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李丰生

作品数：22 被引量：53H指数：5
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相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 21篇期刊文章
  • 1篇科技成果

领域

  • 10篇医药卫生
  • 9篇农业科学
  • 3篇生物学

主题

  • 11篇基因
  • 10篇杆菌
  • 9篇克隆
  • 8篇大肠杆菌
  • 6篇基因克隆
  • 5篇免疫
  • 5篇腹泻
  • 4篇抗原
  • 3篇疫苗
  • 3篇仔猪
  • 3篇痢疾
  • 3篇免疫原性
  • 3篇工程菌
  • 3篇K99
  • 2篇毒素
  • 2篇亚克隆
  • 2篇质粒
  • 2篇人型结核杆菌
  • 2篇溶酶
  • 2篇溶酶原激活剂

机构

  • 22篇军事医学科学...
  • 3篇佳木斯医学院
  • 2篇解放军农牧大...
  • 1篇宁夏大学
  • 1篇解放军第30...
  • 1篇中国人民解放...
  • 1篇中国人民解放...

作者

  • 22篇李丰生
  • 21篇黄培堂
  • 9篇黄翠芬
  • 9篇芮贤良
  • 5篇冯书章
  • 4篇徐秀英
  • 4篇王叙甫
  • 4篇钟声
  • 3篇刘子
  • 3篇陈添弥
  • 3篇苏国富
  • 3篇王庆元
  • 3篇刘晓明
  • 2篇庄玉辉
  • 2篇吴雪琼
  • 2篇李淑琴
  • 2篇徐永强
  • 2篇张兆山
  • 2篇刘晓明
  • 2篇陈明

传媒

  • 4篇生物工程学报
  • 2篇生物技术通讯
  • 2篇传染病信息
  • 2篇微生物学报
  • 2篇中国科学（B...
  • 2篇中国兽医科技
  • 2篇生物化学杂志
  • 1篇中国现代医学...
  • 1篇中国兽医学报
  • 1篇中国畜禽传染...
  • 1篇军事医学科学...
  • 1篇中国人兽共患...

