李恩灵
- 作品数：42 被引量：201H指数：7
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：上海市教育委员会重点学科基金国家自然科学基金上海市科委重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生电子电信更多>>
- 甲基转移酶1表达质粒对结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其表达的影响被引量：6
- 2004年
- 目的 分析DNA甲基转移酶 1(Dnmt1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其转录水平和微卫星不稳定性 (MSI)的影响。方法 分别构建含有人的正义Dnmt1(HMT)和反义Dnmt1(THM)的真核表达质粒 ,将其转染入结肠癌SW1116细胞 ,以Western印迹实验分析各组细胞Dnmt1蛋白的表达情况。定量PCR检测hMLH1、hMSH2基因的表达。甲基化特异性PCR分析hMLH1、hMSH2启动子区甲基化情况 ,银染法研究其对微卫星不稳定性的影响。结果 转染正义Dnmt1质粒的细胞hMLH1、hMSH2的启动子甲基化水平升高 ,基因mRNA表达降低。转染反义Dnmt1质粒可使细胞中hMSH2启动子呈非甲基化状态 ,基因表达增强。未发现转染正义和反义Dnmt1基因的SW1116细胞存在MSI的变化。结论 重组Dnmt1表达质粒可通过调控人结肠癌细胞中错配修复基因的甲基化影响基因的表达。
- 陆嵘房静远朱红音陈萦晅程中华李恩灵
- 关键词：基因表达质粒结肠癌甲基化基因成分
- 益生菌对肝硬化患者免疫功能的影响被引量：7
- 2007年
- 背景:肝硬化患者易发生多种感染,与免疫功能下降、肠道菌群紊乱有关。目的:观察口服微生态制剂对肝硬化患者细胞免疫功能、外周血单核细胞内毒素受体表达以及血清细胞因子和血浆内毒素水平的影响。方法:选取连续入院的肝硬化患者,予常规保肝治疗和口服微生态制剂4周,应用流式细胞术检测患者治疗前后外周血T细胞及其亚群和自然杀伤细胞、外周血单核细胞内毒素受体Toll样受体(TLR)4和CD14的表达,分别以酶联免疫吸附测定法和偶氮基质显色法检测细胞因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-10水平和血浆内毒素水平。结果:治疗前肝硬化患者外周血总T细胞(CD3)和CD4细胞数明显低于正常对照组(P<0.05),微生态制剂治疗后CD3和CD4亚群显著升高(P<0.05)。治疗前肝硬化患者外周血单核细胞内毒素受体TLR4和CD14的表达显著高于正常对照组(P<0.01),微生态制剂治疗后CD14表达显著降低(P<0.01),TLR4表达也呈下降的趋势,但差异无统计学意义。治疗前肝硬化患者血清IL-1β、TNF-α、IL-10水平显著高于正常对照组(P<0.05),微生态制剂治疗后血清细胞因子和血浆内毒素水平均无明显改变。结论:肝硬化患者存在细胞免疫功能下降和慢性炎症状态,微生态制剂可改善患者免疫功能的紊乱,因此可将其作为一种慢性肝病的辅助治疗。
- 华静邱德凯李恩灵沈冠凤
- 关键词：肝硬化免疫TOLL样受体4CD14内毒素类细胞因子类
- 肝硬化患者的内毒素和脂多糖结合蛋白水平及其与预后的关系被引量：7
- 2004年
- 背景脂多糖结合蛋白(LBP)是介导脂多糖(LPS)活化单核/巨噬细胞的关键因子。尽管内毒素在慢性肝病和肝硬化中具有重要作用,但其结合蛋白在肝硬化中的意义尚不清楚。目的了解肝硬化患者的内毒素和LBP水平,并探讨其与预后的关系。方法分别以基质显色法鲎试验和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝硬化患者的血浆内毒素和LBP水平;伴腹水患者同时测定腹水内毒素和LBP水平,并进行2个月的短期随访,记录存活情况。结果肝硬化患者的血浆内毒素和LBP水平均显著高于健康对照者(P<0.05),其中伴腹水患者的血浆内毒素水平显著高于无腹水患者(P<0.05)。Child鄄PughC级肝硬化伴腹水患者的腹水内毒素水平显著高于B级患者(P<0.05),而B级患者的血浆LBP水平显著高于C级患者(P<0.05)。短期随访显示肝硬化伴腹水死亡患者的腹水内毒素水平显著高于存活者(P<0.05)。结论肝硬化患者的血浆内毒素和LBP水平均升高,LBP水平升高可能是对肝硬化肠源性内毒素血症的一种持续的慢性炎症应答。腹水内毒素水平可以作为肝硬化伴腹水患者短期生存的一个预测指标。
