刘琦
- 作品数：22 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅高校重点实验室项目辽宁省高校创新团队支持计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 医学院校中开设基因组学课程的探索被引量：1
- 2011年
- 基因组学教学是新涌现的医学和生物学相关专业教学内容之一。本文首先介绍了国内外医学院校开设基因组学课程的情况；继而总结了中国医科大学基础医学院医学基因组学教研室在医学院校中开设基因组学课程的实践经验，在教学内容、教材的选择、教学过程中的教书育人、教学方式的选择等方面提出了建议；最后对基因组学课程教学的效果进行了评价。
- 刘琦罗阳
- 关键词：基因组学教学内容教材选择教学方式
- DOC-1R缺失型原核表达载体的构建及其重组蛋白的纯化
- 2018年
- 目的构建DOC-1R(deleted in oral cancer-I related)缺失型原核表达载体并纯化其重组蛋白,用于进一步研究DOC-1R互作蛋白及DOC-1R与其相互作用区域。方法经基因重组技术构建分别缺失DOC-1R N端1/3序列及其C端1/3序列的原核表达载体,经测序鉴定、转化至E.coli BL21菌株后,诱导表达两种缺失型GSTDOC-1R重组蛋白,并获得纯化的重组蛋白。结果两载体克隆序列及开放阅读框架均正确,经IPTG诱导在35kD处获得重组蛋白,纯化后得到大量GST-DOC-1R缺失型重组蛋白。结论成功构建了两种pGEX-DOC-1R缺失型原核表达载体,表达并纯化出GST-DOC-1R delN42、GST-DOC-1R delC42融合蛋白。
- 沈飞高锦兰王述森王世全罗阳刘琦
- 关键词：DOC-1R重组蛋白
- Cyclin G2与LDHA相互作用的鉴定分析
- 2020年
- 目的分析细胞周期素G2(cyclin G2)与乳酸脱氢酶A(LDHA)之间的相互作用及其意义。方法将LDHA全长cDNA片段分别克隆到pGEX-5X-1和p3×FLAG-CMV-14载体上,构建pGEX-LDHA原核重组蛋白表达载体和p3×FLAG-CMV-LDHA真核重组蛋白表达载体,诱导表达并纯化GST-LDHA融合蛋白,通过GST pull-down及western blot技术分析cyclin G2与LDHA的相互作用。分别转染p3×FLAG-CMV-LDHA、pEGFP-FALGCCNG2质粒到HEK293细胞使其表达,利用带有抗FLAG蛋白标签抗体的免疫沉淀凝胶进行Co-IP实验,进一步验证cyclin G2与LDHA的相互作用。结果成功构建了pGEX-LDHA原核重组蛋白表达载体和p3×FLAG-CMVLDHA真核重组蛋白表达载体。GST pull-down实验证实了cyclin G2与LDHA在细胞外的相互作用。Co-IP实验证实了cyclin G2和LDHA在细胞内的相互作用。结论 cyclin G2与LDHA在细胞内和细胞外能发生相互作用,为研究cyclin G2生物学功能奠定实验基础。
- 庄新宾侯晓宇李森高锦兰刘琦罗阳
- 关键词：免疫共沉淀相互作用
- 利用CRISPR/Cas9技术构建DOC-1R基因敲除的HEK-293稳转细胞系
- 2020年
- 目的利用CRISPR/Cas9技术敲除人胚肾(human embryonic kidney cell,HEK-293)细胞中DOC-1R,构建DOC-1R敲除的HEK-293稳转细胞系,用于进一步讨论DOC-1R的生物学功能。方法根据CRISPR/Cas9设计原则,设计向导RNA(single-guide RNA,sgRNA),构建表达载体,对sgRNA测序并转染包装HEK-293T收集上清液测定病毒滴度。前期用Cas9-puro慢病毒感染HEK-293,用已制备的DOC-1R慢病毒感染稳转Cas9的HEK-293,72 h后显微镜下观察HEK-293表达红色荧光蛋白,并用Western blot检测HEK-293中DOC-1R的表达以确定沉默效果。结果测序显示插入的sgRNA序列正确,表达载体成功构建,显微镜下观察到,90%以上HEK-293表达红色荧光蛋白,HEK-293中DOC-1R蛋白表达减少,确定了DOC-1R敲除效果最明显的序列为GCCTACCTATGCTGGCAGCA。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建DOC-1R基因敲除的细胞系,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。
- 王世全郭莹莹沈飞高锦兰邢雪莎王述森罗阳刘琦
- 关键词：DOC-1R基因敲除慢病毒
- 反复呼吸道感染婴幼儿体内维生素D营养水平的研究
- 目的：
临床上在治疗反复呼吸道感染的患儿时通常使用一些抗生素及免疫调节剂，而往往忽视了患儿是否合并有维生素D的缺乏，特别是当患儿尚无典型症状，故本实验以反复呼吸道感染的婴幼儿为研究对象，与非反复呼吸道感染婴幼儿进行...
