杨小毅
- 作品数：11 被引量：17H指数：2
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- 神经节苷脂GM3对重建Ca^(2+)-ATP酶构象的调节
- 1997年
- 应用稳态荧光和纳秒时间分辨瞬态荧光技术,以不同性质猝灭剂探测了神经节苷脂GM3诱发的Ca^(2+)-ATP酶构象的变化.结果显示,GM3可使重建的Ca^(2+)-ATP酶蛋白内源荧光寿命明显延长;并且能不同程度地减弱离子性猝灭剂碘化钾(I^-)和脂溶性猝灭剂竹红菌乙素(HB)对Ca^(2+)-ATP酶色氨酸(Trp)内源荧光的猝灭程度.进一步用时间分辨荧光猝灭动力学分析,当体系中有GM3存在时,HB对该蛋白不同荧光寿命组分的Trp内源荧光猝灭的幅度减小.猝灭常数(K_(sv))明显降低.说明GM3依靠其亲水糖链和疏水的神经酰胺链作用,不仅可以改变重建Ca^(2+)-ATP酶蛋白嵌于膜脂疏水区内部的构象,使位于膜脂疏水区不同部位的Trp残基更加趋向排列于亲水-疏水域界面;而且还使Ca^(2+)-ATP酶亲水-疏水结构域之间更趋接近,致使整个酶蛋白分子呈现较“紧凑”的构象,表达较高的酶活力.
- 王丽华崔肇春杨小毅屠亚平杨福愉
- 关键词：神经节苷脂腺苷三磷酸酶钙离子构象
- 北京鸭红细胞膜β-肾上腺素能受体的纯化及其与Gs和AC在脂质体上的重建被引量：1
- 1995年
- 儿茶酚胺类物质如肾上腺素、去甲肾上腺素和异丙肾上腺素等通过与细胞膜上特异的肾上腺素能受体的结合,调节机体的一系列生理反应.肾上腺素受体可分为α和β两型,β-肾上腺素能受体(β-Adrenergic receptor,β-AR)与配基结合后,通过定位于细胞膜内侧的激活型G-蛋白(Stimulatory GTP-binding Protein,Gs)的偶联,激活腺苷酸环化酶(Adenylate cyclase,AC),促进细胞内第二信使cAMP的形成,从而调节细胞的多种功能如物质代谢、离子交换、突触传递、基因转录、蛋白质生物合成和细胞的分裂、分化等.迄今,β-AR的纯化已在火鸡和蛙红细胞、仓鼠肺等组织中获得成功.
- 范高峰杨小毅黄有国
- 关键词：红细胞膜肾上腺素能受体GSAC北京鸭
- 单个巨噬细胞Ca^(2+)梯差的存在、消除及其与细胞内Ca^(2+)振荡的相关性被引量：1
- 1997年
- 应用激光扫描共聚焦显微系统和Fluo-3/AM荧光探剂标记技术,在单细胞水平研究了巨噬细胞跨膜Ca^(2+)梯差的存在、消除及其与细胞内Ca^(2+)的时间、空间传递的关系。结果表明,不仅跨细胞质膜和跨细胞核膜两侧存在Ca^(2+)梯差,而且细胞内局部区域之间和区域本身也存在不同深度或层次间的空间Ca^(2+)梯差;用A23187可以消除上述梯差.用K^+激活巨噬细胞,可诱导细胞内游离Ca^(2+)以快速尖锐峰型的Ca^(2+)振荡方式运动,细胞内不同Ca^(2+)微区振荡的强度与持续时间也明显不同;跨膜与空间Ca^(2+)梯差的程度均发生不同程度的变化,而梯差方向未变,并且以跨核膜Ca^(2+)梯差的变化更明显.上述Ca^(2+)梯差变化与兴奋型细胞明显不同,这些结果对于进一步从天然活细胞水平上探讨Ca^(2+)梯差与细胞内Ca^(2+)的时、空分布变化对巨噬细胞功能活动的调节机理具有重要意义。
- 杨小毅谭健苗黄有国杨福愉
- 关键词：巨噬细胞细胞质膜
- 全文增补中
- 单细胞内Ca^（2＋）时空变化的激光共聚焦显微测定被引量：10
- 1996年
