邓永
- 作品数：77 被引量：173H指数：8
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 应用激流灌注式生物反应器培养动物疫苗研究进展被引量：2
- 2014年
- 为更好地解决动物疫苗传统转瓶生产工艺难以适应工业化生产需要的问题,本文从生物反应器的种类、影响动物细胞规模化培养的因素、生物反应器规模化生产动物疫苗现状和生物反应器在动物疫苗生产中的应用前景四个方面对应用生物反应器规模化培养动物疫苗的研究进展进行了综述。
- 郑朝朝杨保收陈晓春吴华伟邓永郁宏伟李建丽刘涛梁武朱秀同邱贞娜柳珊
- 关键词：动物细胞生物反应器兽用疫苗
- 禽多瘤病毒VP4蛋白单克隆抗体的制备及其间接免疫荧光检测方法的初步建立
- 2024年
- 为制备禽多瘤病毒(avian polyomavirus,APV)VP4蛋白单克隆抗体,初步建立APV的间接免疫荧光检测方法,本研究通过原核表达APV VP4蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,以制备的VP4单克隆抗体为一抗,FITC-山羊抗小鼠IgG为二抗,优化反应条件。结果表明,筛选获得15株阳性细胞株,经亚型鉴定,其中2株单克隆抗体的重链为IgG2b类型,13株重链为IgG1类型,轻链均为κ型。选择3株细胞制备单克隆抗体,这3株抗VP4单克隆抗体浓度分别为2.9、2.6、3.2 mg/mL;亲和常数分别为1.06×10^(10)、2.95×10^(9)、9.60×10^(9)。其中两株效价均为1∶204800,另一株的效价为1∶51200。经Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,这3株单克隆抗体均能与APV发生特异性反应;本研究建立的间接免疫荧光检测方法的最适条件为:Anti-A-VP4-151∶1000倍稀释,4℃条件下过夜孵育,二抗1∶200稀释,37℃条件下孵育1 h。以建立的方法检测细胞中的减蛋综合征病毒(EDSV)、网状内皮组织增生症病毒(REV)、禽白血病病毒(ALV)、新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)和APV,只有APV的检测结果显示阳性,检测其他病毒的结果均为阴性。应用该单克隆抗体建立的间接免疫荧光方法在细胞上能检出至少5 TCID50 APV感染。本研究制备的单克隆抗体和建立的间接免疫荧光方法为APV感染的流行病学调查和实验室诊断奠定了基础。
- 汪溪翟天舒许冠龙王嘉孔冬妮邓永闫佳佳薛青红印春生何后军陈小云毛娅卿
- 关键词：原核表达单克隆抗体间接免疫荧光试验
- 禽多瘤病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：1
- 2023年
- 为建立检测禽多瘤病毒(avian polyomavirus,APV)的快速诊断方法,根据APV VP4基因的保守序列设计并合成引物和探针,建立了TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,验证了其特异性、敏感性和重复性,并利用建立的方法对采集的临床样本组织进行检测。结果显示,建立的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的C_(t)值与标准品在1.0×10^(9)~1.0×10^(2)copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.996,斜率为-3.021,检测下限为1.0×10^(1)copies/μL,与其他禽源病毒未发生交叉反应,重复性试验的变异系数均小于2%,重复性好,并且该方法在实际临床检测中可行。上述结果表明,建立的方法可用于禽多瘤病的早期诊断和APV快速检测。
