蒲双双
- 作品数：14 被引量：49H指数：4
- 供职机构：山东中医药大学附属医院更多>>
- 发文基金：山东省科技发展计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 外泌体的提取、鉴定和保存方法研究进展被引量：13
- 2018年
- 外泌体是一种直径介于40～100nm之间的膜性囊泡,由活体细胞分泌产生,广泛存在于人体各种体液中,富含多种蛋白质和RNA,是细胞间传递生物信息的重要载体,在生理调节和病理发展中都发挥重要作用,是近年来研究的热点。为更深入研究外泌体生物学作用机制,提取高质量的外泌体是首要步骤,基于此,笔者就外泌体的各种提取方法及其优缺点以及鉴定和保存方法的研究进展作如下综述,希望此文能为研究者们提供一些参考,为后续研究打好基础。
- 蒲双双
- 关键词：外泌体
- 艾滋病痴呆综合征病人HIV-1tat基因多态性及氨基酸序列分析被引量：2
- 2011年
- 目的 研究艾滋病痴呆综合征患者体内HIV-1 tat第一外显子基因序列的特征和变异情况,为艾滋病痴呆综合征发病机制的研究提供依据.方法 提取1例艾滋病痴呆综合征病例尸检标本的外周组织（淋巴结、脾脏）和中枢神经组织（脑膜、额叶灰质、额叶白质、颞叶、基底核）共7个部位的基因组DNA,巢式PCR扩增HIV-1 tat第一外显子基因,与克隆载体pGEM-T连接,经转化、氨苄青霉素和蓝白斑筛选出阳性克隆,每个部位挑取5个菌落测序,测序结果利用BioEdit、MEGA4软件比对并生成系统进化树、计算基因距离和同义/非同义替换值（ds/dn）,分析氨基酸位点的改变.结果 该病例感染的病毒是HIV-1 B亚型,分离自不同组织的HIV-1 tat第一外显子基因序列存在差异;与标准序列相比,该病例的HIV-1tat第一外显子基因编码的氨基酸序列有16个位点发生了变异,并且中枢各部位部分氨基酸位点的变异与外周不同,特别是中枢基底核5个序列及颞叶1个序列Q54R的变异值得关注.结论 艾滋病痴呆综合征患者体内,HIV-1 tat第一外显子序列与标准序列存在差异,并且在外周和中枢不同部位中存在的变异不同,这些变异是否与艾滋病痴呆综合征的发病机制有关,还有待进一步研究.
- 蒲双双闫玉芬高文花温红玲王志玉宋艳艳许洪芝赵丽
- 关键词：HIV-1TAT基因多态性氨基酸序列
- 抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体的制备及鉴定被引量：7
- 2010年
- 目的制备抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)单克隆抗体(McAb)并对其进行初步鉴定。方法采用小剂量长周期的免疫方案,以DON-牛血清白蛋白(BSA)偶联物免疫雌性BALB/c小鼠,采用细胞融合的方法制备杂交瘤细胞株,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中McAb,对抗体分泌阳性的细胞株进行克隆化,直至抗体阳性率100%,用竞争抑制ELISA法进一步检测McAb的特异性,腹水诱生法制备大量McAb,并用饱和硫酸铵对其进行纯化,用抗体亚类鉴定试剂盒对该McAb亚类进行鉴定,BCA蛋白测定试剂盒测定蛋白含量,ELISA检测McAb的滴度、参考工作稀释度和亲和常数。结果 DON-BSA免疫的BALB/c小鼠血清效价为1∶256000,与BSA有强烈的交叉反应。细胞融合后,ELISA筛选抗体分泌阳性的杂交瘤细胞株,经3轮克隆化,建立了1株能稳定分泌抗DON-BSAMcAb的杂交瘤细胞株3G5,腹水诱生法制备了大量的McAb。该McAb属IgG1,IgG含量为6.06g/L,抗体滴度为1∶500000,参考工作稀释度为1∶64000,抗体亲和常数为1.62×109。用间接竞争抑制ELISA测得校正曲线线性范围9.8～10000ng/mL,线性方程Y=-0.2726X+0.2259(r=0.9309)。结论获得了分泌抗DON-McAb的杂交瘤细胞株,该单克隆抗体灵敏度高,特异性强,可用于制备高质量国产DON-ELISA检测试剂盒。
- 赵丽温红玲侯霄煜蒲双双宋艳艳许洪芝李凤琴
- 关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体
- 一种固体检验检疫取样工具及采样箱
- 本发明提供一种固体检验检疫取样工具及采样箱，涉及固体检验检疫取样检测技术领域。该一种固体检验检疫取样工具，包括螺纹外套，所述螺纹外套的外侧面且靠近顶部固定连接有法兰挡环，所述螺纹外套的内部螺纹连接有螺纹推杆，所述螺纹推杆...
