单同领
- 作品数：87 被引量：229H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 病毒宏基因组学分析儿童和猪肠道病毒群落及23株病毒的初步研究
- 我国是发展中国家。腹泻是影响我国人民的健康主要疾病之一，尤其是儿童的健康。分析腹泻儿童粪便中的病毒群落和发掘潜在的新病毒将为诊断不明腹泻的病因提供新的途径。克隆新病毒的基因组和流行病学调查将为预防和治疗新病毒引起的腹泻奠...
- 单同领华修国
- 关键词：宏基因组学病毒分析儿童腹泻
- 猪流行性腹泻病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 2024年
- 为了建立高效、灵敏的猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测方法,本研究从GenBank数据库中获取PEDV N基因序列,扩增出PEDV N基因标准质粒,并在N基因的保守区域内设计了一对特异性荧光定量引物,成功建立了SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。经过一系列试验表明,该检测方法线性关系良好,R^(2)值为0.99;特异性强,敏感性高,最低可检测至2.23 copies/μL,比普通PCR灵敏约100倍;重复性好,组内变异系数为0.25%~0.43%,组间变异系数为0.67%~0.97%;对于各地区96份临床样品检测出PEDV阳性率为25%。本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法为PEDV的临床诊断、流行病学调查以及定量研究提供了有效的检测工具。
- 董苏洁孔宁秦文珍翟焕杰翟雪滢杨心雨童武郑浩于海童光志李有文单同领
- 关键词：猪流行性腹泻病毒N基因荧光定量PCR
- 猪α、γ干扰素的原核表达、纯化及抗病毒活性初步研究被引量：5
- 2010年
- 提取猪白细胞DNA、猪脾脏RNA,特异性引物扩增猪IFN-α、IFN-γ基因,将IFN-α和IFN-γ基因分别插入原核表达载体pET-30构建重组表达质粒pET-30-IFN-α和pET-30-IFN-γ,转化大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下表达猪IFN-α及IFN-γ,SDS-PAGE分析重组表达蛋白;用细胞病变抑制法检测重组表达蛋白的抗病毒活性。结果表明成功构建重组表达质粒pET-30-IFN-α和pET-30-IFN-γ;SDS-PAGE可检测到相对分子质量为21.3Ku和19.4Ku的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在;经Ni2+-NTA亲和层析纯化,获得高纯度重组蛋白;纯化的猪IFN-α和IFN-γ抗星状病毒复制的活性分别为3.15×103U·mg-1和2.48×103U·mg-1。
- 赵伟鸽单同领朱建国林源华修国
- 关键词：原核表达纯化抗病毒活性
- 重组H1N1亚型猪流感灭活疫苗的制备及免疫保护效力评价
- <正>猪流感(Swine Influenza,SI)是由猪流感病毒(Swine influenza Virus,SIV)引起的一种急性呼吸道疾病,临床症状以突发、高热、精神沉郁、食欲废绝、咳嗽、呼吸困难、反复发作、衰竭、...
- 于海阮宝阳汪琪刘晓敏汪秀会宫晓倩杨海明王帅勇单同领童武李国新童光志
- 文献传递
- 免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定
- 2012年下半年，从江苏省某伪狂犬病疫苗免疫猪场中发病仔猪的脑组织中分离到一株伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)，并进行了部分生物学特性分析。从发病死亡仔猪脑组织中，利用PCR技术针对PRV的gB...