- 闫佳佳翟天舒许冠龙王嘉孔冬妮邓永汪溪薛青红程佳毛娅卿印春生
- 关键词：VP4基因
- 表达猪瘟E2基因的重组伪狂犬病毒构建及其生物学特性分析被引量：4
- 2018年
- 以构建的TK、gI、gE、US9、部分gN基因缺失的绿色荧光标记猪伪狂犬病毒rPRV-BE为亲本株,通过同源重组构建了表达猪瘟病毒(CSFV C株)主要免疫原性基因E2的重组伪狂犬病毒rPRV-CSFV PE2SC。经PCR、间接免疫荧光试验(IFA)鉴定证实构建正确,并能成功表达E2蛋白。同时,对重组病毒在PK15细胞中的遗传稳定性、增殖特性等进行了研究,结果显示第5、10、15、20代重组病毒经PCR均能扩增出与原代重组病毒相同大小的约为3469 bp含猪瘟病毒E2基因的重组片段;第20代重组病毒感染细胞孔中出现明显的针对E2蛋白的荧光,表明重组病毒在体外连续传20代后仍能稳定遗传。一步生长曲线测定结果表明,与野毒PRV(SX株)、亲本毒rPRV-BE相比,重组病毒rPRV-CSFV PE2SC前期增殖速度较快,病毒滴度到达峰值的时间早,峰值病毒滴度低于野毒,与亲本毒相当,最高病毒滴度依次为10^(6.7)TCID_(50)/mL、10^(8.0)TCID_(50)/mL、10^(7.0)TCID_(50)/mL。结果显示构建的重组病毒具有良好的遗传稳定性及体外复制能力,为进一步对其免疫效果的评价以及PRV基因缺失重组疫苗的研制奠定基础。
- 韩爽陈晓春邓永吴华伟曹明慧李俊平夏业才
- 关键词：伪狂犬病毒猪瘟病毒基因缺失同源重组
- 我国禽用生物制品现状及禽用病毒类生物制品质量情况分析
- 2024年
- 对我国禽用生物制品基本现状及2013-2022年禽用病毒类生物制品的质量情况进行总结,分析存在的问题,提出强化SPF鸡(鸡胚)质量控制、持续开展风险监测方法研究、完善禽用标准物质、推动禽用新型生物制品研制的建议。
- 吴华伟刘丹王嘉陈晓春黄小洁孔冬妮苏佳侯力丹薛麒邓永翟天舒赵炜白洪旭薛青红
- 猪瘟活疫苗(脾淋源)污染外源性兔出血症病毒的检测与启示被引量：5
- 2011年
- 在进行2批猪瘟活疫苗(脾淋源)效力检验时,出现效力检验家兔突然死亡现象,为了查明家兔死亡原因,采用无菌检验、支原体检验、血凝试验、兔体中和试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)对疫苗或注苗后死亡家兔肝脏、脾脏混合病料进行了检测。结果显示,疫苗的无菌检验、支原体检验结果均为阴性;疫苗及注射疫苗死亡家兔肝脏、脾脏混合病料具有较低的血凝价,血凝试验结果均为可疑;在兔体中和试验中,中和组家兔2/2健康存活,未中和的疫苗对照组家兔2/2死亡;疫苗及注射疫苗死亡后家兔肝脏、脾脏混合病料的ELISA检测结果均为阳性。检测结果证实疫苗中含有兔出血症病毒(Rabbit Haemorrhagic Disease Virus,RHDV)。猪瘟活疫苗(脾淋源)污染RHDV的现象启示:应该加强猪瘟活疫苗(脾淋源)抗原制备过程的控制;同时有必要对猪瘟活疫苗(脾淋源)质量标准进行修订使之进一步补充完善。
- 高金源陈晓春韩玉玲吴华伟邓永郎洪武
- 关键词：兔出血症病毒污染
- 《中华人民共和国兽药典》二○一○年版三部非禽源细胞及其制品外源病毒检验解读
- 对《中华人民共和国兽药典》二○一○年版三部中“非禽源细胞及其制品外源病毒检验”新变化和关键点进行了解读，同时提出了完善非禽源外源病毒检验的建议。
- 吴华伟陈晓春郎洪武高金源邓永
- 关键词：兽用药品法律法规
- 猪轮状病毒L1株VP7基因克隆及序列分析被引量：2
- 2014年
