刘晓颖
- 作品数：53 被引量：80H指数：5
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- 补体成分C3及其缺失突变体蛋白的表达及与CLIC1蛋白共定位的研究
- 2015年
- 目的研究补体成分C3及其缺失突变体C3(1-840)、C3(824-1663)在真核细胞内的表达及与氯离子通道蛋白(CLIC1)的共定位。方法构建pc DNA3.1-C3-FLAG、pc DNA3.1-C3(1-840)-FLAG、pc DNA3.1-C3(824-1663)-FLAG三个真核表达质粒(缺失突变体根据C3的结构域及其裂解断裂位置设计),并分别转染至HEK 293T细胞中,Western blot检测表达情况;上述质粒分别瞬时单转至COS7细胞和分别与GFP-CLIC1共转至COS7细胞内,观察共定位情况。结果成功构建带FLAG标签的C3基因及其两个缺失突变体[C3(1-840)、C3(824-1663)]的真核表达载体,Western blot结果显示它们在HEK 293T细胞中均能成功表达;免疫荧光显示它们在COS7细胞中均主要分布于细胞质,且三个真核表达载体中只有C3(824-1663)与CLIC1有共定位。结论补体C3及其缺失突变体C3(1-840)和C3(824-1663)在HEK 293T、COS7细胞中均能高效表达,且主要分布在细胞质内,C3(824-1663)与CLIC1蛋白有共定位。
- 王二宁陈丹丹刘晓颖范礼斌
- 关键词：C3转染基因表达
- RACK1及其缺失突变体与CLIC1的共定位研究
- 2015年
- 目的运用分子克隆技术构建活化蛋白激酶C受体1(RACK1)突变体的真核表达质粒,进行RACK1突变体的表达、定位及其与胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)蛋白的共定位研究,为其进一步的功能研究奠定基础。方法以RACK1全长c DNA序列为模板,构建真核表达质粒pc DNA3.1-RACK1-N(1-138)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1-C(130-317)-FLAG;Western blot法检测突变体在哺乳动物细胞中的表达;用免疫荧光技术了解突变体蛋白在哺乳动物细胞中的共定位情况。结果成功构建了RACK1突变体的真核表达质粒;Western blot法检测到蛋白主要在胞质中表达,核内有部分表达;免疫荧光实验表明,RACK1及突变体蛋白主要定位在胞质与核膜,细胞核中也有少量表达,与CLIC1蛋白存在共定位。结论成功构建了RACK1缺失突变体,并在真核细胞中成功表达;RACK1及突变体与CLIC1蛋白在哺乳动物细胞中均存在不同程度的共定位,蛋白之间可能存在相互作用,为RACK1蛋白的功能研究奠定了基础。
- 王蓓华朱亮亮刘晓颖范礼斌
- 关键词：RACK1质粒构建免疫荧光BLOT
- 肌营养不良蛋白及其衍生物的表达与定位的研究被引量：3
- 2015年
- 目的研究肌营养不良蛋白(DG)及其衍生物α-DG、β-DG在真核细胞内的表达与定位。方法构建pcDNA3.1-DAG1-FLAG、pcDNA3.1-DAG1α-FLAG和pcDNA3.1-DAG1β-FLAG 3个真核表达质粒,并分别转染至HEK 293T细胞中;提取总蛋白,Western blot检测表达情况;分别转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察细胞定位情况。结果成功构建了带有DAG1、DAG1α、DAG1β基因的真核表达载体,且在HEK 293T细胞中都能有效表达,在COS7细胞中主要分布于细胞质。结论DG及其衍生物α-DG、β-DG在HEK293T、COS7细胞中均有表达,主要分布在细胞质内,为进一步了解DAG1的功能提供了细胞学基础。
- 钱成王蓓华徐雪琴潘林鑫李新颖刘晓颖范礼斌
- 关键词：转染基因表达
- 通用转录因子GTFⅡF2对食管癌细胞增殖、迁移的影响
- 2016年
- 目的研究通用转录因子ⅡF多肽2(GTFⅡF2)的表达对食管癌细胞增殖及迁移的影响。方法人工合成靶向GTFⅡF2基因的siRNA序列和阴性对照siRNA序列及质粒pc DNA3.1-GTFⅡF2-FLAG,分别转染至食管癌细胞中,采用克隆形成实验和细胞划痕实验观察其对食管癌细胞增殖和迁移的影响。结果 RNA干扰技术靶向沉默GTFⅡF2基因表达后,食管癌细胞增殖和迁移均明显受到了抑制,而过表达GTFⅡF2对食管癌细胞的增殖和迁移无明显影响。结论GTFⅡF2基因在食管癌细胞TE-1、ECA-109的增殖和迁移过程中发挥重要作用,为进一步了解GTFⅡF2基因抑制TE-1、ECA-109细胞增殖和迁移的机制提供了基础。
- 陈丹丹耿慧武潘林鑫刘晓颖范礼斌
- 关键词：RNA干扰细胞增殖细胞迁移
- 一种海洋异壁放线菌及其在制备浅蓝霉素A中的应用
- 本发明公开了一种海洋异壁放线菌及其在制备浅蓝霉素A中的应用。所述的海洋异壁放线菌(Actinoalloteichus sp.)AHMU CJ 021的保藏编号为：CCTCC NO:M 2018157。本发明的海洋异壁放线...
