谢勇
- 作品数：13 被引量：61H指数：4
- 供职机构：海南医学院附属新华医院更多>>
- 发文基金：海南省自然科学基金海南省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 表达结核分枝杆菌融合蛋白的DNA疫苗构建及免疫保护被引量：5
- 2006年
- 目的评价构建的结核DNA疫苗pVS3in1免疫的小鼠体外产生细胞因子能力和抵抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的效果。方法将结核菌mtb8.4、Mr38 000和ag85b插入pVAX1载体,构建表达结核菌Mtb8.4-Mr38 000 CTL表位-Ag85B融合蛋白的DNA疫苗pVS3in1。将雌性C57BL/6小鼠分成5组,每组20只,分别用pVS3in1、pVAX1、pIL2S和PBS免疫3次,每隔2周。另一组用BCG(105CFU)皮内免疫1次。每组10只鼠在最后1次免疫后,培养脾细胞,检测上清液细胞因子。另10只用结核菌H37Rv经静脉攻击,2周后取脾、肝和肺培养结核菌并计数。结果pVS3in1组鼠脾细胞培养上清液mIL-2和mIFN-γ含量分别为(379.6±58.2)pg/mL和(529.7±63.7)pg/mL,显著高于3个阴性对照组(P<0.001),与BCG组无显著性差异(P>0.05)。5组的mIL-6和mIL-10无显著性差异。pVS3in1组的脾、肝和肺结核菌载量分别为(17 443.6±3 202.5),(19 047.2±3 395.5)和(14 822.2±2 882.2)CFU/g,低于pVAX1、pIL2S和PBS等3组相应器官的载量(P<0.001),仅脾菌落数显著高于BCG组。结论pVS3in1能够刺激机体产生抗结核菌所需的Th1型免疫应答,诱导小鼠抵抗H37Rv攻击的能力与BCG相当。
- 朱中元王海波谢勇陈英兰郑冰冰张春发张颖
- 关键词：结核DNA疫苗融合蛋白细胞因子免疫保护
- 结核杆菌融合蛋白DNA疫苗构建及免疫保护研究
- 2006年
- 目的:评价结核DNA疫苗免疫鼠产生细胞因子和抵抗结核分枝杆菌攻击的能力。方法:将结核菌Mtb8.4基因和谷胱甘肽S转移酶基因插入pVAX1载体,构建表达Mtb8.4和GST融合蛋白的DNA疫苗pVS8.4G。小鼠分成5组,用pVS8.4G、pVAX1、pIL2S 100μg和PBS 0.1mL各免疫3次,间隔2w。另一组用BCG免疫1次。每组10只鼠在加强后,无菌取脾培养。另外10只小鼠用H37Rv攻击,2w后取脾、肝和肺培养结核菌并计数。结果:pVS8.4G免疫鼠脾细胞培养上清mIL-2和mIFN-γ平均为380.9和422.1pg/mL,显著高于阴性对照组,与BCG组无显著差异。5个组的平均mIL-6和mIL-10无显著差异。pVS8.4G免疫小鼠脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为42 093.2、43 264.1和37 264.8CFU/g,低于pVAX1、pIL2S和PBS组相应器官的载量。结论:DNA疫苗pVS8.4G能刺激产生Th1型免疫应答,免疫鼠抵抗H37Rv攻击的能力增强。
- 朱中元王海波谢勇陈英兰郑冰冰张春发张颖
- 关键词：结核DNA疫苗免疫保护
- 基因芯片技术检测结核分支杆菌耐利福平基因突变的研究被引量：2
- 2008年
- 目的建立基因芯片检测结核分支杆菌耐利福平基因突变,结合基因测序和常规药物敏感性试验进行比较,探讨其实用价值。方法根据结核菌rpoβ基因突变特点,设计不同的寡核苷酸探针,点样制备可检测rpoβ基因突变的芯片,检测利福平(Rifompicin,RFP)株的rpoβ变异情况。结果137株临床分离结核菌,49株耐RFP,占35.8%,平均MIC为179.6±135.0μg/mL。Rpoβ突变率为95.7%(47/49),主要为点突变。突变点依次为531 Ser(TCG)→Leu(TTG)(40.8%)、531 Ser(TCG)→Trp(TGG)(12.2%)、526 His(CAC)→Tyr(TAC)(6.1%)、526 His(CAC)→Asp(GAC)(6.1%)、526 His(CAC)→Asn(AAC)(6.1%)、526 His(CAC)→Pro(CCC)(8.2%)、516Asp(GAC)→Val(GTC)(12.2%)、533Leu(CTG)→Arg(CGG)(4.1%)和513Gln(CAA)→Pro(CCA)(2.1%)。结论本研究建立的检测结核菌rpoβ基因突变的基因芯片技术敏感性高,特异性强,可应用于结核菌耐RFP基因的检测。
- 朱中元王海波谢勇谢萌王莉朱义明郭洁
- 关键词：结核分支杆菌利福平
- 结核分枝杆菌DNA疫苗pVS85B的构建及免疫保护实验研究被引量：2
- 2006年