- 童武童光志张青占郑浩刘飞姜一峰单同领韦祖樟高飞周艳君
- 关键词：仔猪伪狂犬病毒免疫保护
- 文献传递
- 应用Cre/loxp系统构建含有BAC序列的重组伪狂犬病毒被引量：3
- 2017年
- 近年来我国出现伪狂犬病毒变异株,导致猪伪狂犬病重新爆发流行。为研究伪狂犬病毒变异株毒力增强与抗原变异的分子机制,需要建立该病毒的感染性克隆操作系统。本研究通过构建转移载体pTEGGF,利用同源重组将含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)表达框及两翼各一个loxp位点,插入到伪狂犬病毒变异株PRV JS-2012 gG编码区下游,获得重组病毒rJS2012-gG/EGFP。将表达Cre重组酶的质粒pcDNA3.1-Cre转染BHK-21细胞,再感染rJS2012-gG/EGFP,筛选获得含有单一loxp位点的重组病毒rJS2012-gG/loxp。将rJS2012-gG/loxp基因组、含有EGFP标记基因的BAC载体p Belo BAC11-EGFP和pcDNA3.1-cre共转染BHK-21,获得含有BAC序列插入的重组病毒rJS2012-BAC。一步生长曲线与空斑试验显示,重组病毒rJS2012-BAC在体外生长略慢于亲本病毒。本研究成功构建了含有BAC载体的重组伪狂犬病毒,为进一步建立伪狂犬病毒变异株的感染性克隆操作系统,开展变异株的分子病原学研究打下良好基础。
- 王涛童武叶超于之清梁超李国新高飞单同领于海郑浩童光志
- 关键词：细菌人工染色体CRE/LOXP系统
- 禽源H9N2亚型猪流感病毒反向遗传操作技术平台的建立被引量：3
- 2017年
- 利用RT-PCR技术扩增了禽源H9N2亚型猪流感病毒A/Swine/Guangxi/7/2007(H9N2)的8个目的基因片段,分别克隆至pBD双向转录表达载体。将8个重组质粒纯化后共转染293T细胞,54 h后收集上清,接种MDCK细胞。当拯救的病毒在MDCK细胞上增殖至第3代时,收集的细胞上清经检测具有血凝效价。经过测序分析,确定获救病毒的8个基因片段序列与野生株完全一致,表明病毒拯救成功。禽源H9N2亚型猪流感病毒反向遗传操作技术平台的成功建立为探索猪流感病毒致病机理、传播机制与基因功能研究奠定了基础。
- 刘晓敏汪琪杨海明宫晓倩阮宝阳张鹏单同领童武童光志于海
- 关键词：猪流感病毒H9N2病毒拯救
- 酵母双杂交系统筛选猪流行性腹泻病毒N蛋白互作的宿主蛋白
- <正>引言猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic d iarrhea virus,PEDV）感染引起的一种急性接触性肠道传染病,该...
- 王忠泽孔宁单同领童光志
- 文献传递
- 乙型脑炎病毒致弱株的筛选及其生长特性被引量：1
- 2013年
- 本文将乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因I型HEN0701株在BHK-21细胞上传代,并通过空斑纯化和接种小鼠来筛选弱毒株。通过空斑试验和一步生长曲线,比较弱毒株和其亲本强毒株的生长特性。结果显示,JEV HEN0701株经过在BHK-21细胞上传代100代和10轮空斑纯化,挑选获得6株克隆株。将6株克隆株经脑内和皮下接种小鼠,筛选获得一株致弱株10S3。与HEN0701相比,10S3的空斑形态比较一致;而生长曲线显示,HEN0701在BHK-21上生长速度比10S3快。
- 郑浩郑旭晨郭亦非童武刘飞张青占单同领童光志
- 关键词：乙型脑炎病毒致弱
- 宿主菌株及培养温度对乙型脑炎病毒cDNA克隆稳定性的影响被引量：2
- 2013年
- 本研究旨在探讨宿主菌株及培养温度对JEV cDNA克隆在宿主菌中稳定性的影响。选取猪源乙型脑炎病毒基因Ⅰ型HEN0701株和基因Ⅲ型SH0601株为研究对象,分别将两毒株基因组克隆中不稳定的质粒转化不同大肠杆菌菌株,并改变转化菌的培养温度,将不同条件下培养的质粒进行序列分析。试验结果表明,不同宿主菌株对重组质粒不稳定性的影响不显著;低温培养可以克服克隆序列的不稳定。对获得的突变质粒的分析结果显示,基因组5'端的3个起始密码子和E蛋白可能与质粒的不稳定性相关。
- 郑旭晨郑浩童武单同领郭亦非童光志
- 关键词：乙型脑炎病毒培养温度