- 张春来蒲双双石玉珊刘礼青张恒李金星
- 外泌体在疾病实验诊断和临床治疗中的研究进展被引量：9
- 2018年
- 外泌体是一种分泌囊泡,广泛分布于血液、尿液等几乎所有体液中,无创易获取,其内包含有丰富的miRNA及蛋白质成分,可敏感的反映来源细胞的生理病理状态,分析外泌体的基因芯片和蛋白质谱可以为疾病筛查和实验诊断提供依据。另外,外泌体在肿瘤治疗方面也具有很好的应用前景。它可用作基因和治疗药物运载的良好载体,靶向运送和抑制肿瘤,也可在人为上调特定分子的表达后增强机体的抗肿瘤免疫,还有被开发成肿瘤疫苗的潜质。该文就血液和尿液来源的外泌体中miRNA和蛋白质组分在人体各个系统疾病实验诊断方面的相关研究以及外泌体在疾病临床治疗尤其是肿瘤治疗中的研究进展作如下综述。
- 蒲双双李金星
- 关键词：外泌体
- 社区H型高血压患者药物基因作用靶点多态性分布及叶酸联合维生素D干预效果研究被引量：1
- 2024年
- 背景H型高血压严重影响着人们的健康及生活质量,目前临床上治疗高血压主要根据患者症状和临床经验选择药物,降压效果不理想,急需探寻降压药物基因分布的多态性,为高血压患者进行个体化用药指导。目的探讨济南市社区H型高血压药物作用靶点基因多态性分布及叶酸联合维生素D的干预作用,为该地区开展高血压医防融合精准医疗提供参考依据。方法2020年6月—2022年6月随机抽取山东省济南市槐荫区20家街道办事处社区卫生服务中心200例血压控制不佳的高血压患者为研究对象,治疗前首先进行5类常用抗高血压药物[利尿剂、β受体阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)、钙离子通道抑制剂(CCB)、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)]相关高血压个体化用药基因位点的基因多态性检测。将患者随机分为基因导向治疗组(基因组)与基因导向协同叶酸、维生素D治疗组(基因导向组),每组100例。基因组根据检测的高血压基因作用位点的特点调整用药;基因导向组在基因组治疗方案的基础上同时服用叶酸、维生素D。干预初始(M0)、干预3个月(M3)、干预6个月(M6)时采集患者晨间未服用降压药物情况下坐位收缩压和舒张压。记录患者患病情况、不良反应发生情况、脑卒中发生情况,进行基因测序,检测血清同型半胱氨酸(Hcy)浓度。采用Pearson相关性分析或Spearman秩相关分析探究性别、年龄、收缩压、舒张压与Hcy的相关性。结果研究对象性别(r_(s)=-0.463)、收缩压(r=0.181)、舒张压(r=0.188)与Hcy水平有相关性(P<0.05)。5类抗高血压药物基因作用靶点中,与药物代谢酶基因多态性位点相关的分别是CYP3A5(A6986G)、CYP2C9(c.1075A>C)、CYP2D6(c.100C>T),与药物作用靶点敏感性基因多态性位点相关的是ADRB1、ACEI(I/D)、AGTR1、NPPA。基因组A6986G:CYP3A5*1/*1(AA)、ACEI(I/D):D/D、c.100 C>T:CYP2D6*1/*1(CC)患者M3、M6舒张压
- 庞爱梅高伟张恒蒲双双郭莉莉范子荣刘海霞刘瑞霞
- 关键词：叶酸维生素D
- 艾滋病痴呆综合征患者HIV-1 nef基因多样性分析被引量：3
- 2013年
- 目的研究艾滋病痴呆综合征（ADC）患者体内HIV-1nef基因变异规律，为ADC发病机制的研究提供依据。方法提取1例ADC病例尸检标本的外周（脾）和中枢神经系统（基底核、额叶灰质、脑膜、颞叶）共5个部位组织中的基因组DNA，PCR扩增HIV-1nef基因，与pMDl9-T克隆载体连接后，蓝白斑筛选挑取阳性菌落测序，序列经BLAST分析后，每个部位取5个序列，利用Bioedit、MEGA4等生物学软件进行基因距离、系统进化树以及同义／非同义替换值（ds／dn）等分析。结果该ADC患者感染的是HIV-1B亚型，与标准序列HXB2比较，该病例的HIV-1nef基因存在变异，且外周组织与中枢神经系统各组织间以及中枢神经组织不同部位的基因变异不同，相同组织来源的nef序列基因距离较小，外周和中枢的nef基因距离差异较大，该病例HIV-1nef基因在外周和中枢神经系统变异时均受到负向选择压力。结论ADC患者体内HIV-1nef基因存在多样性，且不同组织部位的基因变异不同，其导致的Nef蛋白某些氨基酸位点的改变对其生物学活性的影响有待进-步研究。