- 评价构建的结核DNA疫苗pVS85B免疫小鼠后脾细胞体外产生细胞因子和抵抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的能力。利用基因操作技术将结核菌ag85b插入pVAX1载体,构建表达结核菌Ag85B分泌型蛋白的DNA疫苗pVS85B。将雌性C57BL/6小鼠分成5组,每组20只,分别用pVS85B、pVAX1、pIL2S和PBS分别免疫3次,均间隔2周,以相同剂量加强免疫2次。另一组用BCG(105CFU)免疫1次。每组10只鼠在最后一次加强免疫后,无菌取脾培养,检测上清细胞因子。另10只鼠用结核菌H37Rv经静脉攻击,2周后取脾、肝和肺培养结核菌并进行菌落计数。结果是pVS85B免疫组鼠脾淋巴细胞培养上清的mIL-2和mIFN-γ平均含量分别为(311.3±46.2)和(273.6±55.4)pg/ml,显著高于3个阴性对照组(P<0.001),与BCG免疫组无显著性差异(P>0.05)。5个组的平均mIL-6和mIL-10无显著性差异。pVS85B免疫组小鼠的脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为(47 716.6±5 689.0)、(50 113.4±6 532.2)和(51 095.3±2 788.9)CFU/g,分别低于pVAX1、pIL2S和PBS三个阴性对照组的相应器官的结核菌载量(P<0.001)。pVS85B免疫组脾、肝和肺的结核菌载量显著高于BCG免疫对照组。提示,表达结核菌分泌型Ag85B的DNA疫苗pVS85B能够刺激机体产生抗结核菌所需的Th1型免疫应答,免疫鼠获得抵抗H37Rv攻击的能力。
- 刘建兵朱中元王海波谢勇张春发张颖
- 关键词：DNA疫苗结核分泌蛋白细胞免疫免疫保护
- 结核分枝杆菌Mtb8.4DNA疫苗构建及免疫保护研究被引量：4
- 2005年
- 目的评价构建结核菌DNA疫苗pVS84免疫小鼠体外产生细胞因子的能力和抵抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的效果。方法利用基因技术将结核菌Mtb8.4插入pVAXl载体,构建表达结核菌Mtb8.4蛋白(分泌型)的DNA疫苗pVS84。将雌性C57BL/6小鼠分成5组,每组20只,分别用pVS84、pVAXl、plL2S和PBS分别各免疫3次,每次均间隔2周,以等剂量加强免疫2次。另一组用BCG(105CFU)皮内注射免疫1次。每组10只鼠在最后一次加强免疫后,无菌取脾培养,检测上清细胞因子。另10只鼠则用结核菌H37Rv经静脉攻击,2周后取脾、肝和肺培养结核菌并进行菌落计数。结果pVS84免疫组鼠脾淋巴细胞培养上清的mIL-2和mlFN-Y平均含量分别为(290.0±112.9)pg/ml和(501.7±79.4)pg/ml,显著高于3个阴性对照组(P<0.001),与BCG免疫组无显著性差异(P>0.05)。5个组的平均mIL-6和mIL-10无显著性差异。pVS84免疫组小鼠的脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为(39176.9±3702.6)、(18780.1±2535.8)和(24410.3±1846.8)CFU/g,分别低于pVAXl、plL2S和PBS三个阴性对照组的相应器官的结核菌载量(P<0.001),仅脾结核菌载量显著高于BCG免疫对照组。结论构建的DNA疫苗pVS84能够刺激机体产生抗结核菌所需的Thl型免疫应答,免疫鼠抵抗H37Rv攻击的能力与BCG接近。
- 朱中元刘建兵王海波谢勇张春发张颖
- 关键词：结核分枝杆菌DNA疫苗分泌蛋白免疫保护
- 结核杆菌DNA疫苗pVS84与pIL2质粒联合免疫的保护效率研究
- 2006年
- 目的用构建的人hIL-2质粒和结核杆菌DNA疫苗pVS84联合免疫后,对小鼠的细胞因子进行了测定并对抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的能力进行了评估。方法将hil-2插入pVAX1,构建了人hIL-2的质粒pIL2。将雌性C57BL/6鼠分成6组,分别用pVS84和pIL2各50μg,pVS84,pVAX1,pIL2S和PBS免疫3次,间隔2周,加强免疫2次。另一组用BCG(105CFU)皮内免疫1次。每组10只鼠在最后一次加强后,取脾培养,检测上清细胞因子。另10只用结核菌H37Rv攻击,2周后取脾、肝和肺培养结核菌并计数。结果pVS84+pIL2联合免疫组的鼠血清hIL-2平均浓度为720.5±114.5pg/ml,显著高于其它组。pVS84+pIL2组、pVS84组的脾细胞培养上清的mIL-2和mIFN-γ平均含量显著高于3个阴性对照组(P<0.001),与BCG免疫组无显著性差异(P>0.05)。pVS84+pIL2组脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为12471.4±2269.3,13622.6±2404.0和14742.0±2378.7CFU/g,低于pVS84组和3个阴性对照组相应器官的结核菌载量(P<0.001),与BCG对照组无显著差异。结论pIL2质粒与pVS84联合免疫能够刺激机体产生Th1型免疫应答,抵抗H37Rv攻击的能力与BCG的效果相当。
