王星华
- 作品数：21 被引量：71H指数：6
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 携带TRAIL基因的新型溶瘤病毒体外诱导肝癌细胞凋亡被引量：2
- 2009年
- 目的:评价携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL在人肝癌细胞株中介导TRAIL基因表达及对肝癌细胞的凋亡诱导作用.方法:CNHK500-hTRAIL感染人肝癌细胞株HepG2、Hep3B以及人正常肝细胞株WRL-68,通过增殖实验观察病毒的选择性增殖能力,并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL蛋白的表达量,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肝癌细胞的功效,流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响.结果:CNHK500-hTRAIL能选择性地在HepG2、Hep3B细胞内高效增殖;感染72h后HepG2、Hep3B细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为167.4、173.22ng/L;在MOI=0.1时,CNHK500-hTRAIL即可明显杀伤HepG2、Hep3B细胞,并选择性地诱导细胞早期凋亡,均显著高于空病毒CNHK500及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL;而对人正常肝细胞株WRL-68则无明显杀伤作用.结论:携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒载体对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达,明显优于单纯的病毒载体及传统的非增殖型腺病毒载体,应用前景广阔。
- 刘永靖陈飞虎苏长青王星华钱炎珍钱其军
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体凋亡四甲基偶氮唑蓝
- 多重调控病毒-基因载体的构建及其体外抗肿瘤活性被引量：1
- 2009年
- 目的构建-种新型的病毒-基因治疗载体。方法通过克隆技术将人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因插入质粒载体pBHGE3的E3区，得到由主要晚期启动子（MLP）调控的腺病毒质粒pPE3-hTRAIL，再通过与质粒pSG500在293细胞中进行位点特异性重组得到E1A、E1B基因分别受hTERT启动子与HRE启动子双重调控的重组增殖型腺病毒，用TCID50方法测定病毒滴度。通过增殖实验观察重组病毒的选择性增殖能力。利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测人TRAIL基因的表达。并进行噻唑蓝（MTT）比色法实验检测其杀伤肿瘤细胞的能力。结果CNHKS00-hTRAIL的病毒滴度为2．39×10^10pfu／ml，增殖实验结果证实CNHK500-hTRAIL可以选择性地在端粒酶阳性的人8市癌细胞A549中增殖，其所携带的人TRAIL基因在A549中的表达量（183．12μg/L）明显高于携带该基因的非增殖型腺病毒载体Ad—hTRAIL（24．53μg/L，P〈0．01）。MTT显示CNHK500-hTRAIL对A549的杀伤能力明显高于携带该基因的非增殖型腺病毒载体Ad—hTRAIL，其半数抑制MOI值分别为17．825、0．197（P〈0．01）。结论CNHK500-hTRAIL是-种具备治疗肺癌潜力的新型病毒-基因治疗系统。
- 刘永靖陈飞虎苏长青王星华张琪李林芳钱炎珍钱其军
- 关键词：肺癌腺病毒基因治疗TRAIL
- 含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒载体的构建与鉴定被引量：3
- 2005年
- 目的:构建含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒。方法:构建腺病毒穿梭质粒pDC312-DTREE,与骨架质粒共转染HEK293细胞,细胞内同源重组包装出腺病毒腺相关杂合病毒。PCR法鉴定病毒及TCID50法测定病毒滴度。杂合病毒感染NIH3T3细胞观察转基因的表达,ELISA法测定表达产物浓度。结果:穿梭质粒pDC312-DTREE经限制性核酸内切酶AatII及NotI酶切结果正确。PCR鉴定结果表明病毒DNA内有人β-内啡呔DNA序列,且无野生型病毒的污染,病毒滴度为1.29×1010PFUml。病毒感染细胞后第3d,细胞培养液内有高浓度的β-内啡呔。结论:成功构建了含人β-内啡呔融合基因的腺病毒腺相关杂合病毒,为进行下游相关研究奠定了基础。
