宋大新 作品数:32 被引量:63 H指数:5 供职机构: 复旦大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 上海市科学技术委员会资助项目 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 生物学 轻工技术与工程 化学工程 医药卫生 更多>>
重组人载脂蛋白AI米兰突变体在毕赤酵母中的表达方法 本发明属于生物工程技术领域,具体为一种重组人载脂蛋白Al米兰突变体(rAIM)在毕赤酵母中分泌表达的方法。将突变后的apoAI—milano cDNA插入表达质粒pPIC9k,电击导入毕赤酵母GS115,通过对摇瓶培养基... 宋大新 赵志安 张彦 钟江文献传递 产人胃蛋白酶原的酵母工程菌及其制备方法和应用 本发明公开了一种产人胃蛋白酶原的酵母工程菌,该酵母工程菌是由重组表达载体转化的酵母菌,该重组表达载体包含人胃蛋白酶原基因。本发明还公开了该酵母工程菌的制备方法和应用。本发明的酵母工程菌,实现了人胃蛋白酶原C在毕赤氏甲醇酵... 徐晓晶 宋大新 金维荣文献传递 bglS基因的亚克隆及功能分析 被引量:1 1991年 带有枯草杆菌β-1,3-1,4葡聚糖酶基因(bglS)7.1kb的EcoRI片段,经亚克隆,将1.5kb的EcoR I-Pst I酶切片段插入pUC19的polylinker上,转化E.coli JM101后合成出β-1,3-1,4葡聚糖酶,它能专一性地降解大麦β-1,3-1,4葡聚糖和地衣多糖,酶的大部分(>50%)留在胞内,其中25%分泌到胞外。根据酶特性分析,大肠杆菌中合成的β-1,3-1,4葡聚糖酶完全与出发菌株枯草杆菌相同。 陈永青 宋大新 黄兴奇 江红 敖万远 郑伟军关键词:基因 亚克隆 功能分析 枯草杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基本酶学性质研究 被引量:4 1990年 β-葡聚糖是大麦淀粉质胚乳细胞壁的主要成份,约占大麦总重量的10%。β-葡聚糖酶(Endo-1,3-1,4-β-Glucanase)能专一性地分解大麦β-葡聚糖,产生可利用的还原糖。因此,是啤酒酿造业,农副产品加工业中一个亟待开发应用的重要工业用酶。本文报道了对枯草杆菌(B.SubtiliS 1.88)中分离制备的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基本酶学性质的研究结果。1 黄兴奇 郑伟军 陈永青 宋大新关键词:枯草杆菌 酶学性质 人载脂蛋白ApoAⅠ在毕赤氏酵母胞内表达的方法 本发明属生物工程技术领域,具体为一种人载脂蛋白ApoA I在毕赤氏酵母胞内表达的方法。它将人工合成的apoA I基因插入胞内表达质粒pPIC3.5k,电击导入毕赤氏酵母菌株GS115,经摇瓶发酵和甲醇诱导,在酵母细胞内有... 宋大新 赵志安 杨婷婷 张淼 张彦文献传递 粉纹夜蛾颗粒体病毒增强蛋白锌离子结合域定点突变 被引量:8 2007年 粉纹夜蛾颗粒体病毒(Trichoplusia ni granulovirus,TnGV)增强蛋白(enhancin)具有增强病毒感染力的作用。该蛋白包含一个多种杆状病毒增强蛋白都具有的保守结构域HELGH,是典型的金属蛋白酶锌离子结合域,但该结构域对增强蛋白生物活性的重要性尚未得到研究。本研究通过定点突变构建了该结构域的5个氨基酸分别突变为2种不同氨基酸的共10种增强蛋白突变体基因,并用杆状病毒载体进行了重组表达。活性测定发现,10种突变型增强蛋白大部分都丧失了野生型增强蛋白所具有的降解粉纹夜蛾幼虫围食膜粘蛋白的生物学功能,只有1种(第4位G突变为A)保留该生物学活性。这一结果表明锌离子结合域对增强蛋白生物活性具有重要作用,也提示增强蛋白确是一种金属蛋白酶。 尹隽 单梁 宋大新 钟江关键词:杆状病毒 增强蛋白 金属蛋白酶 围食膜 定点突变 人载脂蛋白基因apoAⅠ在毕赤氏酵母中的表达 被引量:2 2004年 将化学法合成的apoAⅠ基因插入分泌型载体 pPIC9K .将重组的 pPIC9K apoAⅠ用BglⅡ酶切后 ,转化PichiapastorisGS115菌株 ,筛选获得G4 18高抗性转化子 .转化子经摇瓶发酵和甲醇诱导 ,上清液用SDS PAGE检测 ,有明显的rApoAⅠ表达 .经Phenyl sepharose 6 (FastFlow)疏水层析柱和SephadexG 5 0 (coarse)分子筛层析 ,得到rApoAⅠ蛋白纯品 .经Westernblotting ,N末端氨基酸顺序测定证明 ,毕赤氏酵母表达的rApoAⅠ与人血浆提取的ApoAⅠ基本一致 . 张淼 赵志安 杨婷婷 刘林 宋大新关键词:分泌型载体 毕赤氏酵母 蛋白质印迹 ApiIa抗菌肽基因的化学合成、克隆及其在酵母中的表达 被引量:4 1998年 用固相亚磷酰胺法合成了ApiIa抗菌肽基因,全长为80个核苷酸.它被分成4个寡 核苷酸片段,分别在DNA合成仪上合成.经分离纯化后的寡核苷酸片段经酶促连接,然后被 克隆到分泌型载体质粒pFD101上.经限制酶酶切、PCR模板检测以及双链 DNA序列分析 检测,证明合成的apiIa基因和设计的完全一致.将含有apiIa基因的质粒pFD1001经BglⅡ 酶切后,转化毕氏酵母.所得转化子经摇瓶发酵,上清液经25%SDS-PAGE检测,有 ApiIa抗 菌肽表达.用抑菌圈试验作定性实验表明,表达的ApiIa有明显的生物活性. 韩万江 盛泽娟 张青 宋大新 陈永青 夏天辉关键词:化学合成 无性系 抗菌肽 结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在毕赤氏酵母中的融合表达方法 本发明属生物技术领域,具体为一种结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在毕赤氏酵母中的融合表达方法。它将esat-6基因和人α-2a干扰素基因串联起来,两者间的linker为人肠激酶识别序列,将重组融合基因的DNA片段插入表达载体... 宋大新 赵志安 王洪海 刘林文献传递 人纤溶蛋白酶原K5在毕赤酵母中的表达及其生物活性鉴定 被引量:1 2004年 化学合成人纤溶蛋白酶原K5 (pK5 )的编码基因并克隆到毕赤氏酵母表达系统的分泌型载体pPIC9K上 ,将重组质粒经BglⅡ单酶切后电转化PichiapastorisGS115菌株 ,筛选出对G4 18有高抗性和在MM培养基上生长缓慢的转化子。经摇瓶发酵和甲醇诱导后 ,用 15 %SDS PAGE检测发酵上清液 ,表明有重组蛋白pK5的高表达。经CM Sepherose离子交换柱和Superdex 75分子筛层析两步分离纯化 ,获得了纯度达到 98%的rpK5。用MTT方法检测的结果表明 。 沈利 宋大新 高卜渝 吕红 李育阳关键词:酵母 分泌表达