- 朱中元谢勇王海波刘建兵陈英兰郑冰冰张春发张颖
- 关键词：结核DNA疫苗联合免疫
- 抗结核分枝杆菌多种抗原的抗体检测蛋白芯片研究被引量：33
- 2004年
- 目的 建立检测结核分枝杆菌多抗原IgG抗体的蛋白芯片检测系统 ,并验证抗结核分枝杆菌多种抗原的抗体检测蛋白芯片的临床应用价值。 方法 采用棋盘滴定法标定检测结核菌抗体的包被蛋白及金标记二抗的最低工作浓度 ,建立完整的检测系统。结核病人和正常对照者的血清经芯片识别仪和DIGFA法试剂同时检测 ,计算敏感性、特异性和总符合率。 结果 结核芯片系统检测的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和诊断效率分别为76 74% (3 5 3 /4 60 )、81 70 %、5 6 48%、91 90 %和 15 8 44 %。而DIGFA法检测的敏感性、特异性分别为 68 3 1% (2 91/4 2 6)和 72 2 %。两者检测的总符合率为 85 2 1%。检测结果间无显著性差异 (χ2 =6,P >0 0 5 )。全部检测过程只需 5min。 结论 芯片系统检测的敏感性和特异性符合临床检验要求 ,具有简便、快速和单人份操作的优点 ,可用于临床快速诊断结核病。
- 朱中元王海波刘爱国谢勇
- 关键词：抗原抗结核蛋白芯片抗体检测多抗
- 人乳头瘤病毒基因分型芯片的研究被引量：2
- 2009年
- 目的建立人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)基因分型芯片技术,采用基因测序技术对该芯片进行评价,探讨其临床使用价值。方法利用基因工具软件比对HPVL1基因,设计可扩增高危型HPV的通用简并引物和可以鉴别HPV型别的基因探针,仪器将探针点样于尼龙膜上,制备HPV分型基因芯片。芯片检测的样本结果与HPV基因测序的结果进行比较,以评价芯片的分析性能。结果建立的HPV基因芯片的灵敏度为102cfu/ml,重复性检测的HPV型符合率为96.7%(87/90),与基因测序结果分型的符合率高达94.3%(66/70),可以检测常见的高危型和导致性传播疾病的HPV型别,可在6～7h内出结果,结果可通过仪器判读。结论HPV基因芯片具有较高的敏感性和重复性,与基因测序的结果符合率高,具有临床推广使用潜力。
- 朱中元郭洁王海波刘建兵谢勇王莉
- 关键词：人乳头瘤病毒基因分型芯片技术
- 结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因检测芯片的研究被引量：4
- 2007年
- 目的建立用于检测结核分枝杆菌耐异烟肼基因突变的基因芯片,并与基因测序和常规药物敏感性试验进行比较,探讨其使用价值。方法根据结核分枝杆菌 katG 基因突变的规律,设计不同的探针,制备可检测 katG 基因突变的芯片,并且同时检测药物敏感株和耐药株的 katG 的变异情况。结果结核分枝杆菌临床分离株共137株,至少耐1种抗结核药物共97株(70.8%)。耐异烟肼的比例为32.8%(45/137)。敏感株 katG 基因扩增阳性率为100%。耐 INH 菌株 katG 的阳性率为88.9%(40/45)。PCR 检测 katG 阳性率为91.1%(41/45)。耐 INH 菌株 katG 的缺失率为8.9%。katG315位密码子的突变依次为 AAC(32.5%,13/40),ACC(15.0%,6/40),ACA(10.0%,4/40),ATC(5.0%,2/40)和 AGC(5.0%,2/40)。基因芯片检测、药物敏感性试验和基因测序的结果一致。结论本研究建立的检测结核菌 katG 基因突变的基因芯片技术敏感性高,特异性强,可用于结核菌的快速药物敏感性试验评价。
- 朱中元王海波谢勇谢萌王莉朱义明郭洁
- 关键词：分枝杆菌结核异烟肼微阵列分析
- 抗结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片的临床应用被引量：6
- 2005年
- 目的 验证抗结核分枝杆菌多种抗原的抗体检测蛋白芯片的临床应用价值。 方法 结核病人和正常对照者的血清经芯片识别仪和ELISA同时检测,分析其敏感性、特异性和总符合率。 结果 结核芯片系统检测的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和诊断指数分别为69 .91%、84 .85%、90. 80%、55. 56%和154. 76%。而ELISA法检测的敏感性、特异性分别为66 .81%和86 .14%。两者检测的总符合率为81 .04%。检测结果间差异无显著性(χ2=1. 5,P >0. 05)。 结论 芯片系统检测的敏感性和特异性符合临床检验要求,具有简便、快速和单人份操作的优点,可用于临床辅助诊断结核病人。
- 王海波朱中元谢勇
- 关键词：抗结核蛋白芯片分枝杆菌抗体检测预测值