- 华静邱德凯李继强李恩灵
- 关键词：肝硬化内毒素脂多糖结合蛋白预后腹水
- 幽门螺杆菌对AGS细胞DNA错配修复基因表达的影响被引量：2
- 2005年
- 目的体外观察幽门螺杆菌对 AGS 细胞 DNA 错配修复(mismatch repair,MMR)基因蛋白和 mRNA 表达的影响,以确定不同疾病来源幽门螺杆菌对 MMR 基因表达的影响是否存在差异。方法 AGS 细胞分别与5株分离自胃癌和5株分离自胃炎患者的幽门螺杆菌共培养。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和 Western 印迹法检测 hMSH2和 hMLH1基因 mRNA 和蛋白表达,同时以肠道致病性大肠杆菌作为细菌对照。结果胃炎菌株和大肠杆菌基本不影响 hMLH1和 hMSH2基因 mRNA 和蛋白表达,而所有胃癌菌株都能下调 hMLH1和 hMSH2基因 mRNA 和蛋白表达。结论胃癌菌株与胃炎菌株对胃癌细胞 MMR 的影响存在差异,提示部分幽门螺杆菌菌株可能通过损害细胞 MMR 功能促进胃黏膜上皮细胞内 DNA 突变累积,增加幽门螺杆菌长期感染时胃癌发生的危险性。
- 王继恒刘文忠韩跃华童菊芳朱红音李恩灵
- 关键词：幽门螺杆菌AGS细胞错配修复
- 丝裂原激活蛋白激酶阻断剂与DNA甲基化酶抑制剂对人结肠癌细胞的协同影响被引量：6
- 2006年
- 目的研究细胞外信号调节激酶-丝裂原激活蛋白激酶途径(ERK-MAPK)与DNA甲基化间的关系及对结肠癌细胞生物学行为的协同影响。方法培养人结肠癌细胞SW1116,分别以PBS、二甲基亚砜(DMSO)为对照组,PD 98059 50μmol／L、5-氮脱氧胞苷(5-aza-dC)5μmol／L、PD 98059 50 μmol／L+5-aza-dC 5μmol／L进行药物干预,以定量RT-PCR检测DNA甲基化酶(Dnmt)1、3a和3b基因转录水平;流式细胞仪分析细胞周期;MTT测定细胞活力;光学显微镜下观察细胞形态学变化。结果 ERK-MAPK途径阻断剂PD 98059下调Dnmt 1和Dnmt 3b,Dnmt抑制剂5 aza-dC下调Dnmt 1、 Dnmt 3a和Dnmt 3b,日5-aza-dC联合PD98059对Dnmt1及Dnmt 3a mRNA的表达下调更为显著。5- aza-dC明显降低G0／G1期细胞百分比(P<0．05),G2／M期细胞百分比明显增加(P<0．05);PD98059 使G0／G1期细胞百分比降低(P<0．05),G2／M期增加(P<0．05)。PD98059明显抑制细胞生长。PD 98059促进细胞分化,呈上皮样改变,细胞变狭长,胞质减少,细胞排列开始出现相对整齐;5-aza-dC干预组细胞大小不一,出现较多多倍体细胞(多个核分裂相)。结论 ERK-MAPK途径阻断剂及Dnmt抑制剂均能抑制结肠癌SW1116细胞分裂、增殖,并诱导细胞分化;两者有协同作,ERK-MAPK信号转导途径能调控DNA甲基化水平。
- 陈朝飞房静远孙丹凤翁玉蓉李恩灵朱红音顾伟齐
- 关键词：细胞周期
- 重组DNA甲基化酶1表达质粒对结肠癌细胞相关基因表达的影响被引量：13
- 2004年
- 目的 分析DNA甲基化酶 1(DNMT1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞肿瘤相关基因的表达影响。方法 分别构建并转染含有人正义和反义DNMT1的真核表达质粒入结肠癌SW 1116细胞 ,PCR和限制性内切酶证实转染结果 ,以Western印迹法分析各组细胞DNMT1蛋白的表达情况。定量PCR检测hMLH1、hMSH2及c myc、p16 INK4A 基因的表达。结果 经G4 18筛选得到稳定转染DNMT1基因的结肠癌细胞系 ,且分别在该转染有正义和反义质粒的细胞系中 ,DNMT1蛋白表达上调和下调。同时发现转染正义DNMT1的细胞中hMLH1、hMSH2及c myc的表达降低 ,而转染反义DNMT1的细胞中hMSH2的表达明显增强。各组细胞p16 INK4A基因的表达差异不明显。
