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基于thyA基因的乳酸乳球菌表达系统的构建及纳豆激酶基因的克隆: 乳酸菌是一类能利用碳水化合物产生大量乳酸的革兰氏阳性细菌的通称，被公认为是安全的食品级微生物。其中乳酸乳球菌是乳酸菌研究的模式菌株，成为继大肠杆菌、枯草芽孢杆菌之后最受关注的外源基因表达宿主。为了在基因修饰时进行有效的筛...; 董慧; 关键词：大肠杆菌乳酸乳球菌嗜热链球菌纳豆激酶; 文献传递

1种快速高效提取乳酸菌质粒的方法被引量：8: 2014年; 根据碱裂解提取大肠杆菌质粒的原理与程序,借鉴Anderson和O’Sullivan的乳酸菌质粒提取方法,使酶解破壁和碱破膜变性相结合,通过优化乳酸菌质粒提取中酶浓度、酶解时间、质粒沉淀条件,提出1种高效提取乳酸菌质粒的方法。在此基础上,分析并检验该方法提取乳酸菌质粒的适用性、效率和质粒质量。结果表明：采用该方法可提取乳球菌及乳杆菌中的质粒,所提取的乳酸菌质粒不受质粒大小及拷贝数高低的影响,乳酸菌质粒的检出率和提取的成功率显著提高;提取的乳酸菌质粒达到DNA纯化后的水平,可用于酶切等分子生物学操作。操作实践表明：该方法适合乳酸菌质粒的小量提取（1.5~2 mL菌液）到中量提取（10 mL菌液）;其操作周期与大肠杆菌质粒提取检测彼此相当,而比Anderson和O’Sullivan提取检测乳酸菌质粒缩短3~4 h。本文还就乳酸菌质粒提取中的主要原理及注意事项进行探讨,以期为进一步开发乳酸菌质粒分离纯化试剂盒提供理论依据。; 张波李晨董慧寇田田许文涛田洪涛罗云波; 关键词：乳酸菌

益生菌发酵绿豆乳的菌种筛选: 2012年; 本文以分离自益生菌乳制品、微生态制剂、保健品的13株国际公认的益生乳酸菌为试验菌株,接种于纯绿豆乳培养基中进行发酵。通过检测其凝乳与否、凝乳时间、以及凝乳时pH、活菌数、感官评价等指标,筛选适宜发酵绿豆乳的繁殖力强、发酵活性高的益生菌菌株。结果表明:经过层层筛选得到的干酪乳杆菌07-211、植物乳杆菌08-193、瑞士乳杆菌05-29等三株益生菌发酵6h均可均一凝乳,有绿豆香,且凝乳时,其活菌数分别可达到3.9×108、1.6×108、1.4×108cfu/mL,凝乳时pH分别为4.16、4.30、4.32,滴定酸度分别为83.5、81.0、75.2°T,可作为新型绿豆乳制品的发酵菌株。; 刘晓宇谷新晰董慧许文涛田洪涛罗云波; 关键词：益生菌绿豆乳发酵

基于thyA基因的乳酸乳球菌的表达系统的构建及纳豆激酶基因的克隆: 乳酸菌是一类能利用碳水化合物产生大量乳酸的革兰氏阳性细菌的通称，被公认为是安全的食品级微生物。其中乳酸乳球菌是乳酸菌研究的模式菌株，成为继大肠杆菌、枯草芽孢杆菌之后最受关注的外源基因表达宿主。为了在基因修饰时进行有效的筛...; 董慧; 关键词：乳酸乳球菌纳豆激酶

抗酸奶后酸化发酵剂的开发: 李晨寇田田董慧郭鑫谷新晰卢海强李程田洪涛; 课题研究采用紫外线和亚硝基胍复合诱变的方法处理德氏乳杆菌保加利亚亚种（Lactobacillusdelbrueckiisubsp.bulgaricus）L.b-MH，选育出5株抗后酸化德氏乳杆菌保加利亚亚种，通过发酵及储...; 关键词：; 关键词：酸奶发酵剂

利用内源性插入序列IS1构建thyA缺陷型大肠杆菌: 2014年; 为获得由大肠杆菌内源性IS1序列插入胸腺嘧啶合成酶基因thyA而产生的胸腺嘧啶营养缺陷型的菌株,利用4%的葡萄糖和1.25μg/mL链霉素的培养基提高IS1的插入频率,以三甲氧苄胺嘧啶(TMP)法定向筛选thyA缺陷型菌株。通过PCR扩增与DNA测序分析突变基因的结构;测定thyA缺陷型菌株在含或不含胸腺嘧啶的基础培养基上的生长曲线以研究其生长特性;转化大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体衍生的含外源thyA基因的互补质粒pMG36e-thyA,采用抗生素抗性基因与质粒上互补的thyA基因两种方法筛选转化子,检测突变菌株在基础培养基上的恢复生长情况。诱导增加IS1的转座频率后,以含3μg/mL的TMP的GSCTt筛选培养基得到thyA缺陷型菌株,将该菌株命名为D8。PCR扩增结果显示,该突变株的thyA基因比正常基因长约800bp,测序结果显示该基因内部插入了完整的IS1序列。D8菌株需依赖外源胸腺嘧啶才能在基础培养基上生长,当转化入pMG36e-thyA后,可利用质粒上的互补基因恢复在基础培养基上的生长性能。大肠杆菌内源性插入序列IS1可插入thyA内部使该基因沉默,为利用内源性插入序列构建缺陷型菌株提供了科学基础。; 董慧李晨谷新晰寇田田郭鑫田洪涛罗云波; 关键词：大肠杆菌突变

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董慧