- 应用激光扫描共聚焦显微系统（ＬＳＣＭ）和Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ荧光探剂标记技术，测定了单个活细胞胞内游离Ｃａ２＋的动态变化与立体分布影像．结果显示，在３７℃，Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ终浓度为６μｍｏｌ／Ｌ的条件下，Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠巨噬细胞负载１ｈ左右即可获得良好的标记效果．相反，若探剂浓度太高或负载时间太长，胞内荧光强度太强，影响在共聚焦显微镜镜下分辨细胞内结构．因此用ＬＳＣＭ研究细胞内游离Ｃａ２＋变化时，荧光探剂的负载应以获得最适荧光信号而不是以最大荧光强度为标准．上述方法在其他如平滑肌细胞、卵母细胞中的测定亦获得满意的结果，这对进一步研究各种生理和病理条件下细胞内Ｃａ２＋信号的动态变化、与跨膜Ｃａ２＋梯差的关系及对活细胞功能活动的调节提供了一种可行的、直观的研究手段。
- 杨小毅颜坤黄有国
- 关键词：细胞钙离子激光
- 跨膜Ca<'2+>梯差变化对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的调节
- 杨小毅黄有国
- 关键词：膜蛋白
- GM3与Ca^(2+)-ATP酶的重建及其冷冻断裂电镜观察被引量：4
- 1997年
- 应用生物膜的分离与重建技术 ,将GM3、大豆磷脂与肌质网Ca2 + ATP酶共同重建在脂质体上 ,酶活力明显增加 .经负染、冷冻断裂复型后电镜等形态学方法证实形成的脂酶体囊泡封闭性好 ,脂酶体上Ca2 + ATP酶蛋白颗粒均匀。
- 王丽华杨小毅
- 关键词：腺苷三磷酸酶钙
- GM3掺入肌质网膜及其对Ca^(2+)-ATP酶的正向调节
- 1997年
- 用微量提取和高效薄板层析方法研究了外源性神经节苷脂GM3掺入兔肌质网膜的动力学过程 .将掺入量分别相对于掺入浓度、时间和温度作图 ,显示掺入曲线均呈抛物线形式 .当掺入体系中GM3浓度为 8μmol/L、掺入时间为 90min、掺入温度为 35℃时 ,其掺入量达到最大值 ,约为掺入体系中GM3量的 50 % .上述结果表明外源性GM3对肌质网膜的作用不仅仅是一种简单的水相反应 ,而是一个依赖于掺入浓度、时间和温度 ,并具有一定的饱和度的掺入到肌质网膜脂双层中的动力学过程 .进一步的实验表明外源性GM 3的掺入能明显增加肌质网Ca2 + ATP酶的活力 .这为从分子水平上研究糖脂对细胞内膜系统的结构与功能的调节作用提供了重要的基础 .
- 王丽华杨小毅屠亚平崔肇春
- 关键词：神经节苷脂钙腺苷三磷酸酶
- 跨膜Ca^(2+)梯差对重建β-肾上腺素能受体配基结合功能的影响被引量：1
- 1996年
- 在正常生理状态下,真核细胞内Ca^(2+)浓度为10^(-7)～10^(-6)mol/L,细胞外侧为10^(-3)mol/L,即细胞膜的两侧存在1000～10000倍的跨膜Ca^(2+)梯差。当细胞外信息跨膜传递时细胞外Ca^(2+)内流,胞浆中的Ca^(2+)浓度升高,细胞膜两侧的跨膜Ca^(2+)梯差降低约10倍,即膜内外两侧的跨膜Ca^(2+)梯差为100倍;而信息传递完成后胞浆中的Ca^(2+)会通过质膜上的Ca^(2+)-ATP酶或Na^+-Ca^(2+)交换运出细胞外以维持膜两侧合适的跨膜Ca^(2+)梯差。因此,细胞膜两侧的跨膜Ca^(2+)梯差在维持细胞正常功能中具有重要的生理意义。但这种跨膜Ca^(2+)梯差对膜结合蛋白,尤其是对参与构成信息跨膜转导体系的膜蛋白的结构与功能及其相互作用的影响尚未引起足够的重视。
- 杨小毅范高峰黄有国杨福愉
- 关键词：Β-肾上腺素能细胞膜
- 跨膜Ca2+梯差与巨噬细胞源性泡沫细胞的形成和凋亡
- 杨小毅
- 关键词：巨噬细胞泡沫细胞膜蛋白
- 跨膜Ca^(2+)梯差与巨噬细胞源性泡沫细胞的形成和凋亡——动脉粥样硬化细胞分子机理的探讨
- 1998年
- 杨小毅黄有国杨福愉
- 关键词：动脉粥样硬化巨噬细胞跨膜