- 刘琦
- 关键词：反复呼吸道感染维生素D缺乏婴幼儿
- 文献传递
- Lewis y抗原与CD147在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其相关性研究
- 目的:
检测Lewisy抗原及CD147在卵巢上皮性肿瘤中的表达及临床意义，并探讨Lewisy抗原与CD147表达的相关性。
材料与方法:
应用免疫组织化学法检测恶性卵巢上皮性肿瘤60例(其中高分化21...
- 刘琦
- 关键词：卵巢上皮性肿瘤CD147蛋白免疫组织化学
- DOC-1R基因重组表达载体构建及其在HeLa细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 目的 构建人DOC-1R基因重组逆转录病毒表达载体,实现该基因在体外培养细胞中的大量表达,从而研究表达蛋白的功能。方法 通过重组技术将含有FLAG标签序列的DOC-1R cDNA编码区全长克隆至逆转录病毒载体pLXSN,菌落PCR鉴定、限制性内切酶双酶切及测序验证重组载体的构建。将重组载体转染至GP-293细胞进行病毒包装并以所包装的病毒感染HeLa细胞,通过Western blot及间接免疫荧光染色检测重组DOC-1R蛋白的表达及细胞内定位。结果 测序结果表明重组载体中插入的重组片段序列及开放阅读框架正确,逆转录病毒表达载体pLXSN-FLAG-DOC-1R成功构建。Western blot及间接免疫荧光染色结果证实,逆转录病毒介导的重组DOC-1R蛋白在HeLa细胞中高效表达,表达效率明显高于真核表达载体介导的重组蛋白表达。结论 DOC-1R基因逆转录病毒表达载体成功构建,重组蛋白在体外培养细胞正确高效表达。
- 刘琦刘杏高锦兰胡西华罗阳
- 关键词：DOC-1R转染
- 野生型和突变型GDF5蛋白表达及亚细胞定位的研究
- 2012年
- 目的研究人生长分化因子5基因(GDF5)c.1118T>G(p.L373R)突变对GDF5蛋白在HEK-293细胞系表达及其亚细胞定位的影响。方法构建pDsRed1-N1-GDF5-WT和pDsRed1-N1-GDF5-L373R载体,分别转染HEK-293细胞,细胞培养72h后通过荧光显微镜观察比较野生型和突变型GDF5蛋白荧光分布情况。结果 GDF5蛋白在HEK-293细胞中成功表达,在荧光显微镜下观察到转染野生型和突变型GDF5的细胞胞浆均匀发出红色荧光,而空载体组的红色荧光则弥散于全细胞,荧光强度均匀一致。结论野生型和突变型GDF5蛋白均定位于HEK-293细胞质。
- 刘杏王述森刘琦高锦兰罗阳
- 关键词：生长分化因子5蛋白表达
- DOC-1R基因表达载体的构建及其重组蛋白的表达纯化被引量：1
- 2009年
- 目的构建DOC-1R（deleted in oral cancer-1related）的原核表达载体并且纯化其重组蛋白，用于进-步研究DOC-1R蛋白的结构与功能。方法采用基因重组技术构建原核表达载体pGEX—DOC-1R，经DNA测序鉴定后，转化E．coliB[21，IFFG诱导表达并纯化融合蛋白。结果以菌落PCR及限制性内切酶酶切鉴定得到候选阳性克隆，测序结果表明所得到的克隆序列及开放阅读框架完全正确，IPTG诱导后SDS—PAGE电泳分析表明在40kD处出现特征蛋白表达带，经磁珠亲合层析后Western印迹检测证实得到较高纯度的GST—p14 DOC-1R融合蛋白。结论成功构建了pGEX—DOC-1R的原核表达载体，表达并纯化出GST—p14 DOC-1R融合蛋白，为DOC，1R抗体制备及研究DOC-1R蛋白结合蛋白及其在细胞周期调控中的生物学功能奠定了基础。
- 刘杏刘琦王述森高锦兰罗阳
- 关键词：DOC-1R基因表达基因克隆融合蛋白
- CDK2蛋白质分子结构与其入核转运过程关系的初步分析(英文)被引量：3
- 2004年
- 应用重组技术构建野生型及缺失型CDK2基因的真核表达载体 ,分别使野生型及缺失型CDK2蛋白与增强型绿色荧光蛋白 (Enhanced greenFluorescentProtein ,EGFP)形成融合蛋白。通过脂质体介导的方法将载体转染人宫颈癌细胞系HeLa和中华仓鼠卵巢细胞系CHO ,经过细胞周期同步化处理后于荧光显微镜下观察EGFP的亚细胞定位以示踪野生型及缺失型CDK2基因的表达。结果表明 ,野生型CDK2基因的表达产物定位于细胞核 ,而两种缺失型CDK2基因分别编码的CDK2蛋白N 端 1～ 2 0 1及 98～ 2 98多肽均主要定位于细胞质。以上结果提示 ,CDK2蛋白序列中不含有与核定位直接相关的信号 ,其入核过程可能是由其N 端 1～ 97及 2 0 2～ 2 98多肽范围内的部分氨基酸共同形成高级结构 ,并依赖此高级结构与其他含有入核信号的蛋白形成复合物 ,从而被带动进入细胞核的。
- 刘琦罗阳姜莉周伟强满晓辉张学
- 关键词：CDK2增强型绿色荧光蛋白质粒转染