- 根据GenBank已发表的猪轮状病毒VP7基因保守序列，设计特异性引物扩增猪轮状病毒L1株VP 7全基因序列并进行序列测定及分析。结果显示， L1株猪轮状病毒VP 7基因全长为1062 bp，包含一个982 bp的开放阅读框，编码326个氨基酸，与G5型参考毒株核苷酸同源性和推导的氨基酸同源性分别为88．8％～93．7％和93．3％～94．2％，系统进化树分析结果亦显示L1株与G5型参考毒株处于同一个群，由此确定L1株为G5型。与我国近几年流行的G9型毒株NMTL进行抗原表位分析结果显示，两个毒株在 aa25～aa29、aa86～aa102、aa142～aa152、aa211～aa226、aa263～aa286等区域存在明显差异，可能对其免疫保护性存在一定的影响。
- 陈晓春王继文吴华伟蔡青秀邓永高金源郎洪武
- 关键词：猪轮状病毒基因克隆
- BHK-21细胞全悬浮培养技术在新城疫疫苗生产中的应用
- 本发明涉及BHK-21细胞全悬浮培养技术在新城疫疫苗生产中的应用。本发明公开的BHK-21细胞全悬浮培养生产新城疫疫苗的工艺包括以下步骤：(1)病毒株选育：鸡胚培养的新城疫疫苗种毒接种单层BHK-21细胞，加入病毒维持液...
- 吴华伟陈晓春高艳春郎洪武邓永李俊平李慧姣夏业才
- 文献传递
- 牛病毒性腹泻病毒链特异性SYBR Green荧光定量PCR方法的建立及应用被引量：6
- 2019年
- 为了对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)复制过程中正、负链RNA进行定量检测,通过生物学软件DNAStar和Primer express 3.0设计BVDV正、负链RNA特异性反转录引物并在其5′端添加非病毒核苷酸标签序列以区分BVDV正、负链RNA。同时设计荧光定量PCR引物与非病毒核苷酸标签序列组成引物对,建立了BVDV链特异性荧光定量RT-PCR(ssRT-qPCR)方法,对其敏感性、重复性、特异性进行评估并利用所建立BVDV ssRT-qPCR对不同接毒剂量下BVDV在细胞内复制过程中正、负链RNA进行定量检测。结果表明,以构建的pMD18T-BV+和pMD18T-BV-质粒为标准品建立的BVDV正链特异性荧光定量RT-PCR方法[ss(+)RT-qPCR]和负链特异性荧光定量RT-PCR方法[ss(-)RT-qPCR]在10 2~10 7拷贝范围内具有良好的线性关系,线性相关系数分别为0.998 1和0.995 3;敏感性试验结果显示,ssRT-qPCR敏感性较好,ss(+)RT-qPCR最低检测下限为10拷贝,ss(-)RT-qPCR最低检测下限为100拷贝。重复性试验结果显示,所建立的ssRT-qPCR批内和批间的变异系数为均小于1%,方法重复性良好。特异性试验显示,所建立的ssRT-qPCR方法与牛副流感病毒3型、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒等不存在交叉反应,特异性较好。利用建立的ssRT-qPCR对不同感染剂量下细胞内BVDV正、负链RNA进行定量分析,结果显示以10、0.1 MOI剂量接种BVDV于MDBK细胞后,BVDV正、负链RNA变化呈现先升后降再逐渐上升的趋势。以1 MOI剂量感染MDBK细胞,BVDV正、负链RNA的动态变化趋势略有差异,整体呈上升趋势。10、1 MOI接毒剂量接种细胞后,BVDV正、负链RNA在感染后36 h基本维持稳定水平,以0.1 MOI接种细胞后BVDV正、负链RNA在感染后24 h即达到稳定水平。BVDV链特异性检测进一步验证了所建立方法的适用性。该研究建立了BVDV链特异性荧光定量RT-PCR方法并利用该方法对BVDV在细胞内复制过程中正、负链R
- 刘存邓永邓永梁琳张彦明崔尚金
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒荧光定量PCR方法