年份

  • 1篇1999
  • 3篇1996
  • 1篇1995
  • 4篇1994
  • 4篇1993
  • 3篇1992
  • 3篇1991
  • 2篇1990
  • 1篇1989
共 22 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
痢疾志贺氏Ⅰ型菌毒素基因的克隆与表达被引量：1
1991年
从痢疾志贺氏Ⅰ型菌 W30864株中提取染色体 DNA,用 EcoRI 完全酶解,电泳回收3—7kb 的片段,与载体 pUC19质粒连接重组,用大肠杆菌痢疾样毒素(SLT)基因探针进行筛选,得到了阳性重组子。实验表明志贺氏毒素基因是位于约4.5kb 的 EcoRl 片段上,包含毒素的 A 亚单位基因和 B 亚单位基因。在对克隆株的毒性测定中,采用 Hela-S3细胞试验,证明所产生的痢疾毒素具有杀死细胞的能力。此毒素可引起肠积水和充血,可使小鼠肢体麻痹并致死,克隆重组株的痢疾毒素产量是亲本野生株 W30864的16倍。此外,实验中还对克隆株和产生 SLT 的菌株的毒素产量做了比较。
李丰生黄培堂芮贤良黄翠芬
关键词：痢疾志贺氏菌毒素基因克隆
大肠杆菌肠毒素ST_(1b)基因的亚克隆及其核苷酸序列分析被引量：3
1994年
以大肠杆菌pSLM004菌株为始发菌株,利用合成的一对与ST_1基因特定序列相匹配的引物,通过PCR扩增出了ST_(1b)基因。该基因片段扩增物经适当纯化,与克隆载体pUC18的HincⅡ切点平端连接,转化到受体菌JM101中。利用Ap抗性作为压力选择标志以及LacZ基因插入失活显色反应,在Ap/Xgal-IPTG培养基上,筛选出转化子。将白色菌落转化子经酚/氯仿法抽提重组质粒,利用所扩增ST_(1b)基因片段上所设计的BglⅡ位点及pUC18载体具有的PvuⅡ切点,经酶切反应鉴定重组子,得到了理想重组子pBST2-6。该重组质粒经双脱氧法双向核苷酸序列分析,确定了插入的ST_(1b)基因与载体的连接向位及其全部核苷酸序列。
冯书章刘晓明刘子李丰生张瑜红黄培堂
关键词：基因克隆大肠杆菌
人型结核杆菌克隆DNA探针的制备及其应用的研究被引量：1
1999年
用限制性内切酶ＰｓｔⅠ消化人型结核杆菌Ｈ３７ＲｖＤＮＡ，与质粒ｐＵＣ１９ＤＮＡ连接后转化大肠杆菌，经同位素３２Ｐ标记的人型结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ全染色体ＤＮＡ探针筛选出６个阳性克隆（ＭＴ１～６），其中克隆ＤＮＡ片段ＭＴ２（４．２Ｋｂ）、ＭＴ４（３．５Ｋｂ）和ＭＴ５（３．０Ｋｂ）标记成探针，检测了２２种分支杆菌标准株和１５株人型结核杆菌临床分离株以及２种非分支杆菌，其杂交结果完全相同，与人型结核杆菌及其临床分离株杂交阳性，与牛型结核杆菌、卡介苗、堪萨斯分支杆菌、鸟分支杆菌、胃分支杆菌、龟分支杆菌和戈登分支杆菌ＤＮＡ有交叉杂交，与其它１２种分支杆菌以及大肠杆菌、星状诺卡氏菌不杂交。克隆ＤＮＡ探针可能成为分支杆菌分类、鉴定的一种新工具。
吴雪琼庄玉辉黄蓉蓉黄蓉蓉黄蓉蓉
关键词：结核杆菌DNA探针
痢疾志贺氏毒素B亚单位在大肠杆菌中的高效表达被引量：4
1993年
本文从痢疾志贺氏Ⅰ型菌W30864的染色体克隆了编码志贺氏毒素(Stx)的基因,表达Stx的基因位于约4.5kb的EcoR1片段内。一系列的生物学试验表明:我们构建的杂种质粒(pMGC001)能产生Stx,产量为亲代株的16倍,克隆株不仅有细胞毒和肠毒作用,而且还有神经毒性。我们又从质粒pMGC001将志贺氏毒素的B亚单位(Stx-B)的基因克隆至表达载体pJLA503,获得了Stx-B在大肠杆菌中的高效表达,Stx-B已被纯化,其特异的多克隆和单克隆抗体也被制备。Western blot表明它们能与Stx-B进行特异的抗原抗体反应。
苏国富李丰生黄培堂芮贤良黄翠芬
关键词：痢疾基因克隆
羔羊大肠杆菌腹泻双价基因工程菌毛苗应用的研究
1994年
对２９１只怀孕母羊皮下注射菌毛苗０．５ｍｇ／只，其局部和全身均无任何不良反应，不会造成母羊流产、早产及羔羊畸形，进一步证明该菌毛苗安全性好。应用菌毛苗主动免疫的怀羔母羊所产羔羊通过吃初孔获得被动免疫，攻毒结果，保护率均在８０％以上，证明该苗具有较强的Ｋ＿（９９）和Ｆ＿（４１）免疫原性，可使羔羊获得确实的被动免疫，对羔羊的生长发育产生良好的影响。
郭海尹德萱郭湘林阎治川张治平牛风兰常晓琴马岚兰牛冬梅黄培堂王叙甫王焕金陈明李丰生
关键词：大肠杆菌基因工程绵羊疫苗
预防仔猪腹泻无抗性基因工程菌株的构建被引量：5
1990年
以原来含热不稳定肠毒素B亚单位基因质粒DNA为载体,插入lacZ基因,构建了一个既能表达LT-B亚单位又能表达β-半乳糖苷酶的含四环素抗性基因的重组体。在该重组DNA的四环素抗性基因内再插入K88粘附因子抗原基因,从而灭活了四环素抗性基因。经测定该重组体能表达LT-B和K88两种抗原;lacZ基因取代四环素抗性基因,成为良好筛选标记。所构建的重组质粒能稳定存在。
黄培堂程军李丰生徐香张群伟陈添弥黄翠芬
关键词：仔猪腹泻抗性基因基因表达
志贺氏毒素B亚单位基因的克隆与表达及其免疫保护作用的研究
1995年
本研究首次从野生的志贺氏Ⅰ型痢疾杆菌(简称志Ⅰ)克隆了志贺氏毒素基因,其表达量为野生株的16倍。经次级克隆获得无毒性而有保护作用的志贺氏毒素 B 亚单位在大肠杆菌的高效表达,B 亚单位被纯化至电泳纯,分别制备了 B 亚单位特异的多克隆和单克隆抗体,其研究深度达国际先进水平。对 B 亚单位作为口服苗的一系列条件进行深入研究,分别将 B 亚单表达在细胞周质、细胞表面、分泌至胞外和与 LacZ 融合,观察哪一种表达方式在小鼠内引起更好的免疫反应;采用了四种不同的启动子和二种克隆载体,探索了哪一类启动子和克隆载体适用于构建口服苗。结果表明,中等强度、不需诱导和体内诱导的启动子和
苏国富徐永强李丰生芮贤良黄培堂黄翠芬
关键词：克隆载体多克隆免疫保护作用痢疾杆菌表达量
组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)全长cDNA序列的克隆及表达被引量：1
1994年
在先前获得t—PA部分编码序列的基础上,用化学合成法合成了缺少的5′端部分序列,并经多次重组获得了含有t—PA全长cDNA的重组表达质粒pMG-601。经序列分析表明该cDNA序列是正确的,将其导入暂时表达系统COS-7细胞中,能产生有特异性的t—PA产物。将其导入CHO细胞中,经MTX加压扩增,获得产t-PA的细胞株,其表达水平约为400～500IU/(10~6cells·24hr)。
黄培堂徐秀英郭建辉程军李丰生方继明石成华黄翠芬
关键词：基因克隆
志贺氏福氏5型菌外膜蛋白ipa BC基因的高效表达及其免疫保护作用的研究
1993年
芮贤良徐永强苏国富黄培堂李丰生罗素英黄翠芬
关键词：外膜蛋白免疫保护基因表达
表达K_(99)和F_(41)双价保护性抗原工程菌株的构建及免疫效果研究被引量：10
1993年
本文应用基因重组技术,将引起犊牛、羔羊大肠菌腹泻的主要致病因子的保护性抗原基因K_(99)和F_(41)从野生株先分别克隆,然后组构成同时表达两种抗原的工程菌疫苗候选株。研究了该工程菌表达的两种抗原的性质,影响表达的条件。同时经过免疫怀孕母羊然后进行人工攻毒及田间大面积免疫羊群,证明该工程疫苗候选株能有效诱发机体的免疫应答,对羔羊有显著地保护作用。
黄培堂李丰生王叙甫钟声徐秀英张群伟王焕金陈明黄翠芬
关键词：基因克隆ETEC抗原大肠杆菌
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