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鸭肠炎病毒gC糖蛋白胞外区优势抗原表位的筛选与鉴定被引量：3: 2011年; 为筛选出鸭肠炎病毒(DEV)gC糖蛋白胞外区的优势抗原表位,本试验通过抗原表位作图法对DEV-gC基因进行分段克隆并构建重组表达载体,表达蛋白经纯化后进行Western blot分析。结果显示,经过4轮筛选,DEV-gC糖蛋白优势抗原表位为第73-88位氨基酸。该优势表位的发现为DEV-gC糖蛋白具体功能区的研究、诊断试剂及表位疫苗的研制奠定了物质基础。; 崔立虹宋鸽王晓东刘晓玫高明春张文龙马波王君伟; 关键词：鸭肠炎病毒

Asia1型FMDV非结构蛋白3A基因的克隆、表达与抗原性鉴定被引量：1: 2012年; 为了研究Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3A的抗原性,试验对Asia1型口蹄疫病毒非结构蛋白3A基因进行扩增、亚克隆及测序,将3A克隆至表达载体pET-32a(+)中,选取阳性克隆转化Rosetta(DE3)pLysS大肠杆菌感受态细胞,用IPTG诱导表达和纯化3A蛋白,并进行SDS-PAGE鉴定与Western-blot分析。结果表明:在大肠杆菌中成功地表达了3A蛋白,表达的目的蛋白能与Asia1型FMDV阳性血清发生特异性反应。说明非结构蛋白3A具有较好的抗原活性。; 宋军高明春宋鸽刘丹丹王君伟; 关键词：非结构蛋白

口蹄疫病毒非结构蛋白3AB单克隆抗体的制备及其对应表位区分析被引量：1: 2011年; 为鉴定口蹄疫病毒(FMDV)的非结构蛋白3AB的抗原表位,本研究以原核表达并纯化的FMDV 3AB重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,获得6株能够稳定分泌抗3AB蛋白特异性单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞。这6株MAbs亚类鉴定均为IgG1型,轻链均为κ链。间接免疫荧光试验结果表明,这6株MAbs均能够识别FMDV 3AB蛋白。采用制备的MAb对分段表达的3AB蛋白进行western blot分析,结合位点分别位于3AB的第aa 55～aa 70、aa 64～aa 79、aa 130～aa 145区段。该结果为进一步探索3AB蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。; 刘丹丹高明春宋军宋鸽曹永生张润祥李爽于力王君伟; 关键词：口蹄疫病毒单克隆抗体

牛Asia 1型口蹄疫病毒感染性克隆的构建被引量：2: 2009年; 本研究在完成Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)As01株全基因组测序的基础上,采用融合PCR扩增得到含有15个C碱基的5′端片段(约1800bp),并利用长片段PCR扩增得到基因组3′端片段(约6700bp)。再利用单一的酶切位点将2个片段克隆到pBluescript SK载体中,从而获得携带As01株基因组全长cDNA的重组质粒pBSAs。将该质粒线性化后作为模板体外转录并转染BHK-21细胞,可观察到典型的细胞病变。对收获的病毒采用RT-PCR、间接免疫荧光和电镜观察等检测及鉴定,结果表明,拯救出了具有感染性的Asia1型FMDV。拯救毒与亲本毒对乳鼠的致病力(LD50)差异不显著,具有相似的生物学特征。该感染性克隆的构建,为深入研究FMDV的致病机理及开发新型疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。; 李爽张润祥宋鸽高明春刘湘涛王君伟; 关键词：口蹄疫病毒全长CDNA 感染性克隆病毒拯救体外转录

牛口蹄疫病毒VP2结构蛋白抗体间接ELISA方法的建立被引量：5: 2010年; 为建立牛口蹄疫(FMD)抗体的检测方法,本研究将口蹄疫病毒(FMDV)的VP2基因,通过pPROEXTM HTb表达载体在大肠杆菌DH5α中表达,获得大小为35ku的重组VP2蛋白(rVP2),western blot证实rVP2可与FMDV5种血清型的牛阳性血清发生特异性反应。以纯化复性的rVP2为抗原建立了FMDVrVP2间接ELISA方法。重复性试验证实批内、批间变异系数均小于10%。特异性交叉试验表明,该抗原不与常见的其他7种牛病阳性血清发生交叉反应。检测非免疫无口蹄疫国家牛阴性血清的特异性为100%;检测感染血清敏感性为97.3%;检测O-AsiaⅠ的二价苗免疫牛血清,与4种商品化试剂盒比较,其符合率分别为69.0%、95.0%、90.4%和86.8%。实验结果表明建立的ELISA方法可以用于口蹄疫感染和免疫抗体检测。; 张润祥高明春曲哲会李爽曹永生宋军宋鸽刘丹丹王君伟; 关键词：口蹄疫病毒 VP2蛋白间接ELISA

综合防控口蹄疫的关键技术——疫苗免疫被引量：3: 2012年; 口蹄疫的发生和流行严重危害畜牧业的发展,造成惨重的经济损失,因此防控和消灭口蹄疫成为许多国家共同关注的问题。疫苗免疫是特异性预防和控制该病的有效手段。本文从免疫方式、动物种类、地域因素、生物模型4个方面对疫苗防控措施的建立加以论述,提出了常规免疫策略以及非疫苗预防免疫策略,并对紧急疫苗接种与感染动物扑杀进行了时效性分析,旨在面临疫病挑战时制订具有针对性的疫病防控措施,从而使疫苗免疫在控制、消灭和防止口蹄疫传播等方面更能有效地发挥作用。; 宋鸽崔立虹王君伟; 关键词：口蹄疫疫苗免疫

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宋鸽