- 陈奇刘晓颖谢运昌张园张少飞
- 文献传递
- p16/MTS1基因缺失在骨髓增生异常综合征发病中作用的研究被引量：2
- 2000年
- 目的 探讨多肿瘤抑制基因缺失 (multipletumorsup pressorgene 1,p16 /MTS1)与骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndrome,MDS)发病的关系。方法 采用PCR方法 ,对 2 9例MDS的 p16 /MTS1基因的缺失情况进行分析 ,讨论其与疾病发生的关系。结果 2 9例MDS患者未见有 p16基因缺失。 结论 p16基因缺失和MDS的发病关系不大。
- 汪惠园刘晓颖夏瑞祥汪渊周青任立奋蔡学杰
- 关键词：骨髓增生异常综合征
- 人β4GalTⅡ基因在哺乳动物细胞株中的表达与定位
- 2015年
- 目的运用基因克隆技术构建人源β1,4-半乳糖转移酶Ⅱ(β4Gal TⅡ)真核表达质粒,并将其转染到COS7细胞中,观察蛋白在细胞内的定位,同时转染到HEK 293T细胞中检测其表达。方法分别设计带FLAG标签和GFP标签的β4Gal TⅡ基因的特异性引物,以含人β4Gal TⅡ全长c DNA序列为模板,定向构建到pc DNA3.1(+)及p CDGFP真核表达载体中,构建重组表达质粒。通过酶切和测序鉴定阳性重组质粒,利用Lipofectamine 2000分别转染COS7、HEK 293T细胞,免疫荧光显微镜观察重组蛋白在细胞内的定位,Western blot法鉴定重组蛋白的表达。结果成功构建pc DNA3.1-β4Gal TⅡ-FLAG和p CDGFP-β4Gal TⅡ重组表达载体,定位实验表明:β4Gal TⅡ-FLAG和GFP-β4Gal TⅡ二者在COS7细胞中均主要定位在细胞核周围,并有明显的块状染色,胞核中未见明显分布;Western blot法检测显示重组β4Gal TⅡ蛋白在HEK 293T细胞中稳定表达。结论获得了人β4Gal TⅡ的真核表达质粒,并能在COS7和HEK 293T细胞中表达,为进一步研究β4Gal TⅡ的功能及其与其他蛋白的相互作用奠定了一定基础。
- 徐雪琴潘林鑫耿慧武刘晓颖范礼斌
- 关键词：转染细胞定位蛋白表达
- 凋亡抑制蛋白IAP及其调控被引量：2
- 2004年
- 调亡过程中关键参与者是caspase家族的多种成员,它们在凋亡过程中要受到严格调控。凋亡抑制蛋白IAP通过抑制caspase的活性从而参与对凋亡的调控,所以IAP的结构特征及其调控机制具有重要意义。
- 刘晓颖范礼斌
- 关键词：凋亡CASPASEIAP
- p16基因甲基化特异检测方法的建立及其初步应用被引量：12
- 2002年
- 目的 建立 p16基因中CpG岛的甲基化分析方法 ,即甲基化特异的PCR(methylation specificpolymerasechainreaction ,MSP)方法及其初步应用。方法 用亚硫酸氢钠修饰变性后的被测DNA ,随之进行甲基化、非甲基化特异的PCR扩增。应用MSP法分析白血病患者的白细胞 p16基因5′CpG岛的甲基化变异情况。结果 用加热法变性DNA ,亚硫酸氢盐修饰DNA ,WizardDNA纯化树脂除盐、纯化修饰后的DNA都获得了成功 ,并建立了MSP分析p16基因甲基化的方法。白血病患者的白细胞 p16基因的 5′CpG岛有一定比例的甲基化变异。结论 MSP是一种较为简便。
- 刘晓颖汪惠园鲁云霞周青桂淑玉夏瑞祥袁凌云汪渊
- 关键词：P16基因甲基化
- 条件培养基对神经干细胞增殖与分化作用的影响被引量：2
- 2015年
- 目的观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)条件培养基对体外培养神经干细胞(NSCs)增殖与分化作用的影响。方法用BMSCs条件培养基分别在增殖与分化条件下培养NSCs,观察NSCs形态变化。用MTT法及NSCs球数目和直径的统计分析了解NSCs增殖情况,同时行免疫荧光及Western blot法鉴定其分化情况。结果原代培养获得大量未分化且悬浮生长的NSCs球,并能分化为神经元细胞、星形胶质细胞及少突胶质细胞。BMSCs条件培养基组能够促进NSCs球的吸附贴壁,但与对照组相比光密度(OD)值差异无统计学意义,NSCs球数目和直径差异亦无统计学意义。另外,BMSCs条件培养基组少突胶质细胞特异性蛋白MBP表达量高于对照组(P<0.05),星形胶质细胞特异性蛋白GFAP表达量低于对照组(P<0.05),而神经元特异性蛋白MAP-2表达量未见明显异常。结论大鼠BMSCs条件培养基促进NSCs向少突胶质细胞方向分化,但不抑制其增殖作用。
- 杨昆申才良宋旆文刘晓颖徐鹏张峰
- 关键词：骨髓间充质干细胞条件培养基神经干细胞增殖分化