- 陆嵘房静远朱红音陈萦晅程中华李恩灵
- 关键词：结肠癌细胞系肿瘤相关基因WESTERN印迹法
- 酶联免疫吸附试验检测系统性红斑狼疮抗双链DNA抗体的应用价值被引量：8
- 2019年
- 目的·探讨酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗双链DNA(double-stranded DNA,dsDNA)抗体的特点及临床应用价值。方法·采用放射免疫测定(radioimmunoassay,RIA)法和ELISA 法同时检测186 例系统性红斑狼疮(systemiclupus erythematosus,SLE)患者、183 例非SLE 自身免疫疾病患者、78 例非自身免疫病对照和50 例健康体检者血清中抗dsDNA 抗体,评价其诊断效能。结果· RIA 法和ELISA 法对于SLE 诊断的敏感度分别为47.31%和62.90%、特异度分别为85.85%和81.67%,阳性预测值分别为66.67%和67.24%,阴性预测值分别为73.15%和78.14%。2 种方法检测值均随疾病的活动度升高而增高。结论· ELISA 法对SLE的诊断特异度与RIA 法接近,但其敏感度更高,可有效筛查SLE 患者。同时,2 种方法均有助于监测SLE 病情的活动状态。
- 王之青郑冰李恩灵
- 关键词：系统性红斑狼疮抗双链DNA抗体酶联免疫吸附法放射免疫法
- RNAi阻断人结肠癌细胞ERK-MAPK信号传导通路调控细胞周期的研究
- 目的随着对肿瘤研究的深入,细胞信号转导在肿瘤发生发展及肿瘤防治中的作用受到越来越多的重视。一些控制细胞增殖分化的信号传导途径中的某个环节发生异常可引起细胞生长失控,最终导致肿瘤形成。细胞外信号调节激酶(extracell...
- 陆嵘房静远王霞孙丹凤李恩灵朱红音
- 文献传递
- 实验性自身免疫性肝炎小鼠的口服耐受诱导研究
- 2003年
- 口服耐受是一种治疗全身性炎症疾病的潜在手段。在一些动物模型中,口服自身抗原可抑制自身免疫反应。目的:观察在实验性自身免疫性肝炎(EAH)小鼠中诱导口服耐受对肝脏病变的影响。方法:在实验第1天和第7天,将新鲜制备的蛋白质浓度为0.5-2 g/L的肝抗原S-100 0.5 ml和等体积的弗氏完全佐剂(CFA)充分乳化后,予C57BL/6小鼠腹腔注射,以诱导EAH的产生。诱导:EAH前5天起,每天分别予小鼠插管喂饲1 mg和10mg的肝抗原S-100、肝抗原S-100第1峰、第2峰和第3峰,对照组以PBS 1 ml灌胃。结果:仅肝抗原S-100第1峰抗原高剂量组小鼠的肝组织学病变程度较对照组显著减轻(P<0.05),血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平也较对照组显著下降(P<0.05)。肝抗原S-100总抗原高剂量组的血清.ALT水平较对照组显著下降(P<0.05),肝组织学病变程度呈下降趋势,但与对照组的差异无显著性。结论:口服肝抗原S-100第1峰抗原可诱导EAH小鼠的免疫耐受。
- 马雄邱德凯李恩灵彭延申陈晓宇
- 关键词：抗原小鼠S-100口服耐受实验性自身免疫性
- 离心淘洗技术分离纯化大鼠肝库普弗细胞被引量：1
- 2003年
- 目的 通过制备肝非实质细胞悬液并离心淘洗的方法 ,分离纯化大鼠肝库普弗细胞。方法 采用原位肝脏酶灌注、肝非实质细胞悬液的准备、离心淘洗和原代培养等方法进行分离。结果 在经过胶原酶和链酶蛋白酶消化、Nycodenz分离和离心淘洗后 ,获得大鼠肝库普弗细胞产量约为 ( 2 8± 6)× 10 6/鼠肝 ,细胞纯度为 95 % ,细胞活力大于90 %。结论 应用离心淘洗技术能有效地分离纯化大鼠肝库普弗细胞 ,为体外进一步研究提供了高纯度和活力的库普弗细胞群。
- 钱学敏范竹萍邱德凯李恩灵张岚
- 关键词：纯化原代培养肝纤维化