- 贺淑婷迟媛媛刘建伟温红玲王志玉宋艳艳许洪芝赵丽蒲双双
- 关键词：HIV-1基因多样性
- 艾滋病痴呆综合征患者HIV-1B gp120基因的克隆及真核表达
- 2012年
- 目的克隆艾滋病痴呆综合征（ADC）患者体内不同部位的HIV-1Bgpl20基因，并在人神经胶质瘤细胞U87中表达。方法分别以一例ADC患者尸检标本的外周（淋巴结）和中枢（脉络丛、大脑枕叶白质）来源的基因组DNA为模板，PCR扩增HIV-1gp120基因，序列测定后，将目的基因插入表达载体pcDNA3．1（＋），构建重组表达载体gp120／peDNA3．1（＋），将所构建的重组表达载体用脂质体法转染人神经胶质瘤U87细胞，间接免疫荧光法测定HIV-1Bgp120的表达情况。结果克隆了ADC患者体内外周淋巴结、脉络丛、大脑枕叶白质3个部位的HIV-1Bgp120基因，所构建的表达质粒gp120／pcDNA3．1（＋）转染U87细胞后可表达目的蛋白。结论ADC患者不同部位来源的HIV-1Bgp120基因均可在U87细胞中表达，为进一步研究HIV-1Bgp120包膜蛋白的神经毒性及其作用机制提供条件。
- 赵丽闫玉芬李静蒲双双王志玉温红玲宋艳艳许洪芝
- 关键词：获得性免疫缺陷综合征HIV-1
- ADC及非ADC病人HIV-1 tat基因多样性分析及其对U87细胞分泌TNF-α与IL-1β的影响
- 目的
艾滋病痴呆综合征/(ADC/)是HIV-1侵犯中枢神经系统/(CNS/)后引起的一种重要的神经系统并发症,其病变程度与大脑中HIV-1的数量并不总是相关,除病毒载量外ADC的发生还可能与HIV-1本身的基因...
- 蒲双双
- 关键词：HIV-1TNF-ΑIL-1Β
- 文献传递
- 艾滋病痴呆综合症患者体内HIV-1 tat基因的克隆及原核表达被引量：3
- 2010年
- 目的探讨艾滋病痴呆综合症(AIDS dementia complex,ADC)患者体内外周和中枢不同组织部位的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)反式激活因子(tat)第一外显子基因序列的变异并对其进行表达,用于研究HIV-1Tat变异对其神经毒性的影响。方法从ADC病例尸检标本的脾脏(spleen,SPL)、脑膜(meninges,MG)和基底核(bas-al ganglia,BG)3个部位的组织中提取基因组DNA,用PCR方法扩增出tat第一外显子基因,并将其插入到pGEM-T克隆载体中,测序证实为HIV-1tat基因,BioEdit软件对测序结果进行比对。将克隆载体双酶切,回收目的基因,并将其连接到pGEX-KG表达载体中,将重组表达质粒pGEX-KG-tat转化BL21大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行检验和鉴定。结果成功克隆了HIV-1tat第一外显子基因,序列比对发现外周和中枢部位的Tat氨基酸序列不同;构建了pGEX-KG-tat重组表达载体,并在原核细胞中高效表达了谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合Tat蛋白,SDS-PAGE和Western blot分析表明,所表达的蛋白为Tat蛋白。结论 ADC患者外周和中枢不同组织部位的HIV-1tat第一外显子基因所编码的Tat蛋白氨基酸序列存在变异,在原核细胞中对其进行了高效表达,为Tat蛋白的神经毒性研究奠定了基础。
- 蒲双双闫玉芬高文花温红玲宋艳艳许洪芝赵丽
- 关键词：基因表达
