刘冲
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 供职机构：清华大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 卡介苗菌MDP1基因敲除技术的研究
- 2004年
- 目的 在卡介苗中建立基因敲除技术。方法 通过分别设计两绔引物，将靶基因[DNA结合蛋白1(MDP1)基因]通过聚合酶链反应(PCR)的方法扩增得到2个片段，分别插入pKO质粒中，构建得到基因敲除质粒pKO-MDPI，电转入至卡介苗菌株细胞内并与BCG基因组中的MDP1基因同源交换，筛选出敲除菌株，并测其生长曲线。结果 通过2次PCR筛选和1次蔗糖反筛选后得到的，并在含潮霉素培养基上不能生长的菌株为MDP1基因敲除菌株，对敲除菌株与原代菌株每12h测定其菌液的60hm处吸光度(A600)值，连续16d。两者的生长速度曲线呈现“S”形，两者之间的生长速度未见明显差别。结论 pKO质粒可作为基因敲除有用的质粒载体，MDP1基因可能是影响BCG生长的因素之一，但不是惟一的因素。
- 陈效友李传友马玙刘冲王敬慧张雪峰昌增益
- 关键词：MDP卡介苗基因敲除技术BCG靶基因DNA结合蛋白
- 分枝杆菌中表达重组蛋白的新载体pMSL的构建
- 2005年
- 为了能够利用耻垢分枝杆菌表达和纯化结核分枝杆菌蛋白,构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pMSL。该质粒包括来源于牛型分枝杆菌hsp60基因启动子序列,目的蛋白插入的克隆位点和用于目的蛋白表达和定位进行跟踪的绿色荧光蛋白质(EGFP)基因,在目的蛋白插入位点和EGFP基因之间整合了凝血酶识别位点,便于融合蛋白纯化后目的蛋白与EGFP分离,在EGFP基因后面融合有6个组氨酸的密码子。结果表明,pMSL质粒能够在耻垢分枝杆菌中有效地表达绿色荧光蛋白,通过6个组氨酸尾,利用N i-NTA亲和层析柱很好地被纯化。
- 叶子坚刘冲陈效友昌增益
- 关键词：结核分枝杆菌绿色荧光蛋白纯化
- 卡介苗菌MDP1基因敲除技术的研究被引量：5
- 2004年
- 目的 在卡介苗中建立基因敲除技术。方法 通过分别设计两对引物 ,将靶基因[DNA结合蛋白 1(MDP1)基因 ]通过聚合酶链反应 (PCR)的方法扩增得到 2个片段 ,分别插入pKO质粒中 ,构建得到基因敲除质粒pKO MDP1,电转入至卡介苗菌株细胞内并与BCG基因组中的MDP1基因同源交换 ,筛选出敲除菌株 ,并测其生长曲线。结果 通过 2次PCR筛选和 1次蔗糖反筛选后得到的、并在含潮霉素培养基上不能生长的菌株为MDP1基因敲除菌株 ,对敲除菌株与原代菌株每 12h测定其菌液的 6 0 0nm处吸光度 (A60 0 )值 ,连续 16d。两者的生长速度曲线呈现“S”形 ,两者之间的生长速度未见明显差别。结论 pKO质粒可作为基因敲除有用的质粒载体 ,MDP1基因可能是影响BCG生长的因素之一 。
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- 关键词：卡介苗聚合酶链反应质粒载体
- 卡介苗菌MDP1基因敲除技术的研究
- 2003年
- 结核病依然是威胁人类健康的主要疾病之一.人类结核病的病原菌结核分支杆菌系缓慢生长菌,其在人工培养基或感染动物体内生长增殖一代约18～24小时.……
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- 卡介苗菌MDP1基因敲除技术的研究
- ＜正＞ 结核病依然是威胁人类健康的主要疾病之一。人类结核病的病原菌结核分支杆菌系缓慢生长菌,其在人工培养基或感染动物体内生长增殖一代约18～24小时。Matsumotod等在体外研究认为分支杆菌DNA结合蛋白1（myco...
- 陈效友李传友马玙刘冲王敬慧张雪峰昌增益
- 文献传递
