王蓓华
- 作品数：6 被引量：3H指数：1
- 供职机构：安徽医科大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 支架蛋白RACK1及其突变体与氯离子通道蛋白1(CLIC1)相互作用的研究
- 目的为了研究RACK1及其突变体与氯离子通道蛋白CLIC1的相互作用,运用分子克隆技术构建带FLAG标签的RACK1突变体的真核表达质粒,原核表达质粒和CLIC1的原核表达质粒,通过酵母双杂交,瞬时转染,免疫荧光,免疫共...
- 王蓓华
- 关键词：RACK1蛋白质相互作用
- 文献传递
- RACK1及其缺失突变体与CLIC1的共定位研究
- 2015年
- 目的运用分子克隆技术构建活化蛋白激酶C受体1(RACK1)突变体的真核表达质粒,进行RACK1突变体的表达、定位及其与胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)蛋白的共定位研究,为其进一步的功能研究奠定基础。方法以RACK1全长c DNA序列为模板,构建真核表达质粒pc DNA3.1-RACK1-N(1-138)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1-C(130-317)-FLAG;Western blot法检测突变体在哺乳动物细胞中的表达;用免疫荧光技术了解突变体蛋白在哺乳动物细胞中的共定位情况。结果成功构建了RACK1突变体的真核表达质粒;Western blot法检测到蛋白主要在胞质中表达,核内有部分表达;免疫荧光实验表明,RACK1及突变体蛋白主要定位在胞质与核膜,细胞核中也有少量表达,与CLIC1蛋白存在共定位。结论成功构建了RACK1缺失突变体,并在真核细胞中成功表达;RACK1及突变体与CLIC1蛋白在哺乳动物细胞中均存在不同程度的共定位,蛋白之间可能存在相互作用,为RACK1蛋白的功能研究奠定了基础。
- 王蓓华朱亮亮刘晓颖范礼斌
- 关键词：RACK1质粒构建免疫荧光BLOT
- 肌营养不良蛋白及其衍生物的表达与定位的研究被引量：3
- 2015年
- 目的研究肌营养不良蛋白(DG)及其衍生物α-DG、β-DG在真核细胞内的表达与定位。方法构建pcDNA3.1-DAG1-FLAG、pcDNA3.1-DAG1α-FLAG和pcDNA3.1-DAG1β-FLAG 3个真核表达质粒,并分别转染至HEK 293T细胞中;提取总蛋白,Western blot检测表达情况;分别转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察细胞定位情况。结果成功构建了带有DAG1、DAG1α、DAG1β基因的真核表达载体,且在HEK 293T细胞中都能有效表达,在COS7细胞中主要分布于细胞质。结论DG及其衍生物α-DG、β-DG在HEK293T、COS7细胞中均有表达,主要分布在细胞质内,为进一步了解DAG1的功能提供了细胞学基础。
- 钱成王蓓华徐雪琴潘林鑫李新颖刘晓颖范礼斌
- 关键词：转染基因表达
- FKBP25缺失突变体在细胞中的表达与定位
- 2014年
- 目的研究FKBP25缺失突变体蛋白在细胞内的表达和定位。方法以人FKBP25全长cDNA序列的质粒为模板,PCR方法分别扩增出FKBP25缺失突变体序列,然后插入真核表达载体pcDNA3.1中,通过Western blot方法和免疫荧光方法检测其在细胞株中的表达和定位。结果成功构建了FKBP25缺失突变体的真核表达载体,经Western blot检测FKBP25缺失突变体在HEK 293T细胞中能够有效表达,免疫荧光显微镜结果显示FKBP25缺失突变体在COS7细胞中分布于细胞核和细胞质。结论 FKBP25缺失突变体在HEK 293T、COS7细胞中能够表达,为了解FKBP25缺失突变体的功能提供了一定基础。
- 张姗靖王蓓华龚芮潘林鑫耿慧武刘晓颖邓松华范礼斌
- 关键词：基因表达免疫荧光细胞定位
- 支架蛋白RACK1及其突变体与氯离子通道蛋1(CLIC1)相互作用的研究
- 目的：为了研究RACK1及其突变体与氯离子通道蛋白CLIC1的相互作用，运用分子克隆技术构建带FLAG标签的RACK1突变体的真核表达质粒，原核表达质粒和CLIC1的原核表达质粒，通过酵母双杂交，瞬时转染，免疫荧光，免疫...
- 王蓓华
- 关键词：支架蛋白相互作用分子克隆
- 文献传递
- RACK1突变体在哺乳动物细胞中的表达及定位研究
- 2016年
- 目的根据活化蛋白激酶C受体1(RACK1)的蛋白结构,构建其缺失突变体的真核表达质粒,研究RACK1缺失突变体在真核细胞内的表达及定位改变。方法根据RACK1蛋白的结构域特点,以pc DNA3.1-RACK1-FLAG为模板,构建真核表达质粒pc DNA3.1-RACK1(51-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(93-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(135-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(180-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(219-317)-FLAG;Western blot检测上述重组质粒在HEK 293T细胞中的表达;免疫荧光技术检测RACK1的各缺失突变体在COS7细胞中的定位情况。结果成功构建了RACK1各缺失突变体的真核表达质粒;Western blot结果表明,除pc DNA3.1-RACK1(219-317)-FLAG外,其余缺失突变体在HEK 293T细胞中均有效表达;免疫荧光实验表明RACK1缺失突变体在COS7细胞中主要定位在胞质,细胞核中也有少量分布。结论成功构建了RACK1缺失突变体真核表达质粒,并在HEK 293T和COS7细胞中成功表达;在COS7细胞中不同缺失突变体的表达定位均有差异,与野生型的RACK1相比也有所不同,表明缺失不同的结构域后其在细胞中的定位表达也发生了改变。这为研究RACK1各结构域的功能提供了重要依据。
- 朱亮亮韩卢王蓓华耿慧武潘林鑫刘晓颖范礼斌
- 关键词：突变体质粒构建免疫荧光WESTERNBLOT
