王世美 作品数:7 被引量:25 H指数:2 供职机构: 首都医科大学附属北京佑安医院 更多>> 发文基金: 北京市自然科学基金 北京市科技新星计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化相关胶原的影响 目的:观察TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化相关胶原的影响,并探讨其初步机制。方法:①首先筛选HSC-T6生长所能耐受的培养基中低血清浓度,MTT法检测TGF-β1对细胞增殖影响:将... 邢欣悦 郑素军 王世美 张莹 陈煜 余豪 李长勇 刘梅 刘霜 段钟平关键词:TGF-Β1 SMAD3 HSC-T6 增殖 细胞周期 肝纤维化 文献传递 TGF-β1对大鼠HSC-T6细胞增殖、细胞周期和胶原分泌的影响 被引量:15 2012年 目的观察TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化相关胶原的影响。方法采用MTT法检测细胞增殖;使用流式细胞仪检测细胞周期;采用荧光定量RT-PCR法检测SMAD3、c-myc、cdk-2、cyclinE、EGF、HGF、Bcl-2、NF-κB、MMP1、MMP9、MMP14、TIMP-1、PAI-1、α-SMA、COLⅠ及COLⅢ等基因mRNA水平;采用ELISA法检测细胞培养液COLⅠ、COLⅢ和α-SMA含量。结果与对照组比,TGF-β1处理24h及36h时,细胞形态及生长状况均无明显变化;在24h和36h时,TGF-β1处理组细胞G0/G1期细胞比率均减少(24h:57.3±8.5%vs 60.6±9.7%;36h:53.0±2.2%vs 56.6±5.0%),S期细胞比例略高(24h:30.6±7.2%vs26.4±10.1%;36h:35.2±3.7%vs 30.8±2.5%),但差异无统计学意义(P>0.05);TGF-β1处理组SMAD3、c-myc、cdk2、cyclin E、EGF、Bcl-2、NF-κB、TIMP1、PAI-1、α-SMA及COLⅠmRNA在24h和36h表达均上调,HGF、MMP1、MMP9、MMP14及COLⅢmRNA在24h时表达下调,36h时表达上调;TGF-β1处理组HSC-T6细胞分泌COLⅠ[24h:(63.0±7.4ng/ml vs 33.2±10.8 ng/ml,P<0.05;36h:58.5±6.0ng/ml vs 42.2±6.3ng/ml,P<0.05];α-SMA[24h:20.6±2.6ng/ml vs 4.2±0.7ng/ml,P<0.05;36h:59.7±14.6ng/ml vs 36.8±5.6ng/ml,P<0.05)均显著增加。结论 TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6显示了促增殖作用,并能促进肝纤维化相关胶原的分泌。 郑素军 邢欣悦 韩源平 武聚山 王世美 张莹 刘梅 陈煜 刘霜 段钟平关键词:HSC-T6 TGF-Β1 SMAD3 增殖 细胞周期 TGF-β1及靶向Smad3基因shRNA慢病毒对大鼠肝细胞系BRL-3A增殖的作用 目的探讨TGF-β1对大鼠肝细胞系BRL-3A增殖的影响,并进一步通过靶向大鼠Smad3基因shRNA慢病毒沉默TGF-β1下游的SMAD3蛋白,再次观察BRL-3A增殖的变化,初步研究TGF-β1对BRL-3A增殖影响... 王世美关键词:TGF-Β1 SMAD3 SHRNA 肝再生 文献传递 Smad3 shRNA抑制TGFβ1对HSC-T6细胞活化的抗肝纤维化作用 被引量:9 2012年 目的观察Smad3 shRNA对TGFβ1作用于大鼠HSC-T6细胞增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化胶原的影响。方法Smad3 shRNA慢病毒感染HSC-T6,应用流式细胞仪检测其感染率,Real-time PCR检测对Smad3 mRNA表达的抑制作用;将HSC-T6对照、HSC-T6+TGFβ1(10 ng/ml)、Smad3 shRNA以及Smad3 shRNA+TGFβ1(10 ng/ml)这4组细胞进行如下检测:(1)MTT检测细胞增殖;(2)流式细胞仪检测TGFβ1作用24、36 h细胞周期分布;(3)Real-time PCR检测24、36 h时细胞周期、增殖及肝纤维化相关基因mRNA的表达变化;(4)ELISA检测24、36 h培养液上清中胶原蛋白(COL)Ⅰ、COLⅢ及α-SMA的含量。结果Smad3 shRNA慢病毒感染HSC-T6细胞至96 h,感染率为71.3%,对Smad3 mRNA的表达抑制率为50%。(1)MTT结果显示,TGFβ1促进HSC-T6增殖;与相应未感染Smad3 shRNA病毒组相比,Smad3 shRNA组以及Smad3 shRNA+TGFβ1组细胞增殖能力均下降。