- 徐学武俞卫锋王星华李泉董刚吴飞翔
- 关键词：Β-内啡呔腺病毒腺相关病毒
- 肿瘤端粒酶靶向腺病毒载体的表达活性被引量：4
- 2004年
- 目的 构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体 ,研究其介导目的基因在肿瘤细胞内的定向表达能力。方法 将端粒酶逆转录酶 (hTERT )启动子克隆入质粒 pDC3 12的多克隆位点构成外源基因表达盒 ,在基因表达盒上下游分别插入 1个绝缘子序列 ,构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体pSG TPE ;采用Luciferase报告基因进行hTERT启动子的活性分析 ;以pSG TPE携带绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因 ,重组腺病毒AdTPE EGFP ,观察其介导EGFP在肿瘤细胞内的定向表达能力 ,并与CMV启动子控制的腺病毒AdCMV EGFP作对照。结果 hTERT启动子在正常细胞内几乎没有活性 ,而在肿瘤细胞内的活性与SV 40启动子相近。腺病毒AdTPE EGFP能介导EGFP在肿瘤细胞内定向而稳定表达 ,在正常细胞内不表达 ,而对照腺病毒AdCMV EGFP在肿瘤和正常细胞内均表达EGFP。结论 靶向端粒酶阳性肿瘤的腺病毒载体 pSG TPE ,不但提高了对基因表达调控的特异性 ,而且降低了对正常细胞毒性作用。绝缘子的应用隔断了外源基因表达盒和病毒基因表达调控序列之间的互相干扰 ,进一步提高目的基因的表达效率。该载体对肿瘤的靶向基因治疗具有重要的应用价值。
- 苏长青王星华崔贞福吴红平李林芳姜梨华钱炎珍吴孟超钱其军
- 关键词：基因治疗腺病毒端粒酶启动子
- 携带小鼠白细胞介素-12基因的增殖型腺病毒对胃癌细胞的作用被引量：6
- 2004年
- 目的观察携带小鼠白细胞介素12(mIL12)基因的增殖型腺病毒载体对胃癌细胞的杀伤作用及mIL12表达情况。方法以携带目的基因的增殖型腺病毒CNHK200mIL12感染人胃癌细胞株SGC7901、人正常肝细胞株L02。首先,通过荧光显微镜下观察、细胞杀伤实验等观察病毒对细胞的杀伤能力;其次,通过Westernblot分析及双抗体夹心法(ELISA)检测mIL12表达情况。结果CNHK200mIL12感染SGC7901后,当MOI=10时即可杀伤大部分的肿瘤细胞,与ONYX015相当,而对正常细胞无明显杀伤。ELISA检测表明mIL12基因表达量达(267.2±34.6)ng/5×105个细胞/48h,较复制缺陷型腺病毒载体高近百倍。结论CNHK200mIL12能在胃癌细胞中复制及增殖杀死胃癌细胞,并高水平表达目的基因。
- 薛绪潮方国恩王星华季军捷毕建威钱其军
- 关键词：腺病毒胃癌基因治疗
- 携带小鼠白介素12基因的增殖型腺病毒对胃癌细胞株化疗敏感性影响的研究被引量：8
- 2005年
- 目的研究携带白介素12(mIL-12)基因的增殖型腺病毒CNHK200-mIL-12对胃癌细胞株化疗敏感性的影响。方法扩增增殖型腺病毒Onyx-015及携带小鼠mIL-12基因的增殖型腺病毒CNHK200-mIL-12,利用MTT法测定同一病毒滴度下联合应用不同浓度化疗药物及同一化疗药物浓度下联合应用不同滴度病毒对胃癌细胞株杀伤作用,并观察增殖型腺病毒联合化疗药物对裸鼠腹腔种植瘤的抑制作用。结果当不同感染复数(MOI)=0.5时,增殖型病毒Onyx-015、CNHK200-mIL-12对胃癌细胞SGC-7901无明显的杀伤作用。加入化疗药物阿霉素(ADM)、氟尿嘧啶(5-Fu)和卡铂(CAP)后,两者对SGC-7901的杀伤率随着药物浓度增加都有不同程度的升高,与单纯使用化疗药物组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。浓度为10μg/ml的5-Fu对SGC-7901的杀伤作用不明显,单用增殖型腺病毒对SGC-7901的杀伤作用也较弱,两者联合应用杀伤活性明显提高,与未加5-Fu组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。动物试验证明:经Onyx-015联合5-Fu治疗后,裸鼠腹腔内肿瘤形成率为1/6,而CNHK200-mIL-12联合5-Fu组未见腹腔内肿瘤生长,与单用增殖型腺病毒或单用化疗者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论携带mIL-12基因的增殖型腺病毒能够提高胃癌细胞株对化疗药物的敏感性。
- 薛绪潮方国恩王星华毕建威曹贵松钱其军
- 关键词：增殖型腺病毒胃癌细胞株5-FUSGC-7901杀伤作用
- 人白介素-10和EGFP双顺反子结构载体的构建及其在原代培养的豚鼠肝细胞中的表达
- 2005年
- 刘辰吴孟超张柏和王星华崔贞福钱其军
