腺癌裸鼠移植瘤的放射增敏作用。方法建立人肺腺癌裸鼠转移瘤模型。荷瘤裸鼠随机分为6组:对照组、单照组、重组人血管内皮抑素组、长春瑞滨组、重组人血管内皮抑素和长春瑞滨联合照射组、重组人血管内皮抑素联合照射组。采用6MV-X线进行照射。照射剂量为10 Gy。隔日测量移植瘤的最大径及垂直径。计算肿瘤体积及延缓天数等。获得增敏系数(EF)。利用增敏系数评价重组人血管内皮抑素和长春瑞滨的放射增敏作用。结果重组人血管内皮抑素给药第1天照射。重组人血管内皮抑素EF值为1.1。重组人血管内皮抑素和长春瑞滨联合治疗的增敏系数为0.1;第7天照射。重组人血管内皮抑素的EF值为2。重组人血管内皮抑素和长春瑞滨联合治疗的增敏系数为1。结论重组人血管内皮抑素联合长春瑞滨均不具有放射增敏作用。机制有待进一步研究。 程小峰 张蓓蓓 高春玲 叶性景 张雅雅 丁园 章志勇关键词:肺腺癌 拮抗作用 放射增敏 幽门螺杆菌感染对胃癌患者外周血MODCs功能的影响 被引量:4 2013年 分析Hp阳性和Hp阴性的胃癌患者外周血单核细胞来源树突状细胞(MODCs)功能的差异性及其临床意义。方法:用尿素14C呼气试验对解放军第一七四医院2011年1月至2012年10月收治的84例胃癌患者进行Hp感染状态鉴定,分别采集Hp阳性和阴性胃癌患者外周血,分离外周血单个核细胞,采用经典方法(rhGM-CSF、rhIL-4联合rhTNF-α)诱导产生DCs,采用流式细胞仪检测DCs表型,采用LDH释放法检测DCs致敏T细胞对胃癌细胞的毒性杀伤作用,采用ELISA方法检测细胞因子IL-12、IFN-γ的分泌水平。结果:两组MoDCs成熟过程形态变化无差异,Hp阳性组MoDCs表面标记分子CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR平均表达百分率均高于Hp阴性组,其中CD80、CD83、CD86的表达水平差异有统计学意义,CD1a、HLA-DR差异无统计学意义。Hp阳性组DCs致敏T淋巴细胞对胃癌细胞杀伤率和IL-12、IFN-γ的分泌水平均高于Hp阴性组(P<0.05)。结论:Hp感染状态不影响胃癌患者外周血MoDCs成熟过程形态变化,Hp感染的胃癌患者MoDCs成熟和活化水平更高。 李巧珍 陈玉强 颜江华 丁园 王勇军 王生育 叶燕华 许英艺 何蕙香关键词:树突状细胞 幽门螺杆菌 胃癌 SOCS1拮抗物pJAK2多肽可增强树突状细胞的抗肿瘤作用 被引量:2 2013年 目的:探讨细胞因子信号转导抑制因子-1(suppressors of cytokine signaling1,SOCS1)拮抗物pJAK2多肽(氨基酸序列号为1001-1013)参与树突状细胞(dendritic cells,DCs)的体外诱导培养后对DCs抗肿瘤作用的影响。方法:采集健康人外周血,离心获得单个核细胞,用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage colony stimulating factor,rhGM-CSF)及重组人白细胞介素-4(recombinant human interleukin-4,rhIL-4)诱导DCs,第5天分为4组:单纯DCs培养(对照)组、抗原负载(Lysate-DCs)组、多肽修饰(pJAK2-DCs)组和抗原与多肽共培养(Lysate+pJAK2-DCs)组,第6天各组加入肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)促成熟。倒置显微镜下观察DCs形态;FCM法检测DCs表型;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)细胞毒实验检测各组细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)对胃癌细胞BGC-823的靶向杀伤作用;ELISA法检测白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)和γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的水平。结果:与未加入诱导剂组相比,各组均成功诱导出成熟DCs,均高表达CD80、CD83、CD86和人类白细胞DR抗原(human leukocyte antigen DR,HLA-DR),但以Lysate+pJAK2-DCs组的表达水平最高。在10:1~30:1的效靶比范围内,CTL杀伤作用与效靶比呈正相关。当效靶比为30:1时,对照组的CTL杀伤率达(19.77±2.34)%,低于其他3组(P<0.01),而Lysate+pJAK2-DCs组较Lysate-DCs组及pJAK2-DCs组都高(P<0.05)。Lysate+pJAK2-DCs组培养上清液中IL-12及IFN-γ的分泌水平明显高于对照组(P<0.01)。结论:SOCS1拮抗物pJAK2多肽(1001-1013)可增强DCs对胃癌细胞的抗原递呈及特异性抗肿瘤作用。 何蕙香 陈玉强 颜江华 丁园 王勇军 王生育 叶燕华 许英艺 李巧珍关键词:细胞因子信号转导蛋白抑制因子 树突状细胞 细胞系 肿瘤