(2)细胞周期检测发现,24、36 h时,Smad3 shRNA+TGFβ1组与Smad3 shRNA组相比,细胞周期分布差异无统计学意义(P>0.05);(3)Real-time PCR显示,Smad3 shRNA+TGFβ1组较HSC-T6+TGFβ1组,Smad3、原癌基因(c-myc)、细胞周期依赖性激酶-2(CDK-2)、细胞周期素E(cyclin E)、表皮生长因子(EGF)、核因子-κB(NF-κB)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、COLⅠ及基质金属蛋白酶(MMP)14等基因的mRNA在24、36 h表达均下调,HGF mRNA及COLⅢmRNA在24 h时上调、36 h时下调,Bcl-2 mRNA、MMP1 mRNA及MMP9 mRNA在24 h和36 h两个时段均表达上调。(4)ELISA检测发现,同一时间点比较,分别在24、36 h,TGFβ1可促进HSC-T6细胞COLⅠ(P=0.00,P=0.02)、α-SMA(P=0.00,P=0.01)的分泌;与HSC-T6+TGFβ1组相比,Smad3 shRNA+TGFβ1组COLⅠ于36 h分泌减少(P=0.00)、而α-SMA在24、36 h两个时间点分泌减少(P=0.00)。结论 Smad3 shRNA抑制了TGFβ1对HSC-T6的活化,显示了抗肝纤维化作用。 郑素军 邢欣悦 武聚山 王世美 张莹 韩源平 俞豪 陈煜 刘梅 段钟平关键词:SMAD3 肝病中TGF-β与microRNAs相互作用的研究 被引量:1 2011年 TGF-β在肝病中发挥了复杂而关键的作用,与肝病的发生、发展和预后密切相关。microRNAs主要通过与靶mRNA的3'UTR结合,剪切mRNA或抑制蛋白质翻译,在转录后水平调节基因的表达。近来研究显示,TGF-β与microRNAs相互作用,参与调节肝病的发生发展。现将两者在肝纤维化、肝再生、肝脏发育和肝细胞癌中的相互调节作用做一概述。 王世美 郑素军 段钟平关键词:TGF-Β MICRORNA 肝细胞再生 肝细胞癌 TGF-β1对大鼠肝细胞系BRL-3A凋亡和细胞周期的影响 被引量:2 2011年 目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肝细胞系BRL-3A凋亡和细胞周期的影响.方法:MTT法检测TGF-β1对细胞增殖的影响:将BRL-3A细胞分为6组,分别给予不同浓度的TGF-β1(0、2、4、6、8、10μg/L),检测各组细胞24、36、48h时的增殖活性;进一步将BRL-3A细胞分为TGF-β1处理组和对照组,分别给予和不予TGF-β1(8μg/L),进行如下检测:流式细胞仪检测两组细胞24、36、48h时的凋亡情况和细胞周期分布;实时定量RT-PCR检测两组细胞24、36、48h时CyclinE、Cdk-2、EGF、HGF、Bcl-2、c-Myc、MMP9、NF-κB基因的表达变化.结果:MTT结果显示,各浓度TGF-β1组在24、36、48h时的细胞增殖活性差异无统计学意义;流式细胞仪分析结果显示,TGF-β1处理组24、36、48h时的细胞凋亡率和细胞周期分布与对照组间的差异均无统计学意义;实时定量RT-PCR发现,TGF-β1处理组相对于对照组,CyclinEmRNA、Cdk2mRNA、EGFmRNA在24h时分别下调至0.194±0.103、0.181±0.064、0.634±0.116倍,36h时分别下调至0.379±0.173、0.457±0.123、0.619±0.112倍,48h时分别上调至1.956±0.215、2.17±0.471、7.66±0.437倍;HGFmRNA在24、36、48h时均明显下调,分别至0.152±0.068、0.146±0.053、0.158±0.061倍;Bcl-2mRNA在24、36h时无统计学差异,48h时上调至1.567±0.115倍;c-MycmRNA、MMP9mRNA、NF-κBmRNA在3个时刻均上调,24h时分别至1.742±0.389、3.484±0.411、1.625±0.369倍,36h时分别至2.292±0.361、1.563±0.323、1.486±0.494倍,48h时分别至2.499±0.475、2.233±0.493、3.612±0.364倍.以上基因表达差异均有统计学意义(P<0.05).结论:大鼠肝细胞系BRL-3A对TGF-β1促凋亡和细胞周期阻滞作用的敏感性低下,可能与非Smads途径的激活,NF-κB、Bcl-2、c-Myc、MMP9表达的上调有关. 王世美 郑素军 邢欣悦 邓志华 刘梅 俞豪 李长勇 段钟平关键词:转化生长因子Β1 细胞周期 肝再生 Smad3shRNA抑制TGFβ1对HSC-T6细胞活化的抗肝纤维化作用 [目的]:观察Smad3 shRNA对TGFβ1作用于大鼠HSC-T6细胞增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化胶原的影响。[方法]:Smad3 shRNA慢病毒感染HSC-T6,应用流式细胞仪检测其感染率,Real-timeP... 郑素军 邢欣悦 武聚山 王世美 张莹 韩源平 俞豪 陈煜 刘梅 段钟平文献传递