- 关键词：人白介素-10原代培养肝细胞
- 非增殖型和靶向增殖型腺病毒携带TRAIL基因治疗肝癌的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的比较携带人TRAIL基因的增殖型腺病毒(CNHK500-hTRAIL)和非增殖型腺病毒(Ad-hTRAIL)对TRAIL基因的表达以及对SMMC-7721肝癌细胞的杀伤能力。方法通过病毒增殖实验评估增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL的选择性增殖能力。通过MTT实验,评估增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL以及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL对人正常肝细胞株L02、人肝癌细胞株SMMC-7721的杀伤能力。采用ELISA法检测CNHK500-hTRAIL和Ad-hTRAIL感染SMMC-7721肝癌细胞后TRAIL基因的表达情况。以及通过流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响。结果CNHK500-hTRAIL能选择性地在SMMC-7721细胞内大量增殖,感染96 h后增殖达225137倍,在极低的MO I值(MO I=0.1)即可大量杀伤SMMC-7721细胞,明显强于Ad-hTRAIL,而对L02细胞无明显杀伤。CNHK500-hTRAIL和Ad-hTRAIL感染SMMC-7721细胞后,其TRAIL基因表达量,前者是后者的近10倍;CNHK500-hTRAIL可选择性地诱导SMMC-7721细胞早期凋亡,其能力显著高于Ad-hTRAIL。结论靶向增殖型腺病毒载体携带TRAIL基因对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达,明显优于传统的非增殖型腺病毒载体,应用前景广阔。
- 刘永靖陈飞虎黄学应苏长青王星华钱炎珍钱其军
- 关键词：增殖型腺病毒TRAIL
- 鞘内注射入β-内啡肽基因重组腺病毒对慢性神经病理痛大鼠的镇痛作用被引量：7
- 2005年
- 目的观察鞘内注射入β-内啡肽(β-EP)基因重组腺病毒(Ad-NEP)对慢性神经病理痛大鼠的镇痛作用。方法36只雄性SD大鼠,体重210-260 g,随机分为手术组(n=26)、假手术组(n= 5)、空白对照组(n=5),手术组分为三个亚组:Ad-NEP组(n=9)、绿色荧光蛋白基因重组腺病毒(Ad- GFP)组(n=9)、生理盐水组(n=8)。大鼠腹腔注射氯胺酮100 mg/kg和阿托品50 mg/kg麻醉后,手术组构建大鼠坐骨神经慢性捆扎(CCI)模型,假手术组进行同样手术,但不捆扎坐骨神经,空白对照组不进行手术;手术组经L5,6间隙蛛网膜下腔置入PE-10导管,7d后分别注射1×108pfu的Ad-NEP、Ad- GFP和40μl生理盐水。于手术后7 d(T0)、鞘内注射前当日(T1)、注射后1 d(T2)、1周(T3)、2周(T4)、3 周(T5)、4周(T6)、5周(T7)分别测定五组大鼠的左右足热痛阈;T3时取Ad-NEP、Ad-GFP组大鼠各1 只,取脊髓L3-6段作免疫组化检测;鞘内注射后10 d取Ad-NEP、Ad-GFP组大鼠,经腹腔内注射1 mg/kg 纳络酮,每间隔10min记录右足热痛阈(t0-9,共观察90min),并分别测定这两组T1-7时的脑脊液内β- EP浓度。结果Ad-GFP组和生理盐水组大鼠右足热痛阈明显低于假手术组和空白对照组(P< 0.01)。Ad-NEP组在T0,1,7时右足热痛阈明显低于假手术组和空白对照组(P<0.01),在T2-6时的右足热痛阈高于T0,也高于Ad-GFP组和生理盐水组(P<0.05或0.01),t1-6时右足热痛阈低于t0时(P< 0.01),与Ad-GFP组和生理盐水组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Ad-NEP组脊髓外膜可见明显的橙黄色浓染带,后角区可见少量橙黄色细胞,T2-7时脑脊液内β-EP浓度均高于Ad-GFP组(P< 0.01。)结论鞘内注射重组腺病毒Ad-NEP对慢性神经病理痛大鼠有明显的镇痛效果,作用时间长达4周以上。
- 尤圣武徐学武俞卫锋于布为钱其军苏长青王星华
- 关键词：鞘内注射基因重组腺病毒镇痛
- 靶向端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体的构建
- 人体各种类型的恶性肿瘤几乎都可以检测到高水平的端粒酶活性,因此端粒酶已成为肿瘤治疗的新靶点。本文通过构建hTERT启动子控制的特异性针对端粒酶阳性肿瘤的增殖缺陷型腺病毒载体,比较分析了该载体携带绿色荧光蛋白报告基因(EG...
- 苏长青王星华崔贞福吴红平李林芳姜梨华钱炎珍吴孟超钱其军
- 文献传递
